急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达

背景:据作者查新检索,国内外有关急性白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因表达的报道罕见。目的:观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达及其意义。方法:50例急性淋巴细胞白血病患者,其中32例急性B淋巴细胞白血病,18例急性T淋巴细胞白血病。同期选择27例非恶性血液病患者作为对照。取肝素抗凝的骨髓液2～4mL,用Ficoll液分离骨髓单个核细胞,半定量反转录聚合酶链反应法检测TAp63的表达。结果与结论:50例急性淋巴细胞白血病患者有49例表达TAp63,急性淋巴细胞白血病组明显高于非恶性血液病组(P<0.05),急性B淋巴细胞白血病表达水平显著高于急性T淋巴细胞白血病(P<0.05)。动态观察了5例初治急性淋巴细胞白血病化疗后不同阶段TAp63的表达变化,发现初治时TAp63表达,缓解后低表达或不表达,复发后又表达。结果表明TAp63在急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞的表达明显高于非恶性血液病患者,尤其在急性B淋巴细胞白血病患者中高表达。

Tet-on调控TAp63γ基因表达EC9706细胞系的建立及对细胞增殖的影响

目的:利用Tet-on基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础。方法:将调控质粒pTet-on转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮霉素筛选出阳性细胞克隆,RT-PCR法选择对Dox敏感的细胞克隆。最后用不同浓度Dox诱导,Westernblot法确定Dox的最佳诱导浓度。采用此浓度的Dox分别诱导EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ3组细胞,细胞增殖分析试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞生长抑制率。结果:Dox浓度为3mg/L时可诱导TAp63γ基因高表达,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ细胞的生长抑制率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE细胞(P<0.05或0.01)。结论:成功构建了Tet-on调控TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究食管鳞癌细胞内P63蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台。TAp63γ基因表达可使EC9706细胞增殖受到抑制。

TAp63在膀胱癌中的表达及临床意义

为探讨抑癌基因TAp63在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义,采用免疫组化SP法观察69例膀胱癌石蜡标本中TAp63的表达情况。结果表明膀胱癌组织中TAp63的阳性表达率为40.6%,阳性表达率随病理分级、临床分期升高而下降,复发肿瘤阳性表达率(24.3%)显著低于未复发病例(59.4%),P<0.01。结论:TAp63表达可能成为判断膀胱癌生物学行为的重要指标之一。

TAp63基因在多发性骨髓瘤中的表达及作用

目的:探讨TAp63 mRNA在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及其在MM发病和预后中的可能作用。方法:采用RTPCR检测19例MM患者骨髓及10例非恶性血液病患者骨髓中TAp63 mRNA的表达水平。结果:TAp63 mRNA在MM患者骨髓及非恶性血液病患者骨髓中平均灰度值分别为0.912±0.424、0.315±0.035,两者比较有显著性差异(P<0.001);其中ISS分期Ⅲ期患者的TAp63 mRNA平均灰度值显著高于Ⅰ期及Ⅱ期患者(P=0.000),同时MM患者TAp63 mRNA的表达强度与血清β2MG有显著正相关性(r=0.607,P=0.006)。结论:TAp63基因在MM患者中呈现了高表达状态,参与了MM的发生、发展,并与预后相关。

