MiR-155靶向talin-1基因调控柱状黄杆菌胞外多糖诱导的EPC细胞凋亡

为研究miR-155在柱状黄杆菌胞外多糖(FC-EPS)诱导的细胞凋亡中的作用机制,本实验采用RNA干扰(RNAi)技术,通过过表达miR-155和敲降踝蛋白基因(talin-1),皆能抑制FC-EPS诱导的细胞凋亡,并鉴定出talin-1为miR-155的靶蛋白。在FC-EPS诱导细胞凋亡的过程中,踝蛋白水平显著升高,在凋亡发生阶段检测到凋亡执行蛋白Caspase-3的活化,同时检测到2条踝蛋白剪切异构体,大小分别约为200 ku和250 ku;将构建的鲤Talin-1真核表达质粒转染鲤上皮瘤细胞(EPC),过表达的Talin-1延迟且延长了细胞凋亡的进程,并检测到上述2条踝蛋白异构体。然而,当以FC-EPS转染EPC细胞时,Talin-1先下降再恢复到正常水平,细胞不发生凋亡。因此,在FC-EPS诱导细胞凋亡的过程中,细胞通过上调miR-155来调控靶基因talin-1 mRNA和蛋白转录的变化,以及产生Talin-1蛋白异构体来抑制细胞发生凋亡。本研究为有效防治柱状黄杆菌疾病提供新思路。

食管鳞癌组织中talin mRNA的表达及其与浸润转移的关系

目的:检测食管鳞癌组织中talin mRNA的表达,并探讨其与食管鳞癌发生及浸润转移的关系。方法:应用原位杂交方法检测60例食管鳞癌组织及其相应的30例癌旁不典型增生组织和20例正常食管黏膜组织中talin mRNA的表达。结果:食管鳞癌组织中talin mRNA阳性表达率低于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P<0.05)。食管鳞癌组织中talin mRNA阳性表达与临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关(均P<0.05),而与患者年龄、性别及分化程度无关(均P>0.05)。结论:人食管癌组织中talin mRNA表达明显降低,talin的低表达有望成为食管癌恶性转化及与其浸润转移有关的一种新的标志物。

FMNL2、Src、Talin在大肠癌细胞中的表达及其与调控的关系

目的:探讨上调或下调FMNL2表达与大肠癌细胞侵袭能力,以及该基因与Src、Talin表达的相关性.方法:将FMNL2-CT过表达重组慢病毒颗粒转染SW480和HT29大肠癌细胞,构建FMNL2干扰质粒沉默SW620大肠癌细胞,通过侵袭实验观察FMNL2表达量与细胞侵袭能力关系;Westernblot检测转染前后细胞Talin、Src表达情况,及PP1处理前后Talin、Src、FMNL2三种蛋白表达变化;荧光免疫共定位检测FMNL2、Src、Talin大肠癌细胞内定位.结果:高表达FMNL2的癌细胞侵袭能力较低表达者显著提高(51.20±8.00vs38.00±4.00,P<0.05).随着大肠癌细胞内FMNL2蛋白表达量的升高或降低,Src蛋白也上升或降低(F=15.659,P<0.05),Talin则反之(SW480F=540.595,HT29F=163.816,SW620F=125.507,P<0.01).PP1处理阻断Src通路后,FMNL2、Src蛋白含量均无明显变化,而Talin蛋白表达量随之减低.免疫共定位检测FMNL2与Src或Talin在胞浆和胞膜上存在共定位关系.结论:FMNL2可以显著促进结直肠癌细胞的侵袭能力,FMNL2处于上游参与调控Src、Talin表达,并可能通过Src间接影响Talin的表达进而参与对黏附斑转换的调控.

