基于“伏邪理论”探讨CAC发病中TAMs/MUC1介导的结肠炎性微环境形成机制

炎性微环境在结肠“炎-癌”转化的过程中发挥着关键作用,其介导的结肠“炎-癌”转化过程与中医“伏邪理论”具有相似性。本文基于“伏邪理论”探讨了肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)与黏蛋白1(MUC1)之间的交互关系介导的结肠炎性微环境形成机制,认为异常表达的MUC1可作为“伏痰”的研究指标,进一步提出在临床早期治疗结肠炎相关结直肠癌(CAC)时,应以扶正透邪为基本原则,灵活运用健脾化痰、调气化痰、清温消痰、活血解毒化痰等治法,以有效干预结肠炎的恶性转化。

纳米药物重塑TAMs用于增强癌症免疫治疗的研究进展

癌症免疫疗法已成为一种新型癌症治疗方法,而复杂的肿瘤微环境(Tumor microenvironment, TME)极大限制其临床应用。肿瘤微环境的重要组成部分是肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated Macrophages, TAMs),它们通常与不良预后相关,并已成为增强癌症免疫疗效的有希望的靶标。最近,由于纳米颗粒独特的物理化学特性,将免疫治疗与纳米递送系统联合使用可实现更高的疗效。在这篇综述中,我们主要描述了纳米药物重塑TAMs用于增强癌症免疫治疗的策略,包括抑制TAMs被招募到肿瘤部位、清除TAMs、将M2型TAMs重编程为M1型TAMs、调节TAMs对肿瘤细胞的吞噬能力,还描述了目前工程化巨噬细胞的研究现状。

肿瘤相关巨噬细胞(TAMs):从基础到临床

巨噬细胞是肿瘤微环境(TME)的重要组成,对肿瘤的发生发展至关重要。免疫系统对癌前突变细胞进行免疫监视,抑制肿瘤发生发展,巨噬细胞在其中发挥不可或缺的功能。然而,大量证据表明肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在肿瘤进展过程中发生功能转换,变成有利于肿瘤的免疫抑制状态,促进肿瘤免疫逃逸。很多研究尝试通过不同方法理清巨噬细胞功能转换的机制,同时运用这些机制探索靶向TAMs的癌症免疫治疗新策略。本文将阐述巨噬细胞分类方法的演变,结合临床信息介绍靶向TAMs的癌症免疫疗法的新进展。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与表达

采用PCR方法扩增环形泰勒虫Tams1基因,将扩增产物与pUcm-T载体连接,重组质粒经PCR和双酶切鉴定、测序确认后被亚克隆于pGEX-4T-2表达载体中。构建的表达重组质粒经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的Tams1基因片段长846bp,为一个完整的开放阅读框,编码281个氨基酸,与GenBank中的Tams1基因核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;系统进化树分析表明新疆分离株与印度株、毛利塔尼亚株和北非共和国株进化途径一致,与苏丹株、巴林株进化途径相差较远;推测的蛋白质抗原决定簇预测表明,Tams1基因编码的氨基酸具有13个交叉的抗原决定簇;表达的融合蛋白为56ku,能够被环形泰勒虫多克隆血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为进一步开展牛环形泰勒虫的分子生物学诊断、亚单位疫苗和核酸疫苗的研究奠定了可靠的基础。

