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TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制 被引量:12
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作者 何火聪 刘树滔 +4 位作者 潘剑茹 傅蓉 陈菁 陈躬瑞 饶平凡 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期704-710,共7页
为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有... 为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC7721、L02和BEL7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TATPTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的. 展开更多
关键词 tat-ptd 跨膜递送 GST-TAT-GFP
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穿膜肽TAT-PTD的固相合成及其与DNA相互作用的研究 被引量:1
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作者 管玉霞 罗泓 王锡平 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期94-98,共5页
通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-... 通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-PTD多肽与质粒DNA相互作用,实验表明TAT-PTD多肽与质粒DNA可以通过静电作用相互吸引、靠近并结合,于是为下一步小单孢菌基因工程的细胞转导提供了依据。 展开更多
关键词 小单孢菌 tat-ptd多肽 质粒DNA 琼脂糖凝胶阻滞电泳 紫外吸收光谱
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Tat-PTD介导的金属硫蛋白高产量表达及其高效表达重组菌株重金属抗逆性研究 被引量:1
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作者 李华玲 王凯 +2 位作者 秦艳 刘丹丹 陈文飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期17-23,共7页
目的:探讨Tat-PTDs对金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达的促进作用及其体外高效表达重组菌株的重金属抗逆性。方法:采用聚合酶链式反应从小鼠肝脏组织中克隆了金属硫蛋白MT-1和MT-2基因的编码序列,进而分别亚克隆入原核表达质粒pET28b... 目的:探讨Tat-PTDs对金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达的促进作用及其体外高效表达重组菌株的重金属抗逆性。方法:采用聚合酶链式反应从小鼠肝脏组织中克隆了金属硫蛋白MT-1和MT-2基因的编码序列,进而分别亚克隆入原核表达质粒pET28b-Tat和pET28b,测序验证后转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞,采用1mmol/L诱导剂IPTG诱导表达,并于诱导表达0h,2h,4h,6h时收集菌体,超声破碎后制备总蛋白、上清蛋白和沉淀蛋白并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。针对上述诱导表达4hrs的菌液适量稀释后转接入新的LB培养基,采用分光光度仪测定高效表达金属硫蛋白菌株对5mmol/L铜的抗逆性。结果:Tat-PTDs可明显增加金属硫蛋白的表达产量,且Tat融合蛋白主要为可溶性表达;Western blot及其柱状图分析结果显示,Tat融合蛋白的表达水平约为非Tat融合蛋白的5~8倍;高效表达Tat-MT-1和Tat-MT-2蛋白的菌株具有明显的抗重金属铜的活性,与非Tat标签融合蛋白和空载对照组相比存在显著性差异(P<0.01)。结论:实验数据表明,Tat-PTDs蛋白转导技术可以促进小鼠金属硫蛋白基因在原核生物中的可溶性高表达,Tat融合蛋白的表达水平比非Tat融合蛋白的表达有显著提高,其克隆菌株对重金属铜活性的抗性也有明显提高。 展开更多
关键词 tat-ptds 可溶性 重金属抗逆性
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TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价 被引量:4
4
作者 张荣波 王文洋 +5 位作者 胡东 王婉 邢应如 何江 戴京京 吴静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期49-53,共5页
