穿膜融合多肽TAT-N24对胃癌细胞迁移的影响

目的观察穿膜融合多肽TAT-N24对胃癌细胞MGC803迁移的影响。方法用纯化的融合多肽TAT-N24处理胃癌MGC803细胞,通过细胞迁移实验检测其对细胞运动迁移能力的影响,明胶酶谱实验观察其对肿瘤转移相关基因MMP9表达的影响。结果经TAT-N24多肽处理的MGC803细胞,其细胞迁移能力明显低于对照组细胞,差异具有统计学意义(P<0.05),但其对肿瘤转移相关基因MMP9的表达和分泌却没有影响。结论融合多肽TAT-N24能够抑制胃癌MGC803细胞的运动迁移能力,其在胃癌的治疗上可能具有潜在的应用前景。

TAT-N24穿膜融合多肽对白血病细胞系HL60分化的影响

目的:观察TAT-N24穿膜融合多肽对急性髓系白血病细胞株HL60分化的影响。方法:TAT-N24作用于HL60细胞后,采用流式细胞术检测白血病分化指标CD11b及CD14,并观察HL60细胞经TAT-N24处理后的形态学变化,及BrdU/PI双掺入法测定DNA的合成。结果:HL60细胞在TAT-N24处理后,CD11b和CD14表达增高,且增高的趋势呈现TAT-N24浓度依赖性,同时形态学观察呈分化趋势,而且TAT-N24可以协同全反式维甲酸,增强其促进分化的作用。与此同时,BrdU/PI双掺入法显示TAT-N24使HL60细胞的增殖发生抑制。结论:TAT-N24穿膜融合多肽可促进急性髓系白血病细胞株HL60的分化,抑制其增殖,联合应用TAT-N24和全反式维甲酸具有明显的协同作用;TAT-N24有望被开发为有效的白血病分化治疗药物。

TAT-N24穿膜融合多肽的表达与鉴定

目的表达并纯化TAT-N24穿膜融合多肽,初步探讨其生物学活性。方法构建pTAT-HA-N24原核表达载体,在BL21大肠埃希菌中表达并纯化TAT-N24融合多肽,利用SDS凝胶电泳检测纯化蛋白的纯度,利用免疫细胞化学和流式细胞术检测TAT-N24融合蛋白的穿膜能力和生物学活性。结果在原核表达系统中成功构建并表达纯化了TAT-N24穿膜融合多肽,其在6 mol/L尿素和DMSO中均具有较好的溶解性,纯化的融合多肽经SDS凝胶电泳分析未见明显杂蛋白混入,利用免疫细胞化学染色可见TAT-N24处理结肠HT29细胞12 h后90%以上的细胞中可检测到TAT-N24,流式细胞术检测细胞周期可见TAT-N24能够有效地诱导细胞周期阻滞,抑制结肠癌细胞生长。结论TAT-N24具有高效的穿膜能力,并能有效抑制结肠癌细胞增殖,可望开发成为有效的肿瘤分子治疗药物。

TAT-N24穿膜融合多肽对HepG2细胞增殖的影响

目的观察TAT-N24穿膜融合多肽对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法用纯化的TAT-N24穿膜融合多肽处理HepG2细胞,使用流式细胞仪检测细胞周期;采用BrdU掺入法检测细胞DNA合成;采用Western Blot法检测细胞内相关蛋白的表达水平。结果空白组、对照多肽组和TAT-N24处理组细胞BrdU掺入阳性率分别为42.7±3.6%、38.2±2.8%和25.3±2.7%(P<0.05);G0/G1期细胞比例分别为52.6±4.7%、52.0±4.6%和68.6±4.7%(P<0.05);三组细胞AKT磷酸化水平无显著性差异。结论 TAT-N24穿膜融合多肽能有效阻滞肝癌HepG2细胞的细胞周期进程,抑制DNA合成。TAT-N24穿膜融合多肽有望被开发为有效的肿瘤分子靶向治疗药物。

穿膜融合多肽TAT-N24增强K562细胞对伊马替尼的敏感性

目的探讨穿膜融合多肽TAT-24增强K562细胞(慢性粒细胞白血病细胞)对伊马替尼敏感性的作用。方法常规培养K562细胞,并分为空白组、伊马替尼组(0.5μmol/L)、DMSO组、TAT-N24(100μg/mL)组、TAT-N24(100μg/mL)+伊马替尼(0.5μmol/L)组进行细胞处理。采用BrdU/PI双掺法检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Ki-67的表达。结果细胞DNA合成检测显示TAT-N24和伊马替尼对K562细胞的增殖均具有一定的抑制作用(P<0.05),且TAT-N24同伊马替尼联用能够较单用显著抑制K562细胞增殖(P<0.01)。细胞凋亡分析显示,各组凋亡细胞比例分别为:空白组(4.82±0.31)%、DMSO组(4.12±0.47)%、TAT-N24组(5.12±0.45)%、伊马替尼组(9.64±1.07)%、TAT-N24+伊马替尼组(20.43±2.37)%;伊马替尼能够诱导K562细胞凋亡(P<0.05),TAT-N24对K562细胞凋亡无明显影响,但TAT-N24能显著增强伊马替尼对K562细胞凋亡的诱导作用(P<0.01),增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。通过对各组细胞Ki-67和Bcl-2蛋白的检测进一步证实,联用TAT-24和伊马替尼能显著降低Bcl-2的表达,增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。结论融合多肽TAT-24能够有效增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。