基于环形泰勒虫Tams1基因多态性的二温式-PCR检测方法的建立

【目的】环形泰勒虫作为牛科动物重要的血液原虫对养牛业产生了重大危害。近年来针对该病原Tams1基因的诊断方法及候选疫苗筛选进行了大量工作。但研究证明该基因多态性对诊断及免疫效果存在影响。基于此,本研究对Tams1基因多态性特征进行了分析,并为该病的诊断建立一种实施有效的检测方法。【方法】参考GenBank中公布的环形泰勒虫Tams1基因的核苷酸序列,设计特异性引物。PCR扩增,获得了846 bp的核苷酸片段。将该基因片段与GenBank中主要的12种已知不同区域虫株的相应氨基酸序列进行比较分析。在保守区设计引物,以Tams1基因标准阳性质粒为模板建立环形泰勒虫病的二温式-PCR检测方法。经优化的方法用于田间样品的检测。【结果】该基因编码281个氨基酸,碱性氨基酸48个,酸性氨基酸42个,疏水性氨基酸100个。系统发生树结果显示,环形泰勒虫甘肃株与安哥拉、土耳其、巴林地方株亲缘关系较近。新疆株与意大利、西班牙地方株关系较近,而与甘肃株亲缘关系相对较远。这一结果通过环形泰勒虫不同国家地方株的氨基酸序列对齐结果可以得到进一步的说明。建立的二温式-PCR检测方法,可检测到0.31 fg.μL-1血液中感染虫体的量。特异性结果表明,仅有环形泰勒虫基因组DNA检测为阳性,其它对照虫种基因组模板均表现为阴性,且与感染牛的其它梨形虫无交叉反应。本实验建立的环形泰勒虫二温式-PCR方法对收集的335份野外样品进行检测,阳性检出率为16.33%,显微镜检测阳性率为2.25%,两者符合率100%。与普通PCR比较,二温式-PCR在敏感性方面没有显著差异,但其特异性更高,且该方法反复升温降温时间消耗短。【结论】环形泰勒虫Tams1基因不同地方株存在明显的差异。其氨基酸序列的多态性特征差异显著。因此该基因作为潜在候选抗原应注重多肽疫苗的设计。二温式-PCR方法具有的良好敏感性和特异性,对环形泰勒虫病的流行可以起到提前检测的效果,提高了疾病的诊断效率。

新疆牛环形泰勒虫TamsⅠ基因原核表达条件的优化及蛋白纯化

为了提高新疆牛环形泰勒虫TamsⅠ基因在大肠杆菌中的表达量,研究了温度、诱导时间以及诱导剂(IPTG)浓度等不同条件对TamsⅠ融合蛋白表达量的影响。试验结果表明,大肠杆菌菌株BL21(DE3)在37℃培养2.5 h后,使用终浓度为2 mmol/L的IPTG在25℃振荡诱导培养8 h时,GST-TamsⅠ融合蛋白表达量最高,达到2.5 mg/mL。用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-TamsⅠ融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE检测表明GST-TamsⅠ融合蛋白大小约为56 kD,与预计的分子量大小一致。TamsⅠ基因的优化表达为牛环形泰勒虫病的分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。

牛环形泰勒虫新疆株Tams1基因真核表达载体的构建及免疫反应性研究

研究采用PCR方法从焦虫病患牛的全血基因组中扩增得到846 bp的Tams1基因片段,将其克隆至真核表达载pcDNA3.1(+),构建Tams1基因的真核表达质粒。经测序验证后,将Tams1基因的真核表达质粒尾静脉注射小白鼠进行Tams1基因的瞬时表达。取接种小鼠的肝脏提取总RNA,采用RT-PCR扩增目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1皮下注射免疫小白鼠4次后,进行免疫抗体检测。试验结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1含有完整的Tmas1基因片段。用该重组质粒免疫小鼠56 d后,小鼠血清中抗重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1的抗体效价可达1∶12 000以上,说明该重组质粒具有很强的抗原性。经Western-blot检验可得到抗原-抗体复合物产生的特异性条带,说明该重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1具有免疫原性。

泰勒焦虫表面抗原TaSP、spag-1和Tams1基因片段克隆与序列分析

为了解泰勒焦虫表面抗原基因特性,利用PCR方法对实验室保存的泰勒焦虫细胞表面抗原spag-1、Tams1和TaS部分基因片段进行克隆与序列分析。PCR结果显示所扩增的spag-1、Tams1和TaSP部分基因长度分别为372bp,324bp和321bp。系统发育树分析表明,与本次测序表面抗原TaSP和Tams1基因片段同源性最高的虫株登录号分别为FJ895154和AF214797的泰勒焦虫株,同源性分别高达100%与99.69%;与spag-1基因片段同源性最高的虫株登录号为X78188、XM949884和M63017,它们之间同源性为100%。

肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)促进Ⅰ型子宫内膜癌细胞增殖和侵袭

目的研究肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)对Ⅰ型子宫内膜癌增殖转移的影响及其分子生物学机制。方法免疫组化方法分析正常及各类型子宫内膜增生性病变(增殖期、分泌期、单纯增生、复杂增生、不典型和I型子宫内膜癌)组织中巨噬细胞浸润情况。CCK-8法和Transwell法分别检测单核巨噬细胞系THP-1(构建为M2型TAMs后)对Ⅰ型子宫内膜癌细胞系RL95-2增殖和侵袭能力的影响,Transwell法检测RL95-2对THP-1的招募作用。Western blot技术检测THP-1对RL95-2的CyclinD1和MMP-2表达影响。结果免疫组化结果显示,TAMs浸润数目与子宫内膜增生性病变进展程度呈正相关。RL95-2可招募THP-1,招募的THP-1促进RL95-2的增殖和侵袭,MMP-2和CyclinD1表达随THP-1作用而呈时间依赖性上调(P<0.05)。结论巨噬细胞浸润增加造成的肿瘤周围炎症微环境可能是Ⅰ型子宫内膜癌发展的机制之一。

TAMs、MC与食管癌临床病理及血管生成的关系

目的观察肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、肥大细胞(MC)与食管鳞癌临床病理特征的关系及对微血管生成的影响。方法应用免疫组织化学S-P法测定食管鳞癌组织和正常食管黏膜中TAMs、MC和微血管的数量及分布(MCD)。结果在正常黏膜和食管鳞癌中,TAMs的计数分别为42.60±6.68和48.33±8.66,MC分别为10.65±3.66和16.68±2.84,MVD分别为26.32±2.02和38.18±5.14(P<0.05);淋巴结转移组和无淋巴结转移组TAMs分别为37.01±3.98和35.11±2.42,MVD分别为38.72±2.80和36.76±2.01,MC分别为17.00±2.48和15.60±2.03(P<0.05);浸润至及肌层以外者与肌层以内者,TAMs计数分别为46.36±3.63和43.78±4.47,MVD分别为36.89±3.05和38.67±2.82,MC分别为14.94±4.86和17.67±3.72(P<0.05)。TAMs、MC、微血管和性别、大体类型及分化程度之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论食管鳞癌中的TAMs、MC数量与淋巴结转移及浸润深度相关,与肿瘤的分化程度、性别及大体类型无关;且与微血管生成有关,非特异性抗炎治疗对食管鳞癌的治疗可能有意义。

TAMs、PRL-3和C-erbB-2与乳腺癌淋巴结转移及预后的相关性

目的 分析肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、肝再生磷酸酶(PRL-3)及人类表皮生长因子受体2(C-erbB-2)与乳腺癌淋巴结转移及预后的相关性。方法 收集2017年5月至2020年5月海南省三亚市妇女儿童医院收治的115例乳腺癌患者,以其术后病理组织作为观察组,并取患者距肿瘤切缘>5cm远癌组织作为对照组;淋巴结转移者(转移组)46例,未转移者(无转移组)69例。比较不同组织、有无淋巴结转移者血TAMs、PRL-3及C-erbB-2表达情况,分析影响乳腺癌预后不良的相关因素。结果观察组TAMs、PRL-3及C-erbB-2阳性表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。转移组TAMs、PRL-3及C-erbB-2阳性表达率明显高于无转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。115例患者随访12个月后生存88例,预后不良27例。预后不良组淋巴结转移者、病理分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化、TAMs阳性、PRL-3阳性、C-erbB-2阳性占比明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、TAMs、PRL-3及C-erbB-2为影响乳腺癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论 TAMs、PRL-3及C-erbB-2过度表达与乳腺癌淋巴结转移可能存在一定的联系,对乳腺癌患者预后评估有参考价值。