目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag... 目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组。重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况。结果成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少。另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达。结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用。 展开更多
关键词 HIV反向转导结构域(tat-ptd) AG85B 结核 疫苗 免疫保护
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pET28a-PTD-Ag85B质粒构建及原核表达条件的优化 被引量:1
5
作者 杜昭弘 王婉 +9 位作者 戴京京 何江 王文洋 杨小康 邢应如 尤其 穆敏 胡东 吴静 张荣波 《齐齐哈尔医学院学报》 2015年第14期2029-2032,共4页
目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET2... 目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET28a-PTD质粒中,获得p ET28a-PTDAg85B重组质粒。将重组质粒p ET28a-PTD-Ag85B转化至大肠杆菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导PTD-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物。筛选最适诱导剂浓度、诱导温度和时间,尿素复性包涵体,并用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白。结果成功构建p ET28aPTD-Ag85B重组质粒,在E.coli BL21中能高效表达PTD-Ag85B融合蛋白。结论成功表达及纯化了PTD-Ag85B蛋白,为获得大量PTD-Ag85B融合蛋白提供了技术储备。 展开更多
关键词 AG85B tat-ptd 原核表达 融合蛋白
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HIV TAT——一种生物大分子的运载体 被引量:8
6
作者 严世荣 丁爱玲 +1 位作者 朱明磊 张红梅 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期187-190,共4页
人工合成编码TAT蛋白转导区核心区域11个氨基酸的双链寡核苷酸,构建pET28a-TAT-LacZ表达子,转化大肠杆菌,得到高表达的TAT-β-Gal融合蛋白。TAT-β-Gal加入体外培养的平滑肌细胞中,15min细胞即出现蓝染,1h TAT-β-Gal 100%进入细胞。... 人工合成编码TAT蛋白转导区核心区域11个氨基酸的双链寡核苷酸,构建pET28a-TAT-LacZ表达子,转化大肠杆菌,得到高表达的TAT-β-Gal融合蛋白。TAT-β-Gal加入体外培养的平滑肌细胞中,15min细胞即出现蓝染,1h TAT-β-Gal 100%进入细胞。该融合蛋白ip到Wistar大鼠体内,30min各组织出现蓝染,4h光密度值达高峰。实验证明TAT蛋白可有效携带大分子物质穿过生物膜,是一良好的生物大分子运载体。 展开更多
关键词 蛋白转导区 pET28a-TAT-LacZ表达子 融合蛋白 大分子运载体 生物大分子
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Tat蛋白转导区域位于融合蛋白C端时的跨膜递送作用 被引量:7
7
作者 陈菁 傅蓉 +2 位作者 刘树滔 何火聪 饶平凡 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期459-464,共6页
对Tat蛋白转导区域(PTDTat)的C端融合蛋白的跨膜递送作用进行探讨.采用DNA重组技术将PTDTat融合在绿色荧光蛋白(GFP)的羧基(C)端,构建重组表达质粒pGEXGFPTat,IPTG诱导其表达后,采用谷胱甘肽Sepharose4B(GS4B)亲和层析,获得纯化的谷胱甘... 对Tat蛋白转导区域(PTDTat)的C端融合蛋白的跨膜递送作用进行探讨.采用DNA重组技术将PTDTat融合在绿色荧光蛋白(GFP)的羧基(C)端,构建重组表达质粒pGEXGFPTat,IPTG诱导其表达后,采用谷胱甘肽Sepharose4B(GS4B)亲和层析,获得纯化的谷胱甘肽S转移酶(GST)融合的重组蛋白GSTGFPTat.该蛋白与HeLa细胞共培养,荧光显微镜观察其荧光强度随着蛋白浓度的增高而增强.流式细胞仪分析发现,在4.0μmolL蛋白浓度下,转导效率高达80.0%;而在GFP氨基(N)端含有PTDTat的融合蛋白GSTTatGFP的阳性对照组,转导效率只有32.9%.实验结果表明,C端融合的PTDTat同样具有对外源蛋白的跨膜递送作用.该结果可能为PTDTat在蛋白药物递送方面的有效应用提供理论依据. 展开更多
关键词 PTD-Tat GFP的羧基端 跨膜递送
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HIV-Tat蛋白转导域在医学研究中的应用 被引量:8
8
作者 丁劲 马斌 +1 位作者 刘军 薛采芳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第6期6-8,13,共4页
HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高... HIV Tat蛋白转导域 (proteintransductiondomain ,PTD)是新近发现的一种在蛋白转导过程中能高效穿过生物膜的结构域 ,它能将与其共价连接的多肽、蛋白质及DNA等分子跨膜导入几乎所有的组织和细胞 ,甚至可以通过血脑屏障 ,转导效率很高而且对细胞没有损伤。TAT融合蛋白系统被认为是一种很有前途的运载工具 。 展开更多
关键词 HIV-Tat蛋白转导域 人免疫缺陷病毒反式激活蛋白 生物膜 运载工具 目的蛋白
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TAT蛋白在介导外源物质进入细胞方面的应用 被引量:1
9
作者 江晓曦 郑文岭 +1 位作者 崔东 马文丽 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第5期6-8,共3页
TAT蛋白能够介导多肽、蛋白质、基因等外源物质进入细胞 ,对机体没有毒性 ,对周围环境的影响也不敏感 ,因而可以直接应用于组织细胞。它能够引导外源基因定位于细胞核 ,具有其它介导方法所没有的优点。这些优点将使TAT蛋白在研究蛋白质... TAT蛋白能够介导多肽、蛋白质、基因等外源物质进入细胞 ,对机体没有毒性 ,对周围环境的影响也不敏感 ,因而可以直接应用于组织细胞。它能够引导外源基因定位于细胞核 ,具有其它介导方法所没有的优点。这些优点将使TAT蛋白在研究蛋白质功能、基因治疗等方面发挥极为重要的作用。TAT蛋白与细胞表面进行低亲和力的结合 ,以Caveolae途径进入细胞 。 展开更多
关键词 TAT蛋白 介导 外源物质 细胞 艾滋病毒
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TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的原核表达及其在舞毒蛾幼虫体内的跨膜转导 被引量:1
10
作者 周洲 李永丽 +1 位作者 源春彦 曲良建 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1361-1367,共7页
【目的】为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应,需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白,克服经昆虫消化道的降解作用。【方法】本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础,构建TAT-Cloan-D... 【目的】为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应,需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白,克服经昆虫消化道的降解作用。【方法】本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础,构建TAT-Cloan-DH融合基因;然后以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为标签,构建在p ET-22b载体中。在0.2 mmol/L IPTG诱导下,在大肠杆菌Escherichia coli BL21 Rosetta(DE3)中表达出TAT-CloanDH-EGFP融合蛋白。再分别将表达有TAT-Cloan-DH-EGFP和EGFP融合蛋白的大肠杆菌BL21菌体拌入人工饲料,经舞毒蛾Lymantria dispar幼虫持续取食0,8,24,48,72和90 h后,随机挑选试虫进行组织固定并制作石蜡切片,选取中肠所在体段切片进行组织荧光分析。【结果】37℃0.2 mmol/L IPTG诱导条件下,表达的TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的分子量为61 k D,主要以包涵体形式表达,融合蛋白约占细胞总蛋白含量的18.1%;随着试虫取食含TAT-Cloan-DHEGFP融合蛋白饲料的增加,虫体组织的绿色荧光强度逐渐增加,取食72 h后,组织荧光强度达到最高。【结论】实验结果说明融合蛋白TAT-Cloan-DH-EGFP可以通过消化道横向跨膜运输,到达虫体其他组织,且该过程与蛋白的摄入量成比例。 展开更多
关键词 舞毒蛾 滞育激素 TAT穿膜肽 蛋白转导域 融合蛋白 跨膜运输
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融合肽TAT-Helicokinin I对舞毒蛾生物活性研究
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作者 李永丽 闫作炳 +2 位作者 周洲 张永安 曲良建 《中国森林病虫》 2019年第4期18-21,共4页