TAP63γ基因调节Col10a1基因表达及软骨细胞分化成熟

目的拟应用两种软骨细胞模型MCT和ATDC5细胞阐明TAP63γ基因如何调节十型胶原蛋白基因(Col10a1)基因表达及软骨细胞分化、成熟。方法应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TAP63γ基因和Col10a1基因分别在增殖/肥大状态下小鼠MCT细胞和ATDC5细胞中的表达。应用基因转染,在MCT细胞和ATDC5细胞中过表达或抑制TAP63γ基因的表达,以研究其对Col10a1基因表达的调控作用。在细胞诱导培养的第4、7、14、21天,用阿尔新蓝染色、碱性磷酸酶染色和茜素红染色分别对稳定转染TAP63γ表达质粒的目的组和转染空载体pCMV的对照组及未转染的空白组进行染色,统计分析阳性染色面积,从而确定过表达TAP63γ基因在软骨细胞骨化期间给软骨内成骨所带来的影响。结果与增殖型软骨细胞比较,TAP63γ基因与Col10a1基因在MCT和ATDC5两种肥大型软骨细胞的相对表达量都明显升高(P<0.05)。在MCT细胞和ATDC5细胞中抑制TAP63γ基因的表达,结果导致Col10a1基因的相对表达量明显降低,而过表达TAP63γ基因则明显升高Col10a1基因的相对表达量。阿尔新蓝染色在诱导培养的第7天显示出最强的染色强度,但目的组与对照组没有明显差异;在诱导培养的第21天,碱性磷酸酶染色目的组比对照组显示出更强的染色强度,茜素红染色未见差异。结论TAP63γ基因与两种软骨细胞模型MCT和ATDC5细胞中Col10a1基因的表达一致,TAP63γ基因促进软骨细胞的成熟分化。TAP63γ基因可能与多种转录因子一起构成调节Col10a1基因表达的新型机制进而影响骨骼发育与疾病中软骨细胞成熟的进程。

儿童急性白血病骨髓单个核细胞中TAp63基因的表达及意义研究

目的探讨TAp63基因在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及意义。方法收集2015年6月—2016年6月郑州大学第三附属医院和郑州儿童医院住院的初治或复发急性白血病患儿104例为急性白血病组,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)80例[急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)61例,急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)19例],急性非淋巴细胞白血病(ANLL)24例;初发患儿90例(高危型18例,低危型72例),复发患儿14例。选择同期郑州大学第三附属医院和郑州儿童医院住院的非恶性血液病患儿36例作为对照组。利用半定量反转录聚合酶链反应法检测各组患儿TAp63基因表达。结果急性白血病组104例患儿TAp63基因阳性表达86例,阳性表达率为82.7%,TAp63 m RNA相对表达量为(0.61±0.19);对照组患儿TAp63基因阳性表达0例。ALL与ANLL患儿TAp63基因阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);ALL患儿TAp63 m RNA相对表达量较ANLL患儿升高(P<0.05)。初发与复发患儿TAp63基因阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);复发患儿TAp63 m RNA相对表达量较初发患儿升高(P<0.05)。B-ALL患儿TAp63基因阳性表达率、TAp63 m RNA相对表达量较T-ALL患儿升高(P<0.05)。高危型与低危型初发患儿TAp63基因阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);高危型初发患儿TAp63 m RNA相对表达量较低危型初发患儿升高(P<0.05)。完全缓解与未缓解患儿TAp63基因阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);未缓解患儿TAp63 m RNA相对表达量较完全缓解患儿升高(P<0.05)。结论儿童急性白血病的发生、发展可能与TAp63基因的过度表达相关,可作为探讨化疗疗效的观察指标之一;TAp63高表达者易复发,可作为评估预后的指标之一。

左归丸对^(60)Coγ射线损伤大鼠外周血细胞及卵巢组织TAP63和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨^(60)Coγ射线对性成熟期大鼠外周血细胞和性激素水平以及卵巢组织凋亡的影响以及左归丸的干预效应。方法选择10~12周龄雌性SPF级SD大鼠50只,随机分成正常组、辐射组、补佳乐组、左归丸高剂量组和左归丸低剂量组。^(60)Coγ射线一次性照射(6.0 Gy,LD40)24 h后连续给补佳乐[0.09 g/(kg·d)]、左归丸高剂量(0.946 g生药/200 g)和左归丸低剂量(0.189 g生药/200 g),1次/d,治疗21 d,检测不同时间段血细胞变化、EILSA法检测外周血激素[促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E_(2))],光镜下过程卵巢的组织形态变化,用免疫组化检测卵巢组织蛋白TAP63和Bcl-2蛋白表达。结果辐射后大鼠外周血细胞数量减少,尤以白细胞减少最显著,辐射组与对照组比较有显著统计学意义(P<0.01),辐射照组成熟卵泡数量减少,卵巢血管增生,有纤维化,E_(2)[(49.40±12.54)pg/mL]降低,FSH[(1.97(0.78))pg/mL]和LH[(1.65±1.57)pg/mL]水平增加,之后FSH[(0.55±0.49)pg/mL]和LH[(0.704±0.093)pg/mL]逐渐降低(P<0.01);TAP63和Bcl-2蛋白表达明显减(P<0.01),在给予补佳乐和左归丸治疗后逐渐恢复正常,尤以左归丸高剂量组作用显(P<0.01)。结论辐射损伤抑制骨髓造血、促进卵巢颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁,导致卵巢功能快速衰退,左归丸通过刺激骨髓造血,促进卵巢组织TAP63蛋白表达,激活Bcl-2基因抑制颗粒细胞和卵母凋亡,增加颗粒细胞合成雌激素,达到促进卵巢功能修复的作用。

