Hippo信号通路转录效应因子TAZ/YAP对间充质干细胞分化的调控

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多能性细胞,可分化为软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等不同世系细胞。一些世系特异性转录因子,如Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)、过氧化物增殖子激活型受体γ(Peroxisome proliferator-activator receptor gamma,PPARγ)、肌发生分化因子1(Myogenic differentiation 1,MyoD)等在MSCs分别向成骨、脂肪和生肌细胞分化过程中具有关键的调控作用。近几年研究发现,Hippo信号通路可通过其转录效应因子TAZ(Tafazzin)/YAP(Yes-associated protein)对上述世系特异性转录因子进行调控,从而影响MSCs的分化方向。TAZ与RUNX2结合可增强骨发生程序的执行并促进MSCs向成骨分化,而与PPAR-γ结合则会抑制MSCs向脂肪细胞方向分化。在MSC样细胞中,TAZ异位表达会以一种MyoD依赖方式增加生肌基因表达并加速肌纤维生成。此外,BMP-2、TNF-α、Eph-Ephrin等信号通路,小分子药物(KR62980、TM-25659等)以及机械刺激都可通过调控Hippo信号通路转录效应因子TAZ/YAP活性影响MSCs的命运决定。文章综述了哺乳动物Hippo信号通路的转导途径,转录效应因子TAZ/YAP与间充质世系特异性转录因子的作用机理,及与其他信号通路相互作用对MSCs分化的影响。

Hippo-TAZ/YAP信号通路在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

Hippo信号通路是近年来新发现的一个高度保守的蛋白激酶级联通路。其中,TAZ/YAP是该信号通路中核心的效应分子。大量研究证实,TAZ/YAP与人类大多数恶性肿瘤的发生或生长密切相关,其异常活化可促进肿瘤细胞增殖、侵袭转移、增强化疗耐药及获得干细胞样特性。近年来研究表明,TAZ/YAP异常活化与头颈部肿瘤的发生发展密切相关,其有可能作为头颈部肿瘤治疗的潜在靶点。本文综述Hippo通路的最新研究进展,重点关注的是该通路中的TAZ/YAP在头颈部鳞状细胞癌中的调控作用,为头颈部鳞状细胞癌的研究和治疗提供新的思路和策略。

水苏碱调节YAP/TAZ信号通路对膀胱癌细胞恶性生物学特征的影响

目的:探讨水苏碱(STA)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/具有PDZ结合基序的转录辅激活因子(TAZ)信号通路对膀胱癌细胞恶性生物学行为和糖酵解的影响。方法:以膀胱癌T24细胞为研究对象,将T24细胞分为对照组(不加药物处理),STA低(STA-L)、中(STA-M)、高剂量(STA-H)组,YAP/TAZ信号通路激活剂(GA-017)组和GA-017+STA-H组。CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验测定细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;利用试剂盒检测影响糖酵解的因子水平(ATP、乳酸生成量、葡萄糖消耗量);免疫印迹检测caspase-3、Bcl-2、MMP-9、YAP、TAZ蛋白表达。结果:与对照组比较,STA各组及GA-017+STA-H组T24细胞的增殖活性、克隆形成率、侵袭数目、MMP-9蛋白表达、Bcl-2蛋白表达、ATP水平、乳酸生成量、葡萄糖消耗量显著下降,细胞凋亡率及caspase-3表达显著上升,STA-M、STA-H组及GA-017+STA-H的YAP、TAZ蛋白表达下降,差异具有统计学意义;GA-017组上述指标与STA-H组呈现相反的变化趋势;与STA-H组比较,GA-017+STA-H组可在一定程度逆转STA对于T24细胞恶性生物学和糖酵解行为的抑制作用。结论:STA可通过抑制YAP/TAZ信号通路表达,从而抑制膀胱癌细胞T24的增殖、侵袭、糖酵解,促进T24细胞凋亡。

