孕酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后TASK3蛋白表达的影响

目的观察孕酮对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠脑组织TASK3蛋白表达的影响,探讨孕酮对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和孕酮+I/R组,后3组按缺血再灌注后不同时间随机分为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h和120 h 8个亚组。线栓法建立大鼠右侧MCAO模型,缺血2 h再灌注24 h进行脑损伤评估,检测各组大鼠死亡率、神经功能缺陷评分以及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积;采用免疫印迹法检测各组大鼠脑组织缺血2 h再灌注后不同时间点TASK3蛋白的表达。结果孕酮+I/R组大鼠死亡率(18.18%)明显低于I/R组(40.66%),该组动物脑梗死体积(21.85%±3.53%)也显著低于I/R组(37.21%±3.50%)(P<0.01),且该组神经功能缺陷评分(2.00±0.74)显著低于I/R组(2.67±0.49)(P<0.05)。与正常对照组相比,假手术组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达无明显变化,而I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达均显著降低(P<0.05);与I/R组相比,孕酮+I/R组各时间点脑组织TASK3蛋白的表达显著升高(P<0.05)。结论孕酮对脑缺血再灌注损伤的大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调TASK3通道蛋白的表达有关。

孕酮对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用及其机制

目的:观察孕酮(PROG)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后的神经保护作用,并探讨其作用机制。方法:120只雄性SD大鼠随机分为:假手术组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和PROG+MCAO组(n=40)。线栓法建立大鼠右侧MCAO模型,PROG+MCAO组于建模型前30 min按8 mg/kg腹腔内注射PROG。大鼠脑缺血2 h再灌注0、24、48、72 h,通过Longa评分标准进行神经功能缺陷评分;实时荧光定量聚合酶链反应技术检测大鼠脑组织中双孔道结构域钾离子通道3(TASK3)mRNA的表达。结果:PROG(8 mg/kg)可显著降低大鼠脑缺血2 h再灌注24、48、72 h时的神经功能缺陷评分(P<0.05)。与假手术组相比,MCAO组再灌注各时间点脑组织TASK3 mRNA的表达均显著降低(P<0.05);与MCAO组相比,PROG+MCAO组再灌注各时间点大鼠脑组织中TASK3 mRNA的表达均显著增多(P<0.05)。结论:PROG可改善局灶性脑缺血/再灌注损伤后大鼠神经功能缺陷症状,其作用机制可能与上调脑组织中TASK3 mRNA的表达有关。

酸敏感钾通道-3真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的:构建酸敏感钾通道-3(TASK3)的真核表达载体,通过转染SH-SY5Y细胞建立稳定表达的细胞株。方法:将TASK3亚克隆至p EGFP-N1质粒上,构建重组质粒p EGFP-TASK3,利用X-fect试剂盒将其转染至SHSY5Y细胞中,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达TASK3-e GFP的细胞株;Western blot和激光共聚焦检测TASK3-e GFP的表达及细胞内定位;不同p H值(7.0、6.7、6.4、6.1)作用稳定表达细胞株24 h后,CCK-8检查细胞活力。结果:重组真核表达载体构建正确,获得了TASK3-e GFP稳定表达细胞株。不同p H值作用野生型和稳定表达细胞株24 h后,两组细胞的存活率随着p H值降低而显著降低(P<0.05)。相同p H值下(除p H 7.0),稳定表达细胞存活率较野生型细胞显著升高(P<0.05)。结论:成功构建p EGFP-TASK3真核表达载体,建立了稳定表达TASK3-e GFP的SH-SY5Y细胞株,该细胞可为研究TASK3的功能奠定基础。