应用组织芯片研究p63及其同系物在肺癌中的表达

目的研究p63蛋白及其同系物TAp63、△Np63在肺癌组织中的表达,并初步探讨其生物学意义。方法选取183例肺癌、30例肺良性病变的石蜡标本,应用组织芯片技术和免疫组织化学方法观察三种蛋白在肺良、恶性病变中的表达情况。结果p63蛋白及其同系物TAp63、△Np63三者在肺鳞状细胞癌、腺癌、细支气管肺泡癌、小细胞癌的表达具有一致性(r>0.75,P<0.01),且在鳞状细胞癌中的表达率均高于其它类型(P<0.01);在鳞状细胞癌中△Np63表达率(74.6%)略高于TAp63(67.2%),但无统计学意义(P>0.05)。三种蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移及临床分期不相关(P>0.05)。p63、TAp63及△Np63在肺癌旁组织或肺良性病变的肺泡上皮细胞和支气管纤毛柱状上皮不表达,而只表达于支气管上皮的基底细胞和支气管腺的肌上皮细胞。结论p63基因在不同类型的肺癌中作用不同,在鳞状细胞癌的发生发展中起着重要的作用。两种同系物TAp63和△Np63在鳞状细胞癌中也呈高表达,其机制有待研究。p63可作为肺鳞状细胞癌与其它类型癌鉴别的重要依据。

ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究

目的用人肿瘤生长抑制因子(mING4)及人白介素24(IL-24)基因构建腺病毒双基因共表达载体(Ad-ING4-IL-24),并设Ad-ING4和Ad-IL-24单基因对照,研究双基因共表达载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用.方法首先将已构建成功的Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4及Ad-IL-24腺病毒感染QBI-293A细胞,经多轮扩增后获得高滴度的病毒子,测病毒效价后分别以100 MOI剂量感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING-4及IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法检测ING-4及IL-24基因表达对MG-63细胞的生长抑制效应;半定量RT-PCR法检测ING4及IL-24基因表达对MG-63细胞中的Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34等相关基因表达的影响.结果获得了高滴度的重组腺病毒Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4,Ad-IL-24和Ad-GFP;治疗后MG-63细胞中ING-4及IL-24双基因表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,ING-4及IL-24基因表达可通过上调细胞中Bax,Caspase3,p21和下调Bcl-2,CD34基因表达诱导细胞凋亡.在病毒子剂量为100 MOI时,Ad-ING4-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑制作用比对Ad-ING4和Ad-IL-24抑制效果更为显著.结论腺病毒介导的ING4或/和IL-24基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,且Ad-ING4-IL-24双基因比Ad-ING4和Ad-IL-24单基因的抑制效果更为显著,该现象可能是通过改变Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34基因表达水平来发挥抗肿瘤作用的.

