抗肿瘤多肽TAT-N15p55PIK表达和纯化方法的改进及其应用

[目的]改进原核蛋白纯化方案,纯化抗肿瘤多肽TAT-N15p55PIK。[方法]通过SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色和灰度扫描,筛选纯化蛋白最适合的菌株、确定目的蛋白浓度和纯度的准确检测方法,以及最佳诱导浓度。以咪唑洗脱,PBS透析和去除内毒素等方法,研究融合蛋白最佳纯化方案。以细胞免疫荧光和5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法检测经纯化的融合蛋白对间质肿瘤细胞增殖的影响。[结果]筛选出最适蛋白表达菌株;确定1mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)为最佳的蛋白诱导表达浓度;以BCA法和SDS-PAGE灰度扫描相结合的方法测定纯化蛋白的浓度及纯度;通过改进后的纯化步骤,融合蛋白纯度从36%提高为61%,浓度从0.72μg/μl提高为1.5μg/μl,可100%转导入Hela细胞,转导入T淋巴细胞白血病细胞Jurkat48h能够显著抑制细胞增殖,抑制率为20.31%(P<0.01)。[结论]经纯化的TAT-N15p55PIK具有一定的抑制间质肿瘤细胞增殖的能力,为融合蛋白TAT-N15p55PIK的抗肿瘤临床应用奠定了重要的工作基础。