草莓miR390靶基因TAS3的克隆及表达分析

以栽培草莓品种‘全明星’为试材,通过3′-和5′-RACE技术克隆出miR390靶基因TAS3的cDNA全长,命名为FaTAS3。序列分析发现:草莓TAS3基因的cDNA全长为742bp,含有16个碱基的Poly A尾巴及2个高度保守的ta-siRNA产生位点和1个miR390靶位点;该基因DNA全长为824bp,5′端130bp处有一个98bp的内含子序列。生物信息学软件预测显示,草莓TAS3基因的启动子除具有TATA/CAAT-box外,还含有G-box、Cbox等特异作用元件。实时定量RT-PCR结果表明,草莓miR390与靶基因TAS3间的表达模式与拟南芥中的表达模式相同,推测草莓TAS3基因的生物合成也受miR390的指导。

转小麦冷胁迫蛋白截短基因烟草及其抗病性分析

TA3-13是克隆于小麦冷胁迫蛋白基因的截短片段。原核表达的TA3-13蛋白能够诱导烟草产生显著的抗烟草花叶病毒(TMV)的作用。文章将TA3-13基因片段克隆到植物表达载体pBI121上,构建成转基因重组体pB-3-13,通过冻融法转化农杆菌EHA105,构建成转基因侵染菌株。采用叶盘法将pB-3-13转化三生烟草,经卡那霉素抗性筛选,获得48株T0代再生植株。通过PCR检测,鉴定出33株转基因单株,收获了20株种子作为T1代株系。PCR-Southern杂交结果显示,PCR阳性条带与TA3-13探针有特异性杂交,说明外源基因被转化到烟草的基因组中。选取两个T1代株系的烟草植株用于各项测定。GUS组织化学活性鉴定和RT-PCR检测结果显示,外源基因可以成功地表达。接种TMV病毒后,转基因烟草抗TMV的能力较转空载体烟草提高3～5倍。转基因烟草具有抗TMV侵入和抗病毒病害发展的作用,同时转基因烟草可以抗细菌软腐病菌的扩展。

羚牛苦味受体3(Tas2R3)基因的克隆及生物信息学分析

Tas2R3是苦味受体基因家族中一个重要的成员,为了进一步了解和研究羚牛(Budorcas taxicolor)苦味受体基因的结构和功能,本研究对羚牛苦味受体3 (Tas2R3)基因进行了克隆和生物信息学分析(GenBank登录号:MG650195)。结果显示,羚牛Tas2R3基因编码区(coding sequence, CDS)序列全长951 bp,共编码316个氨基酸,以亮氨酸含量最高,谷氨酰胺含量最低。其蛋白质等电点为9.68,分子量为51.96 kD。高级结构功能预测显示,二级结构以α-螺旋为主,蛋白质为碱性、稳定的亲水性蛋白,由4个胞外区、7个跨膜区和4个胞内区组成。预测到2种类型共8个糖基化功能位点和4种类型共15个磷酸化功能位点。通过比较Tas2R3基因种间相似性发现,在偶蹄目中具有很高的同源性,羚牛与绵羊(Ovis aries)的相似性最高(0.98),与褐家鼠(Rattus norvegicus)最低(0.52)。用羚牛、绵羊等12个物种的Tas2R3基因CDS序列构建的NJ树与ME树结构一致,表明Tas2R3基因适合用于构建不同物种间的系统进化树。