pLenti6/V5-DEST-TAZ载体的构建及其对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的影响

目的:构建人真核表达的TAZ慢病毒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ,转染293FT细胞获得重组慢病毒颗粒,探讨TAZ对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的调控作用。方法:将已经过测序验证的含有TAZ基因慢病毒入门质粒pENTR(tm)221-TAZ通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中。对重组质粒进行酶切鉴定,并在细胞中验证表达。将该重组载体和其他PackingMix3个质粒载体充分混合,用阳离子脂质体转染293FT细胞,培养和待细胞完全裂解后收集富含TAZ基因的病毒颗粒上清液,取适量上清液感染MC3T3-E1细胞,采用杀稻瘟菌素Blastcidin筛选,建立稳定过量表达TAZ蛋白的MC3T3-E1/TAZ细胞系。用条件培养基诱导MC3T3-E1和MC3T3-E1/TAZ细胞系向成骨细胞定向分化,vonKossa和茜素红染色观察MC3T3-E1和MC3T3-E1/TAZ细胞的成骨分化。结果:凝胶电泳和测序结果均证明TAZ重组慢病毒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ构建正确,并能在细胞中正确表达。与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染MC3T3-E1细胞。VonKossa染色和茜素红染色,MC3T3-E1/TAZ细胞系中生成的磷酸钙比MC3T3-E1细胞系中生成的磷酸钙多。结论:成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-TAZ,并能在细胞中正确表达;成功包装了TAZ病毒,并获得过表达TAZ的MC3T3-E1细胞;过表达TAZ促进MC3T3-E1向成骨细胞分化。

TAZ基因多态性与非贲门胃癌的关系

目的研究含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)基因单核苷酸多态性(SNP)与非贲门胃癌发病风险的关系。方法在460例非贲门胃癌病例和470例对照中,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239进行基因分型,采用非条件性Logistic回归分析各SNP与非贲门胃癌发病风险的关系。结果TAZ rs16861985与非贲门胃癌的发病风险关联,与携带CC基因型者相比,携带GC基因型者非贲门胃癌的发病风险增加(OR=1.547,95%CI:1.145~2.089);TAZ rs1055153与非贲门胃癌的发病风险关联,与携带GG基因型者相比,携带GT+TT基因型者非贲门胃癌的发病风险降低(OR=0.570,95%CI:0.400~0.814);TAZ rs6783790、rs12490239与非贲门胃癌的发病风险无关联;在TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239构建的单体型中,C-G-A-A单体型降低了非贲门胃癌的发生风险(OR=0.761,95%CI:0.612~0.945),G-G-A-G单体型增加了非贲门胃癌的发生风险(OR=1.894,95%CI:1.314~2.730);TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的四阶交互作用与非贲门胃癌的发病风险相关(P<0.05)。结论TAZ rs16861985、rs1055153在非贲门胃癌发生中起到了一定的作用;TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的C-G-A-A单体型降低了非贲门胃癌的发生风险,而G-G-A-G单体型增加了非贲门胃癌的发生风险;TAZ基因rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的交互作用在非贲门胃癌的发生中起到了协同效应。

YAP和TAZ在宫颈癌中表达及临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)和转录共激活因子PDZ结合基(TAZ)在宫颈癌组织和正常宫颈组织中表达及意义,分析二者与宫颈癌患者临床特征的相关性。方法采用免疫组化法检测65例宫颈癌组织(宫颈癌组)和33例正常宫颈组织(正常组)中YAP、TAZ蛋白表达。结果YAP、TAZ阳性表达率在宫颈癌组分别为83.07%、75.38%,在正常组分别为21.21%、12.12%,差异均有统计学意义(P<0.05)。在宫颈癌组织标本中YAP表达与组织浸润深度相比较差异有统计学意义(P<0.05),TAZ表达则与组织浸润深度相比较差异无统计学意义(P>0.05),而二者与宫颈癌组织分化程度、淋巴结转移和国际妇产科联盟(FIGO)分期均有统计学意义(P<0.05),与年龄无相关性(P>0.05)。结论YAP与TAZ蛋白在宫颈癌组织中高表达,Hippo信号通路的转录共激活因子YAP/TAZ蛋白在宫颈癌发生发展过程中起明显促进作用。

Hippo信号通路在肺纤维化过程中调控机制的研究进展

Hippo信号通路是一条存在于从低等动物到高等动物,高度保守且由蛋白激酶和转录辅助激活因子组成的级联激酶反应链,整合来自细胞微环境的物理和化学信号,调节多种细胞的形态和功能。生理条件下,Hippo通过磷酸化核心信号轴负性调控YAP/TAZ的转录活性,进而调控下游靶基因转录,参与多细胞生物的增殖、凋亡、分化等生理过程。近年来研究表明,Hippo通路的激活与失活,参与肺纤维化病理过程。本文对Hippo信号通路与肺纤维化的最新研究进展进行综述,为研究肺纤维化的治疗提供参考。