新疆部分地区环形泰勒虫Tams1基因型及遗传多样性分析

为了对新疆部分地区环形泰勒虫Tams1基因型及遗传多样性进行分析,本研究对新疆托克逊、艾丁湖、青河和伊吾地区奶牛血液DNA进行检测,采用PCR方法对Tams1基因扩增、克隆和测序,并进行序列比对。通过MEGA、DNAsp、NetNGlyc等软件及在线软件分析Tams1基因及其蛋白序列。结果显示:(1)新疆地区23条环形泰勒虫序列除伊吾地区2号样品序列被归为G3型,其余均属于G1型;此外,新疆地区Tams1基因序列在核苷酸与氨基酸水平上分别具有90.1%~100%和83.9%~100%的相似性。(2)Tams1序列在核苷酸的168~217和479~528位置之间可检测到广泛序列变异。通过Hd=0.994±0.006、π=0.071±0.002、S=178、h=38及k=52.32均显示Tams1序列较高的遗传多样性;中性指数结果显示当地环形泰勒虫Tams1基因单倍型数大于多态位点个数,遗传多样性呈平衡选择。(3)Tams1蛋白的N末端显示出较大的序列变异性,在3个区域(氨基酸位置27~52、138~175和180~196)存在广泛变异。经B细胞抗原表位预测及3D结构同源建模,发现Tams1蛋白抗原位点多位于表面,其抗原性较好。综上,本研究发现本次备选采样点的环形泰勒虫具有较高的遗传多样性,该数据可为后续环形泰勒虫基因型和种群结构变化、不同致病特性及逃避宿主免疫机制等研究提供参考。

扶正散结方调控Lewis肺癌小鼠TAMs免疫重塑作用的相关研究

目的:探讨扶正散结方对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞有关细胞因子的调控作用。方法:建立Lewis肺癌小鼠模型,称瘤重,算抑瘤率;应用免疫组化法检测各组肿瘤组织中CD68+浸润程度;采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ,TGF-β,IL-4,IL-13,IL-6,IL-10,IL-12,TNF-α的含量。结果:与荷瘤模型组相比,其他各组均较高,分别为DDP组(50.28%)、中药预防组(34.37%)、中西结合组(66.76%),差异具有统计学意义(P<0.05)。CD68+浸润程度差异不具统计学意义。各组荷瘤小鼠血清中IFN-γ,IL-6,IL-12含量均较空白对照组低,而IL-4,IL-13,TGF-β含量均较空白对照组高,且在不同药物干预下,部分相关细胞因子含量具有显著性差异(P<0.05),中药预防组、中西医结合组与荷瘤对照组差异亦具有统计学意义(P<0.05),而TNF-α,IL-10含量,与荷瘤对照组比较,不具统计学意义。结论:扶正散结方可以通过下调肺癌免疫微环境中IL-4,IL-13,TGF-β等,上调IFN-γ等细胞因子,从而逆转TAMs的免疫重塑作用,控制肿瘤生长。

TAMs在皮肤恶性黑素瘤组织中的浸润及与STAT3、VEGF蛋白表达的关系

目的探讨皮肤恶性黑素瘤组织中TAMs浸润与STAT3、VEGF蛋白表达及患者临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测40例CMM组织及15例色素痣组织中CD68(标记TAMs)及VEGF、STAT3蛋白的表达情况。结果 CMM组织TAMs计数为(29.6±9.1)个/HP,STAT3及VEGF蛋白中的阳性表达分别为70.0%(28/40)、62.5%(25/40);而色素痣组织分别为(10.5±3.8)个/HP、13.3%(2/15)、0%(0/15);两两比较,P值均<0.001。CMM组织中TAMs计数、STAT3及VEGF蛋白表达与Clark分级和有无淋巴结转移密切相关(P<0.001,P<0.001;P=0.007,P=0.004;P=0.008,P=0.004)。TAMs在STAT3蛋白及VEGF蛋白阳性组织中的计数分别显著高于在STAT3蛋白及VEGF蛋白阴性组织中的计数(P值均<0.001),STAT3蛋白表达与VEGF蛋白之间也具有显著相关性(P值<0.001)。结论 CMM组织中TAMs浸润与STAT3、VEGF蛋白的表达密切相关,且三者均与Clark分级和有无淋巴结转移有关;TAMs可能通过调节STAT3、VEGF蛋白的表达,对CMM的发生和发展起促进作用,有望成为CMM的靶向性治疗提供新思路。