化瘀消癥颗粒调控Talin1抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭迁移的研究

目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法制备化瘀消癥颗粒含药血清,CCK8实验检测不同浓度化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响并筛选后续实验药物浓度,划痕实验、Transwell实验检测化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中Talin1、MMP-2、N-cadherin、Snail、Rap1GAP、ITGB3的mRNA和蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清可抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭和迁移;与空白对照组比较,化瘀消癥颗粒含药血清可下调侵袭相关因子Talin1、MMP-2、N-cadherin、Snail、Rap1GAP、ITGB3的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论化瘀消癥颗粒含药血清可能通过调控Rap1/Talin1/ITGB3通路而下调Talin1表达来发挥杀胚作用。

Talin1在输卵管妊娠患者的输卵管和绒毛中高表达并促进妊娠滋养细胞的侵袭

目的验证Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达差异及对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响,探讨其作用机制。方法采用免疫组化及Western blot检测Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达定位及蛋白表达差异;HTR-8/SVneo细胞内转染Talin1 siRNA,划痕实验及Transwell实验检测Talin1对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRTPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Snail的表达。结果正常输卵管组织及妊娠输卵管组织中均可检测到Talin1的阳性表达,主要表达于纤毛细胞的细胞质中;妊娠输卵管组织中Talin1的蛋白表达高于正常输卵管组织(P<0.01);输卵管妊娠绒毛中Talin1表达高于宫内妊娠绒毛(P<0.01);沉默Talin1抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭(P<0.01)和迁移(P<0.05);Talin1下调HTR-8/SVneo细胞中N-cadherin、MMP-2、Snail的表达(P<0.05),上调MMP-9的表达(P<0.05)。结论输卵管妊娠患者的输卵管组织及绒毛中Talin1的表达显著升高,输卵管妊娠的发生可能和Talin1调控妊娠滋养细胞的侵袭相关。

绿色荧光蛋白基因结合鼠Talin基因蛋白标记转基因水稻未成熟花粉的微丝骨架(英文)

利用绿色荧光蛋白基因结合鼠Talin基因表达技术及水稻转基因技术 ,在未成熟花粉发育期 (即生殖细胞在形成后从靠壁部位移向中央部位的阶段 )的水稻 (OryzasativaL .)内发现了一系列前人未曾报道过的微丝骨架的形成和多变过程。在这一发育阶段 ,未成熟花粉内的生殖细胞呈圆形 ,中央部位存有一个大液泡 ,大量微丝在细胞的中央胞质内形成。微丝首先在营养核的核膜表面形成两个集结中心 ,中心内的微丝呈短粗状。尔后 ,中心微丝不断延长 ,最终在细胞中央的胞质内形成一个非常复杂的类似多个纺锤体结合在一起的网络结构。这一网络的中间部位经常包围着营养核和生殖细胞 ,网络的部分微丝则与存在周缘细胞质 (或称周质 )的微丝网络形成连接 ,在连接点部位则形成一些由微丝环状组成的结构。

细胞骨架蛋白Talin、Vinculin在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨Talin、Vinculin在胃癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测Talin、Vinculin在正常胃黏膜、高级别上皮内瘤变胃黏膜及胃癌中的表达,采用SPSS 13.0统计分析软件分析其表达水平与临床病理特征的关系及二者的表达相关性。结果 Talin、Vinculin在正常胃黏膜及高级别上皮内瘤变胃黏膜中高表达,在胃癌中表达降低。在进展期胃癌中,两者的表达与肿瘤分期、浸润深度显著相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度等无关(P>0.05),且Talin、Vinculin的表达明显相关。结论 Talin、Vinculin的表达与胃癌分期相关的特点可用于辅助评价胃癌患者术后生存率。Talin、Vinculin表达阴性的胃癌病例,高度提示预后不良,术后生存率低。

人源His-talin1原核表达载体的构建及其蛋白表达

目的克隆人源talin1 cDNA,构建其高效原核表达载体,并纯化得到高纯度His-talin1融合蛋白。方法 PCR法扩增talin1基因并连接到原核表达载体pET32a(+),筛选和测序鉴定阳性克隆。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达和亲和层析分离纯化表达产物,对纯化的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果成功扩增了2.4kb的talin1基因,构建了pET32a(+)-talin1重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达出His-talin1融合蛋白。经SDS-PAGE和Western blot方法 ,验证了高纯度纯化的融合蛋白。结论建立了高效稳定的His-talin1表达体系,为进一步研究Talin1蛋白的结构及其与P-selectin之间的关系打下基础。

GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化

应用PCR方法扩增talin1的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST-talin1融合蛋白,为下阶段深入的研究talin1的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础。经酶切、序列鉴定,选择正确重组子,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用G lutath ione Sepharose 4B柱纯化,western b lot鉴定。克隆得到了一个2400bp的talin1的cDNA片断,重组质粒目的DNA测序正确,纯化出分子量约为121.6kD的融合蛋白。用基因工程方法使GST-talin1重组质粒在原核细胞表达并成功纯化出GST-talin1融合蛋白。

Talin:细胞黏附动力学过程的关键蛋白

持续、协调的细胞黏附的形成、解体过程,对细胞转移是必不可少的,Talin蛋白在其中起至关重要的作用.介绍了细胞黏附的类型、功能,重点阐述了Talin蛋白的结构、与其他黏附组成蛋白的相互作用,以及在黏附的形成、解体过程中的重要地位,从而明确了Talin蛋白为细胞黏附动力学过程的关键蛋白.

Talin与整合蛋白的激活

整合蛋白的激活是通过细胞内信号来调控的,通过对整合蛋白胞质结构域的作用,诱导整合蛋白胞外结构域构象产生变化,从而导致整合蛋白对配体亲和力的增加。近来的研究结果表明talin与整合蛋白β尾部的结合是整合蛋白激活通路中最重要的环节。

大肠癌组织中talin mRNA的表达及意义

目的探讨踝蛋白(talin)mRNA在大肠癌组织中的表达变化及其在大肠癌发生、发展中的作用。方法采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)方法检测41例大肠癌及癌旁正常组织中talin mRNA的表达。结果talin mRNA在大肠癌组织中的表达量为126535 copy/μg RNA,而在癌旁正常组织中为22689376 copy/μg RNA,两者相比,P<0.01;有淋巴结转移的大肠癌较无转移者talin mRNA表达低,P<0.01;癌组织浸润越深,talin mRNA表达越低,P<0.01。结论talin mRNA在大肠癌中表达降低;talin与大肠癌的浸润、转移有关,可作为大肠癌发生、发展的预测指标之一。

整合素激活因子Talin蛋白棒状结构域的双螺旋束结构研究

Talin能够激活整合素（integrin），同时作为连接细胞骨架与跨膜受体整合素的桥梁，在细胞黏附、迁移等过程中发挥着关键的调控作用．整合素的激活反应是通过Talin-FERM结构域的F3结合整合素β亚基的胞内尾段来完成的．Talin在体内存在自抑制与活化两种状态，我们之前解析的F2F3/R9复合物结构显示，在自抑制状态下，整合素结合位点F3与其尾部片段Talin-R9（1654～1822 a.a.）结合，此时整合素不能被活化．然而，Talin作为一个270 ku的大蛋白，除了F3和R9以外的部分在Talin自身的活化过程中如何协同发挥作用，至今仍是未知的．我们分别解析了Talin R9-10（1654～1973 a.a.）、R10-11（1815～2140 a.a.）的双螺旋束晶体结构，单独的R9、R10、R11均为5-螺旋的螺旋束结构，R9-10之间通过一条长α螺旋连接，R9和R10交错排列在该螺旋的两侧，夹角约为150°；R10-11之间的柔性连接区在周围氢键网络的稳定下，使R10和R11形成了约120°的夹角．晶体结构中观察到的夹角与前人的小角散射及电镜结果相吻合．结合已有的R7-8、R11-12结构进行重叠，得到的R7-12拼接结构模型表现为伸展的长棒状，R8则凸出于长棒之外；R10-12不影响F3的结合，而R8不仅在空间上遮盖了F3的结合位点，而且可能通过电荷排斥F2F3．凝胶排阻层析实验也证实了这一点．本工作为进一步阐释Talin的自抑制机制提供了分子基础．