穿膜融合多肽TAT-N24对Jurkat细胞增殖的影响

目的观察穿膜融合多肽TAT-N24对急性T细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响。方法以穿膜融合多肽TAT-N24处理Jurkat细胞,噻唑蓝(MTT)法观察细胞的生长情况,应用流式细胞仪检测Jurkat细胞周期进程。结果穿膜融合多肽TAT-N24处理急性T细胞白血病Jurkat细胞48 h,细胞生长受到抑制,随着多肽浓度的增加,抑制作用增强,表现出明显的浓度依赖性(P<0.05);48 h后细胞生长明显受抑,并随时间延长生长受抑更加明显,表现出时间依赖性(P<0.05)。空白对照组Jurkat细胞中G0/G1期细胞数为(41.91±1.96)%,S期和G2/M期细胞数分别为(52.16±1.76)%和(5.93±0.30)%;对照多肽组Jurkat细胞中G0/G1期细胞数为(46.38±2.31)%,S期和G2/M期细胞数分别为(44.22±1.69)%和(9.40±0.98)%;TAT-N24组Jurkat细胞中G0/G1期细胞数为(54.83±1.92)%,S期和G2/M期细胞数分别为(30.75±2.27)%和(14.42±0.68)%。结论融合多肽TAT-N24可以有效抑制急性T细胞白血病Jurkat细胞的增殖,阻滞其周期进程。

穿膜融合多肽TAT-N24对S180腹水瘤生长的抑制作用

目的观察穿膜融合多肽TAT-N24对S180腹水瘤生长的抑制作用。方法建立S180腹水瘤小鼠模型,以不同剂量TAT-N24腹腔内注射,观察TAT-N24对腹水瘤小鼠腹水生成的影响,流式细胞仪检测腹水瘤细胞细胞周期进程,应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测TAT-N24对细胞DNA合成的影响,验证TAT-N24的抗肿瘤作用。结果腹水测量结果显示,模型对照组腹水为(8.3±2.3)mL,实验组分别为:TAT-N245μL组(3.2±1.2)mL,TAT-N2420μL组(2.7±1.0)mL,TAT-N24100μL组(1.3±0.2)mL;结果提示给予腹腔注射TAT-N24能显著抑制腹水的生成(P<0.05);BrdU/PI双掺入法检测细胞DNA合成结果显示,对照组BrdU阳性细胞数占总细胞比例为(25.86±3.54)%,而给予TAT-N24高剂量(100μL)组BrdU阳性细胞数占总细胞比例为(5.91±0.57)%,2组间差异有统计学意义(P<0.01);对照组动物腹水瘤细胞中G0/G1期细胞为(63.88±4.01)%,S期和G2/M期细胞分别为(23.93±2.91)%和(12.19±1.62)%,而TAT-N24高剂量组动物腹水瘤细胞G0/G1期细胞增加至(83.71±1.53)%,S期和G2/M期细胞分别为(7.56±1.40)%和(8.72±0.73)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论融合多肽TAT-N24能有效抑制S180腹水瘤小鼠的腹水生成,阻滞腹水瘤细胞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成。

TAT-N24穿膜融合多肽对前列腺癌细胞增殖的影响

目的观察TAT-N24穿膜融合多肽抑制前列癌细胞增殖的作用。方法用纯化的TAT-N24穿膜融合多肽处理前列癌PC3细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期进程的改变,BrdU掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,Western blot法检测细胞内AKT蛋白的磷酸水平的变化。结果①细胞周期分布:空白组G0/G1期(56.9±6.1)%,S期(27.0±2.3)%,G2/M期(16.1±1.3)%;对照多肽组G0/G1期(57.9±4.8)%,S期(24.2±3.1)%,G2/M期(27.8±1.4)%;TAT-N24组G0/G1期(68.6±5.4)%(P<0.05),S期(19.4±1.5)%(P<0.05),G2/M期(12.3±1.4)%。②BrdU阳性细胞为空白组(37.9±3.2)%,对照多肽组(36.2±4.1)%,TAT-N24组(21.5±2.4)%(P<0.05);③AKT磷酸化水平组间差异无统计学意义。结论 TAT-N24穿膜融合多肽能有效阻滞前列腺癌PC3细胞的细胞周期进程,并抑制其DNA合成。TAT-N24穿膜融合多肽有望成为有效的治疗前列腺癌的分子靶向药物。