服装消费者使用直播购物的影响因素探究

为探究影响服装消费者使用直播购物的因素,通过文献梳理和分析构建研究理论模型,运用问卷调查法和结构方程模型分析发现:消费者对直播购物的感知有用性、感知易用性、主观规范和信任均对使用直播购物有显著正向影响;感知易用性和主观规范均显著正向影响感知有用性。此外,直播中的社会临场感可以显著影响消费者对直播的信任,但对直播的使用意向影响不显著。研究结论有助于促进服装消费者使用直播购物,对提高相关从业人员的直播营销效果具有借鉴意义。

商业模式创新驱动机制:消费者接受行为的等效路径研究

本研究侧重消费者情境,根据TAM模型,从企业和消费者两个层面构建消费者接受商业模式创新的理论分析框架,采用模糊集定性比较分析方法(fsQCA),以357份有效问卷为数据样本,经研究发现:第一,企业或消费者层面的各因素均不是产生接受行为的必要条件,行为的发生具有多重并发因果关系,且影响因素间具有联动性;第二,依据组态分析结果,得出3种消费者情境下接受商业模式创新的驱动路径,即消费者缺乏创新主动性情境、消费者特性多样化情境和消费者诉求与企业价值缺乏一致性情境。研究结果为企业识别驱动商业模式创新的消费者情境,部署企业资源和合理利用消费者特性提供理论指导。

我国中小城市电动两轮车骑行者戴盔意向研究——基于TPB和TAM整合模型

【目的】探究影响我国中小城市电动两轮车骑行者戴盔意向的心理因素,以更好地提升头盔佩戴率。【方法】从骑行者角度出发,结合计划行为理论(theory of planned behavior,TPB)和技术接受模型(technology acceptance model,TAM),构建了电动两轮车骑行者戴盔意向模型,通过结构方程模型(structural equation model,SEM)探究了骑行者心理潜变量对戴盔骑行意向的影响效果。【结果】与以传统的TPB为框架的模型相比,基于TPB和TAM整合的模型在拟合适配度方面表现更优。其中态度(0.411)、知觉行为控制(0.305)两个潜变量对骑行者戴盔意向的作用效果最为显著,骑行者的年龄对戴盔意向模型具有调节作用。【结论】研究结果可以为当地政府制定相关政策提供理论参考依据,并为其他学者后续针对戴盔骑行行为的研究提供思路。

用户生成内容对消费者跨境电商平台行为意向的影响

摸清用户生成内容的内涵及其对消费者行为意向产生的影响机制,有利于跨境电商平台实施精准的营销策略。通过问卷调查收集数据,基于TAM模型理论实证分析用户生成内容对消费者跨境电商平台行为意向的影响情况。结果显示,用户生成内容的发布者和时效性对消费者跨境电商平台行为意向产生显著正向影响;用户生成内容的专业性对消费者在跨境电商平台上的购买意愿产生显著正向影响;用户生成内容的关注度对跨境电商平台的推荐意愿产生显著正向影响;文字评论类内容对消费者跨境电商平台购买意愿的影响明显小于社交分享类内容产生的影响;同时,高中及以下学历的消费者在跨境电商平台上的行为意向明显低于研究生学历的消费者。因此,为了增强消费者对跨境电商平台的行为意向,作为跨境电商平台,首先,需要充分发挥知名发布者对平台正面宣传与推介的头雁效应,鼓励广大用户适时更新在线内容;其次,善于打造具有专业水准的在线内容,提高在线内容的阅读量和被点赞量;最后,要注重生成社交分享类的在线内容,并着力发布通俗易懂的平台简介与简明的平台交易流程。