反式激活蛋白-NEMO结合域抑制胆红素诱导的大鼠皮层星形胶质细胞NF-κB活化

目的明确反式激活蛋白-NEMO结合域(TAT-NBD)对胆红素诱导的大鼠皮层星形胶质细胞核因子-κB(NF-κB)活化及炎症反应的作用。方法分离并鉴定新生SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,随机分为对照组、胆红素组、TAT-NBD干预组。免疫荧光观察各组细胞形态,改良MTT检测细胞相对存活率。Western blot检测NF-κB p65表达,EMSA检测NF-κB的入核、活化。ELISA法检测培养基上清炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平。结果胆红素组NF-κB p65蛋白灰度比值明显高于对照组(P<0.01),2、12 h达高峰(P<0.05);TAT-NBD干预组NF-κB p65蛋白表达明显低于胆红素组(P<0.01)。IL-1β、TNF-α、IL-6的释放与胆红素诱导的NF-κB p65表达有时间相关性,于12 h达高峰,且TAT-NBD干预2、12 h的IL-1β、TNF-α、IL-6浓度均低于胆红素组(P<0.01)。星形胶质细胞的存活率与胆红素作用时间呈负相关,TAT-NBD干预2、12 h的相对存活率均高于胆红素组(P<0.05)。结论胆红素可诱导原代培养的大鼠星形胶质细胞NF-κB激活、过表达,TAT-NBD抑制NF-κB的活化高峰、减少炎症因子释放产生抗炎作用,可用于预防胆红素脑损伤。

反式激活蛋白-NEMO结合域抑制核因子-κB活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的明确核因子-κB(NF-κB)活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用,及反式激活蛋白-NEMO结合域(TAT-NBD)对胆红素神经毒性的干预作用。方法原代培养海马神经元分为对照组、胆红素组、TAT-NBD早期干预组、持续干预组及晚期干预组。免疫细胞化学法检测NF-κB p65蛋白表达,改良MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法及TUNEL法检测细胞相对存活率及凋亡率,ELISA法检测原代培养基上清IL-1β水平。结果胆红素组海马神经元NF-κB p65蛋白平均光密度值(MOD)明显高于对照组(P<0.01),6、24 h达高峰。TAT-NBD早期干预组细胞相对存活率为(80.784±9.767)%低于对照组(P<0.01)、高于胆红素组(P<0.01),细胞凋亡率为(14.100±2.252)%(Annexin V-FITC/PI双染法)、(12.883±1.629)%(TUNEL法)高于对照组(P<0.01)、低于胆红素组(P<0.01),IL-1β水平为15.348±0.812 pg/ml低于胆红素组(P<0.05)。TAT-NBD持续干预及晚期干预组细胞存活率、凋亡率、IL-1β水平与胆红素组无显著性差异(P>0.05)。结论 NF-κB双向调控胆红素诱导的海马神经元凋亡。TAT-NBD抑制NF-κB早期高峰有神经保护作用,有可能用于胆红素脑损伤的预防。