圣草酚调节YAP/TAZ信号通路对牙周炎牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究圣草酚调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子(TAZ)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(hPDLSC)成骨分化的影响。方法:采用结扎法进行大鼠牙周炎造模,造模成功后随机分为模型组和圣草酚组,每组6只,另取6只正常大鼠作为对照组。体外培养hPDLSC,以10μg/mL的LPS诱导的同时采用0、40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚处理,采用试剂盒检测各处理组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性后筛选圣草酚最佳作用浓度。将hPDLSC随机分为对照组、LPS组、LPS+圣草酚组、LPS+空载组、LPS+圣草酚+YAP敲低组,诱导其成骨分化并以LPS、圣草酚和质粒分组处理。采用HE染色观察牙周组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织及细胞YAP、TAZ表达;采用ALP活性检测试剂盒、ALP染色及茜素红染色检测各组细胞成骨分化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清及细胞炎症因子前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用实时荧光定量PCR与免疫印迹实验检测各组牙周组织细胞成骨分化因子Runx2、OSX、骨桥蛋白(OPN)表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠牙周组织呈现明显的病理损伤,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平增高,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,圣草酚组大鼠牙周组织病理损伤减轻,血清PGE2、IL-6及与IL-18水平下降,牙周组织YAP、TAZ mRNA与蛋白表达增高(P<0.05)。40、80、160、320、480μmoL/L的圣草酚均可升高LPS诱导的hPDLSC中ALP活性(P<0.05),其升高作用随着圣草酚浓度升高而增强并在320μmoL/L时达到平台期,故选择320μmoL/L的圣草酚进行后续实验。与对照组相比,LPS组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+圣草酚组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平降低(P<0.05);LPS+空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与LPS+圣草酚组相比,LPS+圣草酚+YAP敲低组细胞YAP、TAZ mRNA与蛋白表达、ALP阳性相对比例、ALP活性、矿化结节相对比例、Runx2及OSX、OPN mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),PGE2、IL-6及与IL-18水平升高(P<0.05)。结论:圣草酚可减轻牙周炎大鼠的炎症损伤,并通过上调YAP/TAZ通路蛋白表达抑制LPS诱导的hPDLSC炎症,从而促使其成骨分化。

咪达唑仑调节YAP/TAZ信号通路对骨肉瘤细胞增殖凋亡和侵袭的影响

目的:探究咪达唑仑(MDZ)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序转录共激活因子(TAZ)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:qRT-PCR、Western blot检测人正常成骨细胞系、OS细胞系YAP、TAZ mRNA和蛋白的表达,筛选最佳干预细胞系;以不同浓度的MDZ(0、12.5、25、50、100、200μmoL/L)干预OS细胞,MTT法检测细胞增殖活性,筛选最佳干预浓度;将OS细胞随机分成control组、MDZ组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-YAP/TAZ组,qRT-PCR法检测转染效率;EdU染色、流式细胞仪和Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡和侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及YAP、TAZ蛋白表达;构建OS裸鼠模型,分为对照组和MDZ组,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、YAP、TAZ蛋白表达,TUNEL染色检测凋亡。结果:OS细胞系中YAP、TAZ mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);MDZ显著降低PCNA、N-cadherin、YAP、TAZ表达,抑制MG63、U20S细胞增殖和侵袭,升高Bax、E-cadherin表达,促进细胞凋亡。过表达YAP/TAZ可逆转MDZ对MG63、U20S细胞增殖和侵袭的抑制作用,对MG63、U20S细胞凋亡的促进作用(P<0.05);体内实验表明,MDZ显著降低移植瘤质量、体积及Ki-67、YAP、TAZ表达水平,促进移植瘤细胞凋亡(P<0.05)。结论:MDZ可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,抑制OS细胞增殖和侵袭,促进凋亡。

槐耳多糖调节YAP/TAZ信号通路对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨槐耳多糖(PST)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞生物学行为的影响。方法 将OS细胞系G292细胞分为G292组(未做任何处理的G292细胞)、L-PST组(1μg/mL PST)、M-PST组(2.5μg/mL PST)、H-PST组(5μg/mL PST)、GA-017组(10μmol/L YAP/TAZ信号通路激活剂GA-017处理G292细胞)、H-PST+GA-017组(5μg/mL PST+10μmol/L GA-017)。CCK-8法检测细胞活性;流式细胞术检测G292细胞凋亡;划痕实验以及Transwell法检测G292细胞迁移和侵袭;Western blot检测YAP/TAZ通路蛋白、EMT相关蛋白、凋亡蛋白水平。结果 PST抑制OS细胞系MG63、Saos-2、U20S、G292细胞活性,且G292细胞的A_(450)最小,因此,以G292细胞为研究对象。与G292组相比,M-PST组、H-PST组G292细胞A_(450)值、迁移率、侵袭数量以及vimentin、N-cadherin、Bcl-2、p-YAP/YAP、TAZ蛋白水平均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),GA-017组呈现相反的趋势(P<0.05),而L-PST组没有显著差异(P>0.05);GA-017削弱了H-PST对G292细胞恶性行为的抑制作用。结论 PST可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来抑制OS细胞的增殖、迁移和侵袭。