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63负调控基因nsdAmgh的克隆及序列分析

nsdA(Negative regulator of Streptomyces differentiation)基因是天蓝色链霉菌中发现的与抗生素合成相关的负调控基因。根据天蓝色链霉菌A3(2)的序列设计引物扩增玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63菌株中的该基因,经测序和序列分析表明,由保守序列引物nsdA-2R和nsdA-2L克隆到的Men-myco-93-63菌株中的该基因800 bp片段与已知nsdA基因核苷酸保守区域序列同源性达到99%,由全长序列扩增引物nsdA WZ-R和nsdA WZ-L克隆到的该基因包含一个完整的开放阅读框,共编码369个氨基酸,与变铅青链霉菌和天蓝色链霉菌A3(2)中的nsdA基因的核苷酸序列同源性达到100%,氨基酸序列同源性达到99%。该全长基因命名为nsdAmgh,其在玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中的发现为阻断该负调控基因以期获得抗生素高产工程菌株提供了重要依据。

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株ORF63基因的序列特征及表达与启动子活性分析

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因。从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63。序列分析表明,该基因读码框为1 071 bp,编码356个氨基酸,蛋白质分子质量为41.3 kD;起始密码子ATG上游存在一个早期和晚期启动子基序,编码蛋白序列含有CNX、MutH等多种结构域。启动子活性和转录时相分析表明ORF63是一个早、晚期表达的基因,在病毒感染4 h和18 h时有2个转录峰,24 h以后转录水平略有下降,但总体趋于稳定。构建该基因的原核表达载体pET-28a-ORF63,并转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体,Western blot检测制备的多克隆抗体特异性较好,效价可达1∶3 200以上。由以上结果推测,SpltMNPVⅡ分离株的ORF63基因是一个早期和晚期均有表达的病毒基因,可能与SpltMNPVⅡ感染宿主细胞后自身DNA的复制有关,参与早期芽生病毒(BV)的发生和晚期包涵体衍生病毒(ODV)的成熟2个过程。

奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析

采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF)195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。

抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究

利用农杆菌介导法将抗菌肽Ｓｈｉｖａ Ａ 基因导入杂交水稻恢复系明恢６３ 成熟胚诱导的愈伤组织中，并再生植株。经ＰＣＲ检测分析证明Ｓｈｉｖａ Ａ 基因已整合到再生植株的基因组中。

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdA_(mgh)基因的验证

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤中的一株拮抗菌。该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)等多种重要的植物病原真菌都具有较强的抑制作用。nsdA(negative regulator of Streptomyces differentiation)基因是从天蓝色链霉菌中发现的与抗生素合成相关的负调控基因。根据天蓝色链霉菌A3(2)的序列设计引物,PCR扩增出Men-myco-93-63nsdAmgh基因,经斑点杂交法验证,nsdAmgh确实在该生防菌中存在。该基因的发现有助于进一步了解该生防菌产生抗生素调节的分子机制,也为抗生素高产菌株的获得提供了新的靶标。

人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA组合对成骨肉瘤MG-63细胞增殖与相关基因表达的影响

研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA组合对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制和相关基因表达影响,探索其对肿瘤细胞的生物学效应。以33ìg/ml人参皂甙Rg1、296.32ìg/ml肉桂酸和0.3ìg/ml丹参酮IIA的组合(简称RCT)处理人成骨肉瘤MG-63细胞,以肿瘤细胞分化诱导物HMBA处理MG-63细胞为平行对照,用流式细胞仪、免疫细胞化学检测及光镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的作用。生长曲线及细胞周期检测显示RCT组合可显著抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达72.37%,细胞周期阻滞于G0/G1期;免疫细胞化学检测显示RCT组合处理后MG-63细胞的癌基因c-fos、c-myc表达下调,抑癌基因p27、Rb表达上调。RCT组合对MG-63细胞增殖及相关基因表达的影响与分化诱导物六亚甲基双乙酰胺(HMBA)处理组相似。

TAP、FOXJ1基因多态性与自身免疫性疾病相关性的研究进展

自身免疫性疾病(AD)是指机体对自身抗原发生免疫反应导致自身组织损害所引起的疾病。AD发病机制尚未明确,近年来国内外学者越来越多地将目光投在遗传背景上,欲从分子水平上探讨其病因,特别是TAP、FOXJ1基因多态性与自身免疫性疾病的研究备受关注。