Talin2通过Caspase3信号通路调控乳腺癌细胞侵袭

目的通过Talin2 shRNA慢病毒感染MDA⁃MB⁃231细胞构建Talin2 knockdown稳定细胞系,研究Talin2对MDA⁃MB⁃231细侵袭的影响,分析Talin2通过细胞凋亡途径在乳腺癌发生和发展中的作用和机制。方法构建慢病毒感染乳腺癌细胞MDA⁃MB⁃231,筛选稳定表达慢病毒shRNA空载和Talin2 shRNA的细胞系,Talin2 knockdown对MDA⁃MB⁃231细胞侵袭能力、细胞凋亡以及细胞凋亡信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果(1)Talin2 knockdown可以抑制肿瘤细胞MDA⁃MB⁃231的侵袭能力。(2)对照组细胞的凋亡率是(8.07±0.933)%,Talin2 knockdown细胞凋亡率分别为(25.23±1.398)%和(29.73±1.452)%,两者较对照组升高了大约65%(P<0.001)。Talin2 knockdown明显促进乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞的凋亡。(3)Western Blot检测knockdown和对照组中磷酸化Caspase⁃3水平,结果显示Talin2 knockdown组显著高于对照组。结论Talin2 shRNA慢病毒干扰乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞后,乳腺癌MDA⁃MB⁃231侵袭浸润能力明显下降并促进了乳腺癌细胞的凋亡,提示Talin2与乳腺癌的发生发展、迁移密切相关。

β3整合素/Talin F3复合物拉伸分子动力学模拟

目的血小板上β3整合素作为膜上重要的信号分子,以独特的转导通路双向传递跨膜信号,在血小板凝止血功能的发挥中起着重要的作用。通常在Inside-out通路中,Talin在PIP3激酶的作用下与β3整合素结合,并桥接actin以力-化学偶联的调控机制诱导整合素的活化。研究β3整合素与Talin F3复合物在不同受力状态下的构象变化和力学稳定性,揭示其分子动力学机制,对深入了解Talin介导的整合素活化的结构基础有重要意义。方法从晶体结构(PDB:1MK7)出发,构建整合素β3/Talin F3复合物的分子体系,利用VMD软件添加水框,采用周期性边界条件、CHARMM22力场,以NAMD 2.13软件对体系施行热平衡、恒速度拉伸分子动力学模拟;选取拉伸过程中对应的不同受力构象进行恒力拉伸模拟,分析比较不同拉伸情况下的构象稳定性、氢键网络变化。结果恒速拉伸过程中,复合物表现出两种不同的解离状态,其在断裂力、断裂时间和断裂方式上存在明显差异,氢键Asp740-Arg359在抗拉力解离过程中发挥了关键作用。在小于60 PN的低力拉伸下,复合物表现为逆锁键,解离概率随力的增加而降低,氢键数目、结合面SASA值则逐步上升,当力大于60 PN,表现为滑移键,其中残基Ala742、Asn744、Tyr747在力稳定性调控中扮演重要角色。结论:整合素β3/Talin F3复合物结合亲和力存在双相力依赖特性,不同的恒力可以诱导出具有不同亲和力的复合物构象,适当力的施加有利于提高β3整合素与Talin的结合亲和力。

Talin-1与原发性肝癌的侵袭和迁移

目的探讨Talin与不同来源人肝癌细胞侵袭及迁移的关系,进而为进一步研究Talin与肝癌的侵袭和迁移的可能机制提供理论基础。方法体外培养人高转移肝癌细胞株(MHCC-97H细胞株)、人低转移肝癌细胞株(MHCC-97L细胞株)、人肝癌SMMC-7721细胞株、人肝癌Be L-7402细胞株、人肝癌He PG-2细胞株及人正常肝脏细胞株(LO2细胞株),RT-PCR技术检测各细胞株中Talin-1的mRNA表达水平,Western-blot技术检测各细胞株中Talin-1的蛋白表达水平,Transwell侵袭和迁移实验及细胞划痕实验检测各细胞株侵袭及迁移能力,软琼脂集落形成实验检测各细胞株增殖和克隆能力。结果五种人肝癌细胞株中Talin-1的mRNA表达水平不同(P<0.05),五种人肝癌细胞株中Talin-1蛋白表达水平不同,MHCC-97L细胞株中Talin-1的蛋白表达比LO2细胞株高(P<0.05);五种人肝癌细胞株的侵袭能力不同(P<0.05),五种人肝癌细胞株的迁移能力不同(P=0.0000),与正常人肝脏细胞相比,五种人肝癌细胞株的增值和克隆能力不同(P=0.00017)结论 Talin-1与肝癌的侵袭和迁移能力相关;高表达Talin-1的原发性肝癌的侵袭和迁移能力低,恶性度低,低表达Talin-1的原发性肝癌的侵袭和迁移强,恶性度高,Talin-1可作为原发性肝癌恶性度的预测指标之一。