25-OH维生素D通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制对新生儿感染性肺炎的抗炎作用研究

目的探讨25-OH维生素D(25-OH vitamin D,25-OH-VD)对新生儿感染性肺炎(neonatal infectious pneumonia,NIP)的抗炎作用及其作用机制。方法选取2022年1月~2023年1月成都市妇女儿童中心医院收治的65例NIP患儿,根据病情严重程度,分为轻症组(n=34)和重症组(n=31),另选取同期60例健康新生儿为对照组。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清25-OH-VD,白细胞介素-2(inteleukin-2,IL-2)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β水平;蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、细胞核转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Yes相关蛋白(nucleus-Yes-associated protein,n-YAP)和细胞核转录共激活因子PDZ结合基序(nucleus-transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,n-TAZ)通路相关蛋白表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肺上皮细胞构建NIP体外模型,分为Control组、LPS组和LPS+VD组;CCK-8检测细胞活力;qRT-PCR检测各组细胞中细胞色素P450家族成员28B1(recombinant cytochrome P45027B1,CYP27B1)和VDR的mRNA表达;免疫细胞化学法检测各组细胞YAP阳性细胞核数;免疫荧光检测各组细胞YAP/TAZ复合物核转位;蛋白免疫印迹法检测各组细胞炎性因子相关蛋白表达。结果与对照组相比,轻症组和重症组患儿血清中IL-2(1.91±0.18μg/L,2.63±0.27μg/L vs 1.05±0.12μg/L),IFN-γ(1.73±0.13μg/L,2.18±0.19μg/L vs 1.03±0.07μg/L),TNF-α(1.79±0.08μg/L,2.38±0.13μg/L vs 0.97±0.04μg/L)和IL-1β(2.18±0.07μg/L,2.59±0.11μg/L vs 0.96±0.02μg/L)含量以及TGF-β(1.67±0.21,2.43±0.42 vs 1.02±0.04),n-YAP(2.08±0.11,4.23±0.37 vs 0.99±0.02)和n-TAZ(2.47±0.42,4.21±0.58 vs 1.03±0.05)蛋白表达逐渐升高,25-OH-VD(12.57±2.21μg/L,7.85±2.03μg/L vs 16.76±1.02μg/L)含量和VDR(0.73±0.09,0.51±0.06 vs 1.03±0.08)蛋白表达逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.983~56.782,均P<0.001)。细胞实验结果显示,与Control组相比,LPS组细胞存活率在12h(76.23%±0.73%vs 116.72%±2.14%),24 h(57.23%±0.94%vs 125.76%±1.67%)和48 h(41.23%±0.56%vs 138.56%±1.35%)时显著降低(t=10.342,26.562,37.821);YAP阳性细胞数(47.35±3.47个vs 12.46±1.34个)和YAP/TAZ复合物核转位率(2.56%±0.32%vs 1.01%±0.06%)升高(t=46.362,26.921);IL-2(2.03±0.09 vs 1.03±0.08),IFN-γ(2.07±0.21 vs 1.02±0.04),TNF-α(2.18±0.11 vs 0.99±0.02)和IL-1β(3.17±0.42 vs 1.03±0.05)的蛋白表达水平升高(t=28.341,26.713,31.235,47.823),差异具有统计学意义(均P<0.001),而两组间CYP27B1和VDR mRNA表达差异无统计学意义(t=0.872,0.786,均P>0.05)。与LPS组比较,LPS+VD组在12 h(85.23%±0.36%),24 h(79.82%±0.63%),48 h(76.28%±0.72%)的细胞存活率和CYP27B1(4.42±0.14),VDR mRNA(5.13±0.56)表达升高,YAP阳性细胞核数(24.41±3.23个)和YAP/TAZ复合物核转位率(1.47%±0.26%)降低,IL-2(1.21±0.06),IFN-γ(1.13±0.42),TNF-α(1.03±0.37)和IL-1β(1.61±0.58)蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=7.263,19.892,23.145,27.872,26.982,14.762,13.623,18.273,25.314,27.873,22.134,均P<0.01)。结论血清25-OH-VD水平与NIP严重程度相关,外源性给予VD补充可通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制发挥抗炎作用,减轻NIP损伤。

