TAT-XIAP融合蛋白对Aβ(25～35)诱导的阿尔茨海默病大鼠行为学的影响

目的研究TAT-XIAP融合蛋白对阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆能力的影响。方法将SD大鼠随机分成三组,对照组海马区注射生理盐水,模型组海马区注射Aβ(25～35),给药组尾静脉注射TAT-XIAP融合蛋白10 mg/kg。采用Morris水迷宫法检测AD大鼠的空间学习记忆能力。结果与模型组比较,给药组AD大鼠的Morris水迷宫实验逃避潜伏期缩短(P<0.05);游泳轨迹路线多在平台所在象限附近,呈趋向型。结论 TAT-XIAP融合蛋白能够改善AD大鼠空间学习记忆能力。

TAT-XIAP融合蛋白对缺血缺氧新生大鼠远期学习记忆能力的影响

目的探讨TAT-XIAP融合蛋白对缺血缺氧性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠生后学习记忆能力的影响。方法将出生7 d的SD大鼠,经氯胺酮腹腔静脉注射麻醉后结扎左颈总动脉,建立HIBD动物模型,通过水迷宫实验筛选出学习记忆障碍大鼠20只,分为TAT-XIAP融合蛋白给药组和对照组,每组10只。TAT-XIAP融合蛋白给药组给予TAT-XIAP大鼠尾静脉注射,对照组给予同体积生理盐水大鼠尾静脉注射,4周后应用水迷宫检测大鼠学习记忆能力。结果游泳轨迹路线多在平台所在象限附近,呈趋向型。与对照组对比,TAT-XIAP融合蛋白给药组的逃避潜伏期时间明显缩短(P<0.05);穿越原平台位置的次数和在原平台象限游程、时间百分比均高于对照组(P<0.05)。结论TAT-XIAP融合蛋白可能改善缺血缺氧新生大鼠生后学习记忆能力。

融合蛋白pTAT-XIAP的原核表达及穿透血脑屏障功能的鉴定

目的构建pTAT-XIAP原核表达载体,以获得pTAT-XIAP融合蛋白,并研究该融合蛋白穿透血脑屏障的功能。方法在体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,转入大肠杆菌表达菌株BL21plysS进行诱导表达。pTAT-XIAP融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹鉴定融合蛋白。pTAT-XIAP融合蛋白腹腔注射SD大鼠体内,免疫荧光法检测在脑组织的分布。结果表达产物经SDS-PAGE及Western印迹分析后,在64kD处有一明显表达条带,与理论结果相符。免疫荧光法检测,pTAT-XIAP融合蛋白在大脑皮质、基底节等广泛分布。结论重组融合蛋白pTAT-XIAP成功表达并可穿透血脑屏障,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建

目的探索pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建。方法在体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,将pTAT-XIAP质粒转化至DH5α,培养筛选成功转化子,提取纯化质粒,电泳鉴定。结果pTAT-XIAP质粒在含氨苄青霉素的LB固体培养基上呈分散菌落生长,在无氨苄青霉素的LB固体培养基上成片生长,未经质粒转化的DH5α感受态细胞在含氨苄青霉素的LB固体培养基上未见菌落生长。电泳结果显示pTAT-XIAP质粒约4500bp,pTAT-HA质粒约3000bp,条带大小与质粒图谱一致。结论将大鼠XIAP基因插入PTAT-HA质粒,成功构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体。