人TALL-1基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定

目的研究在毕赤酵母(Pichia Pastoris)系统中人TALL-1基因的分泌表达,获得具有生物活性的重组TALL-1。方法将人TALL-1基因插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的酵母表达载体pPIC9K中,用SacⅠ将重组质粒线性化,电转化Pichia Pastoris GS115感受态细胞,筛选阳性整合子并进行甲醇诱导表达,采用MTT对表达产物进行初步的生物活性检测。结果经过诱导表达条件的优化,人TALL-1在酵母培养基BMMY中实现了分泌表达;免疫印迹和酶联免疫检测结果显示,重组产物可以结合其特异抗体;生物学活性检测证实其可抑制Hela细胞增殖。结论在毕赤酵母系统中实现了人TALL-1的分泌表达,具有生物学活性的重组TALL-1分子可以用于进一步的结构与功能研究。

人TALL-1基因毕赤酵母表达载体的构建与鉴定

目的 克隆人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建人TALL 1及其胞外区蛋白毕赤酵母分泌型表达载体。方法 从人新鲜淋巴结组织中提取总RNA ,利用RT PCR技术扩增人TALL 1及其胞外区基因编码区序列 ,构建人TALL 1及其胞外区cDNA毕赤酵母表达载体 ,并进行序列测定。结果 克隆获得的 85 8bp和 4 5 9bp片段与文献报道的人TALL 1全长及其胞外区基因编码区cDNA序列一致 ,将目的基因插入酵母表达载体pPIC 9Kα因子分泌信号肽下游。结论 本实验为大量获得人TALL 1蛋白及其可溶性功能蛋白 。

重组人TALL-1基因全长及其胞外区片段的克隆和表达

目的 获得人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建重组表达载体并对其诱导表达。方法 利用RT PCR技术从人外周血单个核细胞中扩增出TALL 1全长及其胞外区基因编码区序列 ,克隆于载体pGEX 4T 1中 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果 ①从人外周血单个核细胞中扩增出编码TALL 1基因全长及其胞外区片段cDNA序列 ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;②成功构建了GST融合表达载体pGEX 4T 1 hTALL 1和pGEX 4T 1 sTALL 1;③表达了hTALL 1 GST和sTALL 1 GST融合蛋白。结论 人TALL 1基因全长及其胞外区片段的克隆成功及融合蛋白的表达 ,为进一步探索TALL 1抗原表位打下了基础。

人全长TALL-1在大肠杆菌中的表达

目的 在克隆人TALL 1(TNF andapoptosisligand relatedleukocyteexpressedligand 1)全长cDNA的基础上 ,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法 采用RT PCR技术 ,从HL 60细胞中扩增编码人TALL 1的cDNA ,克隆于高效原核表达载体pQE 80L中 ,以IPTG诱导表达 ,Ni NTA层析纯化后 ,进行生物学活性检测。结果 RT PCR扩增得到了85 8bp的DNA片段 ,测序结果与GenBank中报道的编码TALL 1的cDNA序列一致 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,活性检测发现它能抑制U93 7细胞的生长。结论 成功克隆了人TALL 1全长cDNA ,并获得了高效表达及纯化 ,纯化产物具有生物学活性 。

TNF家族新成员TALL-1的研究进展

TALL 1是TNF家族中广泛参与了T、B淋巴细胞的增殖及功能调节的一个新成员。本文就TALL 1的结构及功能特点 ,TALL 1在相关疾病 (如免疫功能低下、某些自身免疫性疾病及某些肿瘤等 )发生中的作用 ,以及TALL

TNF家族成员TALL-1及其研究进展

TALL 1是TNF家族成员中最近发现的一个新型细胞因子 ,由单核细胞和巨噬细胞产生 .人TALL 1由2 85个氨基酸残基组成 ,而鼠TALL 1由 30 9个氨基酸残基构成 ,两者均为Ⅱ型穿膜蛋白质 .人sTALL 1是长为15 2个氨基酸残基的胞外区片段 ,对应于C端 134～ 2 85位氨基酸残基 .重组人sTALL 1具有刺激B细胞增殖、激活NF κB和JNK以及抑制肿瘤细胞生长等生物学活性 .另外 ,TALL 1在转基因鼠中的过量表达可引起严重的B细胞增生以及与狼疮有关的自身免疫性疾病 .因此 ,TALL

混合调谐质量阻尼器在高层建筑结构上最优位置的研究

用数学规划方法研究了主动-被动调谐质量阻尼器在被控结构上的最优位置问题。将模态分解法引入模态相对控制度的概念中,并将结构动力学方程转化为状态方程。基于隐枚举法,将最优位置问题视为广义0-1规划问题,研究了结构动力体系的响应,并通过控制振型进行了实现,最后给出了确定混合调谐质量阻尼器在高层建筑结构上最优位置的方法。