辛伐他汀通过YAP/TAZ抗前列腺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的:考察辛伐他汀对22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法:复苏并培养22Rv1和DU145前列腺癌细胞株,给予不同浓度辛伐他汀(2μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)进行干预。辛伐他汀对22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用采用MTT法检测;对22Rv1和DU145前列腺癌细胞凋亡的影响用流式检测;对22Rv1和DU145前列腺癌细胞增殖相关蛋白p-mTOR(Ser2448)、p-Akt(Ser473)、凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP以及YAP、p-YAP、 TAZ表达的影响用Western Blot检测;通过过表达TAZ考察TAZ在辛伐他汀抗前列腺癌细胞增殖中的作用。结果:辛伐他汀抑制22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖,并呈浓度依赖性和时间依赖性,在分子水平,辛伐他汀浓度依赖性地抑制了p-mTOR(Ser2448)和p-Akt(Ser473)的表达;辛伐他汀浓度依赖性地诱导22Rv1和DU145前列腺癌细胞发生凋亡,并在分子水平浓度依赖性地促进了Caspase-3、Caspase-9和PARP的剪切;辛伐他汀浓度依赖性地上调p-YAP的表达,抑制TAZ的表达,过表达TAZ减弱了辛伐他汀对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用和增殖抑制作用。结论:辛伐他汀可能通过抑制YAP/TAZ诱导前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞的增殖。

低氧运动预适应激活自噬调控Hippo/YAP/TAZ信号通路减轻急性低氧力竭运动大鼠骨骼肌损伤

目的:探讨低氧运动预适应激活自噬调控Hippo/YAP/TAZ信号通路对急性低氧力竭运动大鼠骨骼肌保护的机制。方法:50只6周龄SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白对照组(Con组,n=10)、单纯急性低氧力竭运动组(HE组,n=10)、低氧预适应+急性低氧力竭运动组(HP+HE组,n=10)、运动预适应+急性低氧力竭运动组(EP+HE组,n=10)、低氧预适应+运动预适应+急性低氧力竭运动组(EP/HP+HE组,n=10)。预适应周期2 w, EP+HE组及EP/HP+HE组进行2次/d常压常氧跑台训练;HP+HE组及EP/HP+HE组进行10 h/d间歇性低氧暴露(FiO213.5%)。预适应后HE组、HP+HE组、EP+HE组及EP/HP+HE组大鼠进行低氧环境跑台力竭训练(FiO211.9%~12.0%)。低氧力竭运动后2 h,尾静脉取血检测血清骨骼肌损伤、炎症反应和氧化应激指标,苏木精-伊红染色观察腓肠肌病理特征,并检测腓肠肌自噬相关蛋白、Hippo/YAP/TAZ信号通路蛋白及mRNA。结果:(1)与HE组比较,预适应组大鼠低氧力竭运动后的腓肠肌结构损伤、炎症反应和氧化应激明显减轻。(2)HE组Atg5、Beclin1蛋白表达显著低于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP/HP+HE组Atg5、Beclin1蛋白表达显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组LC3-Ⅱ蛋白表达显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP+HE组及EP/HP+HE组显著高于HP+HE组(P<0.05)。(3)HE组MST1 mRNA显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP+HE组及EP/HP+HE组显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组LATS1 mRNA显著低于预适应组(P<0.05);HE组YAP mRNA显著高于预适应组(P<0.05),EP/HP+HE组显著低于HP+HE组(P<0.05);HE组及HP+HE TAZ mRNA显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组均显著降低(P<0.05)。(4)HE组MST1、LATS1及其磷酸化水平显著低于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP/HP+HE组MST1显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组YAP蛋白显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05);HE组TAZ蛋白显著高于预适应组均显著降低(P<0.05),EP/HP+HE组均显著低于HP+HE组(P<0.05)。结论:低氧运动预适应可能通过激活骨骼肌自噬抑制Hippo/YAP/TAZ信号通路减轻急性低氧力竭运动大鼠的骨骼肌损伤、炎症反应和氧化应激反应。