KiSS-1基因转染对骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用

目的探讨KiSS-1基因转染对骨肉瘤MG-63细胞株增殖的影响及其可能机制,为骨肉瘤的基因治疗提供实验室依据。方法将KiSS-1基因转染至骨肉瘤MG-63细胞株,应用免疫组化法检测MG-63-KiSS-1蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测各期细胞比例。结果 MG-63-KiSS-1细胞KiSS-1蛋白高表达、增殖明显减慢、G2/M期细胞比例明显增高。结论 KiSS-1基因转染MG-63细胞后可抑制其增殖,其机制可能与阻滞细胞周期于G2/M期有关。

p63基因亚型的表达对胃癌细胞凋亡的影响

目的检测p63基因亚型表达水平的改变对胃癌细胞凋亡的影响。方法培养MKN28胃癌细胞系,构建TAp63α及ΔNp63α的真核表达载体pEGFP-N1-TAp63α、pEGFP-N1-ΔNp63α后转染MKN28胃癌细胞系,构建TAp63α及ΔNp63α的高表达细胞系。合成TAp63及ΔNp63的siRNA oligo转染入MKN28胃癌细胞系,构建TAp63及ΔNp63的基因沉默细胞系。Annexin V/PI染色方法检测TAp63、ΔNp63高表达或敲除对MKN28胃癌细胞凋亡的影响。结果 TAp63高表达能促进凋亡,在没有凋亡诱导剂存在的条件下,TAp63敲除对MKN28的凋亡无明显影响;ΔNp63敲除显著促进凋亡,在没有凋亡诱导剂存在的条件下,ΔNp63高表达对MKN28细胞的凋亡无明显影响。结论 TAp63促进胃癌细胞的凋亡,而ΔNp63抑制胃癌细胞的凋亡。这提示在胃癌中,TAp63可能行使抑癌基因的功能,而ΔNp63可能行使癌基因的功能。

TAP系统分离纯化MT1-MMP-hTAP融合基因蛋白复合物及表达效应评估

目的 应用TAP系统分离纯化的MT1 MMP hTAP蛋白复合物的表达效应。方法 应用TAP系统分子生物学特性采用IgG和钙调蛋白亲和胶粒二次亲和层析法分离纯化MT1 MMP hTAP蛋白复合物。PAP免疫染色及Westernblot法检测蛋白表达效应。结果 PAP免疫染色显示MT1 MMP hTAP融合基因在鸡成纤维细胞内有效表达 ,融合蛋白染色呈深蓝色 ,Westernblot法检测经TAP系统分离纯化后MT1 MMP hTAP蛋白复合物分子稳定表达在相应 68× 10 3 位置。结论 TAP系统分离纯化MT1 MMP hTAP蛋白复合物及其在动物细胞的构建成功并有效表达为在人类肿瘤细胞建立TAP纯化蛋白质体系和寻找MT1 MMP

TAP基因与妊娠期高血压疾病关系的初步探讨

目的:探讨TAP(transporter associated with antigen processing)基因与妊娠期高血压疾病发病的相关性.方法:选取2002年6月至2005年9月在广州医学院第二附属医院就诊的30例重度子痫前期患者为研究对象,随机选择50例正常孕妇作为对照.所选孕妇均为初孕,无输血史,孕35～40周.各取2 mL外周静脉血抽提DNA,应用PCR-ARMS(扩增阻碍突变系统)方法检测TAP333、637、379、565、665 5个基因位点,分别对TAP基因的基因型、等位基因型、单倍体型进行统计分析.结果:在所有标本中,检出4种TAP1单倍体型及7种TAP2单倍体型,其中TAP2H未能检出.TAP2B(P＜0.01,RR=2.78),TAP2F(P＜0.05,RR=3.61)在妊娠期高血压疾病组中的分布频率显著高于对照组.余单倍体型在两组中的分布无统计学意义.TAP1及TAP2共10种等位基因及各种基因型在正常孕妇组和病例组分布频率的比较均无统计学意义.结论:TAP2B及TAP2F可能为妊娠期高血压疾病的易感基因.