Talin2与肿瘤侵袭和转移关系的研究进展

Talin作为ECM-整合素-细胞骨架间相互作用的关键分子之一,对肿瘤的生长和转移起着至关重要的作用。Talin通过与纽蛋白、FAK和肌动蛋白结合将"由外向内"整合素信号传递到细胞中,发挥信号转导器作用早已明确;Talin两个基因TLN1和TLN2,编码Talin1和Talin2;Talin2近年来成为研究热点。本文总结了Talin的基本结构与功能、Talin2调节细胞黏附到ECM的功能、肿瘤细胞黏着动力学和转移、侵袭、凋亡关系研究的最新进展。

血清Talin-1在原发性肝细胞癌早期诊断中的作用

目的研究原发性肝细胞癌(hepatoce lloular carcinoma,HCC)患者血清中的踝蛋白1(Talin-1),并与传统的生物学标志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)相比,探讨其在HCC早期诊断中的作用。方法采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测120例血清样本中的Talin-1,包括HCC血清40例、肝硬化(liver cirrhosis,LC)血清40例、健康对照组血清40例。结果用ROC曲线创建一个Talin-1相对于AFP的诊断预测模型。HCC组Talin-1血清中的表达水平高于其他组(P<0.05)。在HCC的诊断中,Talin-1诊断的准确性明显高于AFP相关的敏感性、特异性。结论 Talin-1在HCC的早期诊断中可能是一个潜在的标志物,并具有比传统的生物学标志物AFP更高的敏感性和特异性。

Talin、vinculin在食管癌中的表达及其临床意义

目的:探讨踝蛋白(talin)、纽蛋白(vinculin)在食管癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化法检测52例食管癌中的talin、vinculin表达。并分析两者的表达水平与临床病理特征的关系。结果:食管癌组织中talin与vinculin阳性表达率分别为59.6%(31/52)和63.5%(33/52),两者的表达均与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和肿瘤分期显著相关(P<0.01),而与患者年龄、性别、肿瘤分化程度无关(P>0.05)。talin与vinculin之间在食管癌组织中表达呈显著正相关;Kaplan-Meier生存曲线显示talin和vinculin阳性表达者术后生存率显著高于阴性表达者。结论:talin和vinculin的表达对预测食管癌预后有重要的临床意义。

Talin、Vinculin蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的分析踝蛋白(Talin)和纽蛋白(Vinculin)在结肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及意义。方法收集80例经病理学证实为CRC患者的组织标本及其癌旁(距癌组织≥5 cm)正常组织标本。比较CRC组织和癌旁正常组织Talin、Vinculin蛋白表达情况,并分析与CRC患者临床病理特征及生存情况的关系。结果 Talin和Vinculin在CRC组织中表达率分别为27. 50%,21. 25%,表达率均明显低于癌旁正常组织(77. 50%、85. 00%),差异有统计学意义(P <0. 05);Talin、Vinculin在不同性别、年龄及肿瘤直径中的表达无统计学意义(P均> 0. 05),淋巴结未转移及TNM分期Ⅰ+Ⅱ期病例Talin、Vinculin表达阳性率明显高于淋巴结转移及TNM分期Ⅲ+Ⅳ期病例,差异有统计学意义(P <0. 05),高分化和中分化腺癌Talin、Vinculin表达阳性率明显高于低分化腺癌(P <0. 05);Spearman相关分析显示,在CRC组织中,Talin和Vinculin表达之间呈高度正相关(γ=0. 52,P <0. 01);80例患者随访3年死亡22例,3年生存率为72. 50%(22/80),CRC组织中Talin及Vinculin阳性表达患者3年生存率分别90. 91%和94. 12%,明显高于低表达患者(65. 52%,66. 67%),差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Talin、Vinculin在CRC组织中均呈低表达,二者可作为CRC患者预后的保护因素,此外,Talin、Vinculin与CRC生物学行为有关,可能成为CRC诊断的潜在指标。