他克莫司调节YAP/TAZ信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨他克莫司(FK506)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将对数生长期SKOV3细胞分为对照组、阴性对照(si-NC)组(转染si-NC质粒)、沉默YAP载体(si-YAP)组(转染si-YAP)、过表达质粒阴性对照(pcDNA-NC)组(转染pcDNA-NC)、过表达YAP质粒(pcDNA-YAP)组(转染pcDNA-YAP)、FK506组(500μg/L)、FK506+si-NC组(500μg/L FK506+转染si-NC质粒)、FK506+si-YAP组(500μg/L FK506+转染si-YAP)、FK506+pcDNA-NC组(500μg/L FK506+转染pcDNA-NC)、FK506+pcDNA-YAP组(500μg/L FK506+转染pcDNA-YAP)。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测YAP、TAZ mRNA表达,Western blot检测YAP、TAZ、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Bcl2-相关X蛋白(Bax)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平。结果:与IOSE80相比,SKOV3、OVCAR3、UWB1.289细胞中YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与pcDNA-NC组相比,pcDNA-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与对照组相比,FK506组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、AZ、CyclinD1、MMP-2蛋白表达均显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P<0.05);与FK506+si-NC组相比,FK506+si-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2表达显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P<0.05);与FK506+pcDNA-NC组相比,FK506+pcDNA-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2表达显著增加,凋亡率及Bax表达显著降低(P<0.05)。结论:FK506通过抑制YAP/TAZ信号通路阻止SKOV3细胞增殖、侵袭,诱导其凋亡。

Hippo信号通路中的核心因子YAP/TAZ参与骨形成的作用与机制

背景:随着机械信号在骨骼中的作用研究逐渐增多,作为力学敏感因子的YAP/TAZ也逐渐受到大众关注。现有研究发现YAP/TAZ可能在骨形成的过程中作为一个重要介质参与其中,但具体机制尚不清楚。目的:对YAP/TAZ参与骨形成的最新研究进展进行综述。方法:第一作者以“Hippo pathway,YAP/TAZ,Bone,Osteogenesis”为英文检索词,以“Hippo信号通路、YAP/TAZ、骨骼、成骨”为中文检索词,检索PubMed数据库和中国知网2016年至2022年3月发表的相关文献,对筛选出的文献进行归纳分析。最终纳入56篇相关文献进行综述。结果与结论:①YAP/TAZ作为Hippo通路的核心因子,在其功能调控上具有特殊性,除了在分子水平上可以调控其活性,细胞微环境的改变,如细胞浓度、细胞形状和细胞外基质的刚度也可以促使其活性改变从而发挥不同功能作用。②YAP/TAZ参与成骨信号传导,并且调控也受细胞微环境影响。过表达或沉默细胞中的YAP/TAZ会促使或抑制成骨信号的传导,从而改变细胞分化结局。③YAP/TAZ参与骨组织细胞的成骨过程,并对不同类型的骨组织细胞有不同功能。但对于过表达或沉默YAP/TAZ方法不同,选择观察细胞种属类型差异较大,结果难以统一量化。④动物实验中证实YAP/TAZ对正常骨骼形态及颌面部形态的正常发育有着至关重要的作用,并且在不同成骨分化阶段有着不同的功能。然而对于实验动物敲除YAP/TAZ条件基因不统一、观察时机不一致导致实验成果难以相互比较。YAP/TAZ在骨形成中有着重要地位,但对于其作用机制还有待深入研究,期待后续有学者深入探索其作用机制,并利用其特性在骨性疾病中发挥作用。

LncRNANNT-AS1通过调控miR-582-5p/NCKAP1轴激活Hippo-YAP/TAZ信号通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和干细胞干性影响