以美洲棉铃虫Helicoverpa zea利尿激肽Helicokinin I和穿膜肽TAT为基础合成融合肽TAT-Helicokinin I,并测试3种肽对舞毒蛾Lymantria dispar幼虫的注射活性;探究融合肽TAT-Helicokinin I和利尿激肽Helicokinin I经取食途径进入虫体后对... 以美洲棉铃虫Helicoverpa zea利尿激肽Helicokinin I和穿膜肽TAT为基础合成融合肽TAT-Helicokinin I,并测试3种肽对舞毒蛾Lymantria dispar幼虫的注射活性;探究融合肽TAT-Helicokinin I和利尿激肽Helicokinin I经取食途径进入虫体后对舞毒蛾幼虫生长的影响。结果表明:TAT-Helicokinin I和Helicokinin I对舞毒蛾幼虫均表现出注射毒性,且TAT-Helicokinin I比Helicokinin I表现出更高的生物活性;60,600 pmol/头的剂量对舞毒蛾幼虫均表现出显著致死性,6 pmol/头的剂量对舞毒蛾幼虫生长无影响;Helicokinin I饲喂舞毒蛾幼虫未显现出毒性,而饲喂TAT-Helicokinin I对试虫生长表现出显著抑制作用。该研究证实TAT与Helicokinin I融合后能够降低昆虫消化道酶对利尿激肽Helicokinin I的降解。 展开更多
关键词 舞毒蛾 TAT蛋白转导域 利尿激肽
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多肽TAT与核定位信号介导的蛋白质入核递送 被引量:5
12
作者 吴国清 朱旭东 +3 位作者 刘娟 党颖 李少林 黄培堂 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第5期61-63,19,共4页
增强型绿色荧光蛋白与蛋白质转导结构域TAT、SV40大T抗原的核定位信号以融合蛋白的形式在大肠杆菌中表达 ,纯化后转导A431细胞 ,大部分细胞核内都可以观察到绿色荧光 ,说明TAT NLS可以有效介导蛋白质的入核递送。这种蛋白质递送系统可... 增强型绿色荧光蛋白与蛋白质转导结构域TAT、SV40大T抗原的核定位信号以融合蛋白的形式在大肠杆菌中表达 ,纯化后转导A431细胞 ,大部分细胞核内都可以观察到绿色荧光 ,说明TAT NLS可以有效介导蛋白质的入核递送。这种蛋白质递送系统可望用于转录治疗等研究领域。 展开更多
关键词 TAT 核定位信号 增强型绿色荧光蛋白 蛋白质转导结构域 细胞核
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hCu,Zn-SOD-TAT PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究 被引量:5
13
作者 汪飞鹏 桂向东 宋礼华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第1期11-15,共5页
HIV I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力 ,被称为TAT蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)。从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPT... HIV I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力 ,被称为TAT蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)。从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPTD编码序列的 3’引物PCR扩增得hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因 ,并插入 pUC19。将SOD基因和SOD TATPTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体 pJW 2 ,转化大肠杆菌DH5α。SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,热击诱导 4h后 ,分别在 19ku和 2 2ku处出现SOD和SOD TATPTD目标表达条带 ,表达蛋白以包含体形式存在。分别提取SOD和SOD TATPTD包含体 ,复性纯化后SOD和SOD PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性 ,其比活性分别为 12× 10 3 NU/mg和 9.9× 10 3 NU/mg。细胞试验结果表明 ,与SOD相比较 ,SOD TATPTD融合蛋白能显著提高细胞内SOD酶活力。 展开更多
关键词 SOD-TAT PTD融合蛋白 原核表达 蛋白转导
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重组人SMAC及SMAC-PTD的制备 被引量:2
14
作者 胡颖 何凤田 +4 位作者 李蓉芬 高会广 黄刚 胡大强 龚薇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期958-960,共3页
目的制备重组人SMAC及SMAC-PTD。方法经RT-PCR从人HeLa细胞中扩增人野生型SMAC及SMAC-PTD cDNA,分别构建于原核表达质粒pET28 a(+),测序正确后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,N i2+-NTA层析纯化,SDS-PAGE和W estern b ... 目的制备重组人SMAC及SMAC-PTD。方法经RT-PCR从人HeLa细胞中扩增人野生型SMAC及SMAC-PTD cDNA,分别构建于原核表达质粒pET28 a(+),测序正确后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,N i2+-NTA层析纯化,SDS-PAGE和W estern b lot鉴定目的蛋白。结果RT-PCR扩增分别得到编码人SMAC及SMAC-PTD cDNA片断,测序结果正确,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。结论成功制备了高纯度的人野生型SMAC及SMAC-PTD融合蛋白,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 SMAC 蛋白转导域 凋亡
