siRNA对K562细胞株bcr- abl融合基因表达的抑制

为了探索CML的治疗新思路研究了siRNA(smallinterferingRNA)对K5 6 2细胞株bcr abl融合基因表达的抑制作用。制备特异性对应bcr abl融合基因的siRNA ,转染K5 6 2细胞株 ,采用RT PCR法测定bcr abl融合基因mRNA的表达。结果表明 :siRNA对bcr abl基因表达的抑制作用随浓度的增加而增强 ,0 .2 μgsiRNA能使bcr abl融合基因mRNA的表达在 2 4和 4 8小时分别降低至对照组的 19.9%和 2 6 .6 % ,但 72小时时恢复到原水平 ,同时转染siRNA后细胞生长受到抑制。结论 :siRNA可以有效的抑制K5 6 2细胞株中bcr abl融合基因的表达。

RGD-TAT-KDRsiRNA慢病毒载体构建及抗肿瘤活性

目的构建精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(RGD)介导的穿膜肽(TAT)-血管内皮细胞生长因子受体(KDR)siRNA融合基因慢病毒载体,探讨其对人肺癌A549细胞的抑制效果。方法设计合成编码RGD的2条寡核苷酸链,克隆到p GC/TAT-KDR siRNA载体的TAT下游,构建TAT-RGD-KDR siRNA融合基因载体;慢病毒包装并感染A549细胞;通过Western blot和real-time PCR检测A549细胞KDR基因表达水平;通过噻唑蓝法、双色法流式细胞仪和Transwell侵袭实验检测KDR基因沉默对A549细胞凋亡和侵袭力的影响。结果测序和Blast比对证实重组载体中的RGD序列与设计一致;TAT-RGD-KDR siRNA融合基因慢病毒载体转染A540细胞KDR mRNA和蛋白表达水平分别为(22.7±3.9)%和(19.3±2.7)%,明显低于TAT-KDR siRNA融合基因慢病毒载体转染组,差异有统计学意义(P<0.01);该载体具有较强的抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡和抑制细胞体外侵袭力的作用。结论 TAT-RGD-KDR siRNA融合基因慢病毒载体通过抑制细胞KDR mRNA和蛋白表达,抑制A549细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡。

TE融合基因调控Wnt/β-catenin通路促进前列腺癌细胞转移

[目的]研究TE融合基因对前列腺癌DU145细胞转移的影响。[方法]将前列腺癌DU145细胞随机分为3个实验组:siRNA NC实验组、siRNA T2E实验组与KYA1797K实验组。采用MTT实验检测DU145细胞的增殖速度,Transwell实验检测DU145细胞的侵袭能力,流式细胞术检测DU145细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹方法分析DU145细胞中Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。[结果]与siRNA NC实验组比较,siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞增殖能力下降(1.73±0.35 vs 1.02±0.22 vs 0.91±0.27,P<0.05);siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞侵袭数量下降(167.28±12.89 vs 78.21±9.26 vs 82.33±10.33,P<0.05);siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞凋亡率增加(8.25%±0.89%vs 28.82%±2.56%vs 29.46%±1.83%,P<0.05);siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞Wnt 3α、β-catenin蛋白水平下调(P<0.05)。[结论]抑制TE融合基因表达后,DU145细胞的增殖速度与侵袭数量降低,凋亡率增加,该机制与TE融合基因调节Wnt/β-catenin途径相关。