目的检测膀胱癌中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase antisense RNA 1,NNT-AS1)表达情况,研究其对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响及可能分子机制。方法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测膀胱癌组织标本及细胞中LncRNA NNT-AS1表达情况;将膀胱癌细胞转染分为sh-NC组,sh-NNT-AS1组,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组和sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组。采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度值(A值);Transwell实验检测细胞迁移、侵袭穿膜数;细胞成球实验检测干细胞干性。检索starBase和TargetScan数据库,并通过双荧光素酶报告基因实验预测验证LncRNA NNT-AS1和miR-582-5p,miR-582-5p与NCKAP1的靶向结合关系。Western blot检测膀胱癌干细胞标志蛋白(CD44,ALDH1A1,Oct4,Nanog)及Hippo-YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达灰度值。结果与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA NNT-AS1表达水平(0.34±0.07 vs 1.15±0.21)明显升高,差异有统计学意义(t=16.364,P<0.001)。与人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞(1.00±0.01)相比,膀胱癌细胞T24,5637,UM-UC-3和TCC-SUP中LncRNA NNT-AS1表达(6.03±0.17,4.66±0.36,5.47±0.26,3.02±0.20)明显升高,差异有统计学意义(t=17.472~51.160,均P<0.001)。与sh-NC组相比,在24,48和72 h时sh-NNT-AS1组细胞增值能力(A值)均显著降低(0.80±0.01 vs 1.07±0.06,1.18±0..07 vs 1.83±0.03,1.89±0.07 vs 2.53±0.06),差异有统计学意义(t=7.688,14.783,12.024,均P<0.05);sh-NNT-AS1组细胞迁移穿膜数(55.00±2.65个vs 354.30±7.84个)、细胞侵袭穿膜数(45.67±2.33个vs 303.00±9.07个)及膀胱癌干细胞成球数(20.85±2.17个vs 41.35±3.67个)显著降低,差异具有统计学意义(t=-62.641,-47.596,8.328,均P<0.001)。与sh-NC组相比,sh-NNT-AS1组细胞中CD44(0.04±0.01 vs 1.12±0.02),ALDH1A1(0.23±0.01 vs 1.16±0.05),Oct4(0.17±0.02 vs 1.10±0.04),Nanog(0.49±0.03 vs 1.24±0.03)的蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=83.656,31.591,36.019,30.619,均P<0.001)。与si-NC组相比,sh-NNT-AS1组CD44+CD133+细胞比例(9.30%±0.79%vs 88.50%±2.77%)明显降低,差异有统计学意义(t=-47.624,P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-582-5p为LncRNANNT-AS1靶基因,NCKAP1为miR-582-5p靶基因;LncRNA NNT-AS1靶向调控miR-582-5p/NCKAP1轴。与sh-NNT-AS1组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞增值能力(A值)均明显升高(0.98±0.03 vs 0.73±0.06,1.74±0.04 vs 1.22±0.05,2.33±0.16 vs 1.69±0.14),差异有统计学意义(t=5.977~11.628,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞增值能力(A值)显著降低(0.69±0.04,1.01±0.07,1.39±0.08),差异有统计学意义(t=7.877~16.323,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞迁移穿膜数(322.31±28.45个vs 81.42±13.22个)、细胞侵袭穿膜数(316.07±30.21个vs 92.13±12.65个)及膀胱癌干细胞成球数(38.55±2.20个vs 18.98±1.16个)显著增加,差异具有统计学意义(t=15.115,13.158,14.592,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞CD44(1.05±0.08 vs 0.10±0.01),ALDH1A1(1.20±0.16 vs 0.22±0.02),Oct4(1.32±0.14 vs 0.19±0.03),Nanog(0.97±0.12 vs 0.15±0.04),YAP(1.29±0.11 vs 0.42±0.07)和TAZ(1.41±0.16 vs 0.35±0.05)蛋白表达灰度值均显著增加,差异具有统计学意义(t=10.650~21.243,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞迁移穿膜数(65.33±12.60个)、细胞侵袭穿膜数(71.08±15.19个)、膀胱癌干细胞成球数(11.36±1.05个)均显著降低,差异具有统计学意义(t=16.125,14.395,21.365,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞CD44(0.25±0.05),ALDH1A1(0.61±0.11),Oct4(0.22±0.08),Nanog(0.44±0.07),YAP(0.25±0.09)和TAZ(0.30±0.04)蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=6.412~17.889,均P<0.001)。结论膀胱癌中LncRNA NNT-AS1表达上调,其对膀胱癌细胞增殖、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响,可能是通过调控miR-582-5p/NCKAP1分子轴,激活Hippo-YAP/TAZ信号通路完成。