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人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化 被引量:1
15
作者 王倩 杨眉 +2 位作者 冯瑞丽 王娇 文铁桥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期195-200,共6页
为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pc DNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达... 为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pc DNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化表达条件。以尿素溶解包涵体蛋白,并优化溶解条件,通过Ni离子亲和层析柱进行纯化,再透析复性目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blot进行验证。结果表明,重组表达载体p ET32a-DCF1-TAT构建成功,并在大肠杆菌Rosetta中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在,经过尿素溶解,Ni离子亲和层析柱纯化获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符。 展开更多
关键词 人源DCF1基因 PTD TAT
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Artificial Synthesis of TAT PTD-Tachyplesin Fusion Gene by Overlap Extension PCR
16
作者 Daoshou QIU Xiaojin LIU +1 位作者 Jun WANG Yongquan SU 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2013年第3期1-4,17,共5页
This study aimed to investigate the synergism of the TAT PTD ( protein transduction domain in HIV-1 transactivator of transcription protein) to antibacte- rial peptide tachyplesin from Tachp/eus tr/dentatus. Treated... This study aimed to investigate the synergism of the TAT PTD ( protein transduction domain in HIV-1 transactivator of transcription protein) to antibacte- rial peptide tachyplesin from Tachp/eus tr/dentatus. Treated with Pichia pastoris preferred codon optimization, using the eDNA sequence of tuchyplesin mature pep- tide (54 aa) harboring TAT FFD sequence (11 aa) as reference template, six single-stranded oligonueleotides were designed, the sequences of restriction sites EcoR I and Xba I were introduced to the 5' end of primers P1 and P6, respectively. TAT PTD + Tachyplesin fusion gene with a full length of 219 bp was artificially synthesized by overlap extension PCR, which laid the preliminary foundation for subsequent functional and synergism studies. 展开更多
关键词 TAT protein transduetion domain (TAT PTD) TACHYPLESIN Overlap extension PCR
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PTD-Tat之C端融合在活体体内的跨膜递送作用 被引量:4
17
作者 陈菁 刘树滔 +2 位作者 饶平凡 邱小文 杨映红 《福州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期301-304,共4页