基于Hippo/yap/TAZ途径探讨雷公藤内酯醇-聚乙烯亚胺-环糊精逆转卵巢癌耐药的作用及机制

目的观察雷公藤内酯醇-聚乙烯亚胺-环糊精复合物(TP-PEI-CyD)对人卵巢癌顺铂耐药细胞(SKOV3/DDP)的作用及其可能的作用机制。方法采用CCK-8法测定雷公藤内酯醇单体(triptolide,TPL)、TP-PEICyD对人正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的细胞毒性,筛选TP-PEI-CyD对SKOV3/DDP的低毒浓度;采用低毒浓度TP-PEI-CyD、TPL处理SKOV3/DDP细胞,流式细胞术检测SKOV3/DDP细胞凋亡,划痕实验检测SKOV3/DDP细胞迁移,Transwell检测SKOV3/DDP细胞侵袭,RT-PCR及Western Blot法检测SKOV3/DDP细胞内Hippo、yap及TAZ mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,TPL、TP-PEICyD均可明显抑制IOSE80、SKOV3/DDP细胞的生长,且细胞毒性随着TPL、TP-PEI-CyD浓度的升高而增加,与TPL组相比,TP-PEI-CyD对IOSE80细胞的毒性明显降低(P<0.05),但对SKOV3/DDP细胞的抑制率无明显变化;低毒浓度的TP-PEI-CyD、TPL作用于SKOV3/DDP细胞后:TP-PEI-CyD组、TPL组SKOV3/DDP细胞凋亡率显著增加(P<0.01);迁移能力、侵袭能力显著降低(P<0.01);SKOV3/DDP细胞中Hippo、yap及TAZ的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05);而TP-PEI-CyD组与TPL单体组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);结论雷公藤内酯醇耦合聚乙烯亚胺-环糊精后,其毒副作用降低,且可有效逆转SKOV-3细胞的肿瘤耐药性,其疗效等同于雷公藤内酯醇单药,其可能是通过调节Hippo/yap/TAZ信号通路来实现的。

YAP和TAZ在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的:探究YAP和TAZ在人骨肉瘤组织中的表达及其与临床病理之间的相关性。方法:使用免疫组织化学方法对47例骨肉瘤组织及20例骨软骨瘤组织中的YAP和TAZ进行检测。结果:YAP在骨肉瘤和骨软骨瘤中的阳性表达率分别为74.5%和30%。TAZ在骨肉瘤和骨软骨瘤中的阳性表达率分别为59.6%和15%。YAP与骨肉瘤的大小(P<0.05)有关;而TAZ则与骨肉瘤的远处转移及Ennecking分期有关(P<0.05)。结论:YAP和TAZ在恶性骨肉瘤中的高表达,预示着YAP和TAZ参与了肿瘤的发生发展及骨肉瘤的远处转移,为治疗骨肉瘤及骨肉瘤肺部转移提供了新的思路,为研制治疗骨肉瘤药物提供新靶点。

YAP、LPA及TAZ在头颈鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)、Yes相关蛋白(YAP)及含PDZ结合区的共转录激活因子(TAZ)在头颈鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择性收集雅安市人民医院病理科2010年1月至2016年12月期间,手术切除的病理组织石蜡标本共计136例,其中包括头颈鳞癌癌旁正常组织37例、头颈良性瘤样组织35例、头颈鳞癌64例,所有标本术前均无放化疗史,采用免疫组化及实时定量PCR检测LPA、YAP及TAZ在各组织中的表达及临床相关参数的关系。结果 LPA m RNA在头颈鳞癌癌旁正常组织、良性瘤样组织和鳞癌组织中的表达相近(P>0.05);YAP m RNA在鳞癌组织中的表达要高于癌旁组织、瘤样组织中的表达(P<0.05);TAZ m RNA在头颈3种组织中呈低表达,但鳞癌组织的表达明显高于良性瘤样组织及癌旁正常组织(P<0.05);YAP及TAZ蛋白在头颈鳞癌组织中的表达显著高于在癌旁正常组织和良性瘤样组织中的表达(P<0.05);鳞癌患者YAP的表达在肿瘤>3.0 cm、淋巴结阳性显著高于对照组(P<0.05);TAZ的表达在肿瘤中低分化、肿瘤>3.0 cm、淋巴结阳性及Ⅲ~Ⅳ期高于对照组(P<0.05)。结论 YAP及TAZ在头颈鳞癌中的表达与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移密切相关,而LPA的表达无显著差异及相关性。

YAP、TAZ在人喉癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Hippo通路相关蛋白YAP和TAZ在人喉癌组织和正常癌旁组织中的表达差异及临床意义。方法收集77例喉癌患者肿瘤组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法分别检测YAP、TAZ蛋白在喉癌患者肿瘤组织和正常癌旁组织中的表达情况,分析其与喉癌患者临床因素的关系及对预后的影响。结果YAP和TAZ在喉癌组织中表达明显高于正常癌旁组织(P<0.001)。喉癌组织中YAP和TAZ表达水平与患者年龄、性别和肿瘤解剖位置无关(P>0.05),与患者肿瘤分期、有无淋巴结转移、肿瘤直径、分化程度相关(P<0.05)。相关性分析显示YAP表达与TAZ呈正相关(γ=0.244,P=0.025)。YAP、TAZ高表达患者5年生存率明显低于低表达患者(P<0.05)。结论YAP、TAZ在喉癌组织中高表达且与患者临床资料及预后相关,YAP、TAZ蛋白可能作为喉癌预后的判断指标在喉癌的治疗中发挥作用。

YAP、TAZ在大肠息肉中的表达及临床意义

目的检测YAP、TAZ在大肠息肉中的表达并探讨其临床意义。方法分别选取28例大肠增生性息肉组织、28例大肠腺瘤性息肉组织、32例大肠癌组织及24例正常大肠黏膜组织,采用免疫组化Envision两步法检测两种蛋白在4种组织中的表达情况。结果 YAP、TAZ在正常大肠组织、大肠增生性息肉组织、大肠腺瘤性息肉组织及癌组织的表达率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);二者的表达与大肠腺瘤性息肉有蒂无蒂及大小有关(P<0.05);二者在大肠腺瘤性息肉组织中的表达呈正相关(r=7.582,P<0.05)。结论 YAP、TAZ的表达率与大肠息肉的严重程度关系密切,检测大肠息肉组织中的YAP、TAZ蛋白的表达水平有助于早期发现大肠癌。

乳腺癌细胞中AIP1/YAP/TAZ的表达及临床意义

目的:通过检测乳腺癌4T1细胞系中AIP1/YAP/TAZ的表达量及敲除AIP1后YAP/TAZ表达量的差异,为乳腺癌寻找新的生物标志物和治疗手段。方法:选取乳腺癌4T1细胞系,通过RT-PCR及Western-Blot检测AIP1/YAP/TAZ的表达量及其差异。结果:AIP1/YAP/TAZ在乳腺癌中均有表达,且敲除AIP1后YAP表达量明显减少(P<0.05),TAZ表达量也减少。结论:AIP1/YAP/TAZ可作为一种潜在的生物标志物来预测乳腺癌的恶性程度,为探索乳腺癌的治疗提供新的方向。

Hippo信号通路核心分子Yap/Taz在脑胶质瘤组织中表达水平的研究

目的研究脑胶质瘤组织中Hippo通路核心分子Yap/Taz在蛋白水平的表达情况及其亚细胞定位,以及与脑胶质瘤的相关性。方法采用免疫印迹（WB）及免疫组化（IHC）技术检测Hippo通路相关蛋白Yap/Taz在非肿瘤脑组织及脑胶质瘤组织中的表达水平。结果 WB检测发现Yap和Taz在胶质瘤组织中表达水平较非肿瘤脑组织高,其表达水平随肿瘤级别增高而增高,差异有统计学意义（P〈0.05~0.01）;免疫组化检测发现Yap和Taz均主要定位于细胞核中,在胶质瘤组织中表达水平较非肿瘤脑组织高,其表达水平随肿瘤级别增高而增高,差别有统计学意义（＊＊P〈0.01）。结论 Yap和Taz在人脑胶质瘤组织中表达水平升高,提示其与脑胶质瘤的发生发展密切相关。

YAP、TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨YAP、TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。方法 :选取2014年2月—2017年3月保存的口腔鳞状细胞癌组织标本113例,选取癌旁组织(距癌组织>2 cm)作为对照,采用免疫组织化学染色法检测YAP和TAZ蛋白的表达,比较其与临床病理特征的关系。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :癌组织YAP和TAZ蛋白阳性表达率分别为65.49%和61.95%,显著高于癌旁组织(P<0.05);中低分化、有淋巴结转移、临床Ⅲ期、肿瘤直径>4 cm的患者,YAP蛋白阳性表达率分别为83.64%、80.33%、82.35%和82.61%,显著高于高分化、无淋巴结转移、临床Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm的患者(P<0.05);中低分化、临床Ⅲ期、肿瘤直径>4 cm的患者,TAZ蛋白阳性表达率分别为80.00%、85.29%和82.61%,显著高于高分化、临床Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm的患者(P<0.05);YAP蛋白与TAZ蛋白表达呈正相关(r_s=0.571,P<0.05)。结论 :YAP和TAZ蛋白在口腔鳞状细胞癌中呈高表达,与肿瘤分化程度、肿瘤直径等临床病理特征有关,提示Hippo信号通路可能参与了口腔鳞状细胞癌的发生与发展。