报道了Tat蛋白转导区域(PTD-Tat)的C端融合蛋白在线虫和小鼠体内的跨膜递送作用.将重组表达质粒pGEX-GFP-Tat在大肠杆菌中高效表达出的融合蛋白GST-GFP-Tat对小鼠腹腔注射(ip)17h后,荧光显微镜观察其心、肝和肾组织,均检测到强烈的绿色... 报道了Tat蛋白转导区域(PTD-Tat)的C端融合蛋白在线虫和小鼠体内的跨膜递送作用.将重组表达质粒pGEX-GFP-Tat在大肠杆菌中高效表达出的融合蛋白GST-GFP-Tat对小鼠腹腔注射(ip)17h后,荧光显微镜观察其心、肝和肾组织,均检测到强烈的绿色荧光,甚至该蛋白跨越了血脑屏障(BBB).此外用融合蛋白喂食线虫发现蛋白分布于线虫消化管道及其原体腔,且表现出的跨膜递送活性与喂食时间和蛋白浓度呈现正相关.该研究结果拓宽了PTD-Tat在蛋白药物递送方面的应用范围,为蛋白质疗法开辟了新的视野,并为其有效应用提供理论指导. 展开更多
关键词 PTD—Tat 腹腔注射 线虫 跨膜递送
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载pVAX1/Tat PTD-endostatin壳聚糖纳米基因载体的构建与体外活性评价 被引量:1
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作者 张新科 陈洪元 +2 位作者 杨莹 李妍 王凤山 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2017年第7期43-48,共6页
目的构建载内皮抑素(Es)重组表达质粒的壳聚糖纳米基因载体并评价其抑制内皮细胞增殖的活性。方法选用真核表达质粒p VAX1为重组载体,采用PCR及双酶切法制备能够表达Tat PTD-Es融合蛋白的真核表达载体p VAX1/Tat PTD-Es;离子交联法制备... 目的构建载内皮抑素(Es)重组表达质粒的壳聚糖纳米基因载体并评价其抑制内皮细胞增殖的活性。方法选用真核表达质粒p VAX1为重组载体,采用PCR及双酶切法制备能够表达Tat PTD-Es融合蛋白的真核表达载体p VAX1/Tat PTD-Es;离子交联法制备壳聚糖载基因纳米粒,琼脂糖凝胶电泳筛选处方,检测纳米粒的形态、Zeta电位及粒径;采用最佳处方比例制备载重组质粒纳米载体,转染人脐静脉内皮细胞HUVEC,采用ELISA法测定分泌型Tat PTD-Es蛋白的表达量,CCK-8法测定对HUVEC的抑制作用,以上两个实验均以LipofectaminTM2000为阳性对照。结果 p VAX1/Tat PTD-Es的真核表达载体构建成功,壳聚糖纳米粒Zeta电位(14.3±1.6)m V,粒径(145±12)nm,纳米粒转染HUVEC后细胞上清中Tat PTD-Es的浓度为(182.5±16.3)ng/m L,壳聚糖基因载体转染HUVEC后对细胞有明显的抑制作用,72 h的抑制率达(53.4±5.4)%(Z=-2.611,P=0.008)。结论构建的壳聚糖纳米基因载体能够成功转染HUVEC并能明显地抑制内皮细胞的增殖。 展开更多
关键词 TAT PTD-内皮抑素 壳聚糖 纳米基因载体 基因治疗
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蛋白质药物的入脑转运 被引量:1
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作者 付爱玲 李前 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第6期467-470,共4页
治疗脑内疾病的有效途径是用载体向脑内运送蛋白质药物 (如抗体、神经营养因子、生物活性酶等 )。合适的脑靶向载体通过化学方法或分子生物学方法与蛋白质连接 ,携带蛋白质进入脑内 ,发挥药理作用。目前随着药物_亲和素 生物素_载体连... 治疗脑内疾病的有效途径是用载体向脑内运送蛋白质药物 (如抗体、神经营养因子、生物活性酶等 )。合适的脑靶向载体通过化学方法或分子生物学方法与蛋白质连接 ,携带蛋白质进入脑内 ,发挥药理作用。目前随着药物_亲和素 生物素_载体连接方法的成熟 ,以及脑靶向TAT_PTD小肽载体的探索 ,将可能会使大分子蛋白质进入脑内治疗脑内疾病成为常规的治疗方法。此外 ,这种方法也为治疗体内的其他器官疾病提供了思路。 展开更多
关键词 蛋白质药物 血脑屏障 亲和素 生物素 TAT蛋白 连接方法 脑内疾病 载体蛋白质类
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HIV-Tat蛋白转导域的研究进展
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作者 林源 罗超 赵文力 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期625-627,共3页
HIV-Tat蛋白转导域具有穿膜活性,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,且对细胞无毒副作用,在药物转运及疾病治疗等领域有着广阔的应用前景。本文对HIV-Tat蛋白的结构、穿膜机制及转导域功能... HIV-Tat蛋白转导域具有穿膜活性,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,且对细胞无毒副作用,在药物转运及疾病治疗等领域有着广阔的应用前景。本文对HIV-Tat蛋白的结构、穿膜机制及转导域功能的应用作一综述。 展开更多
关键词 HIV-Tat 蛋白转导域 穿膜肽
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