荧光定量PCR检测尿沉渣TB-DNA在泌尿系结核病诊断中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿沉渣结核病-DNA(TB-DNA)在泌尿系结核病(UTB)诊断中的应用。方法回顾性分析南阳市中心医院2021年4月至2022年4月收治的疑似为UTB的61例患者尿液沉渣标本实验室系统检测资料,以上患者就诊期间均已完成FQ-PCR检测法、结核分枝杆菌(MTB)涂片检测与MTB培养法,最终确诊为UTB31例、非UTB30例,比较3种检验方法诊断UTB的效能。结果FQ-PCR检测尿沉渣TB-DNA敏感度、特异度、准确率和阳性率明显高于MTB涂片检测,差异有统计学意义(P<0.05);FQ-PCR检测敏感度、准确率、阳性率明显高于MTB培养法,差异有统计学意义(P<0.05),但特异度与其无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)。结论FQ-PCR检测尿沉渣TB-DNA用于UTB诊断具有较高的敏感度、特异度与准确率,可减少早期UTB诊断漏诊率。

结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。方法选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。结果MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ^(2)=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P=0.705;χ^(2)=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=4.222,P=0.040)。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.362,P=0.037;χ^(2)=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于MTB cfDNA检测(χ^(2)=49.850,P<0.001)。MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景。

T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA检测在肺结核诊断中的比较研究

目的评价T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA 3种方法对肺结核病人的临床应用价值。方法应用T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA 3种检测方法分别对确诊组130例肺结核(TB)患者及60例非结核疾病患者进行检测。结果 T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA在肺结核检测中的敏感性分别为92.31%、26.15%、71.54%,在对照组中其特异性分别为93.33%、100%、97.87%。T-SPOT.TB在"涂阴"肺结核中的阳性率为94.79%,在TB-DNA检测阴性的肺结核中检出率为94.59%。结论 3种方法中,痰涂片敏感性最低,T-SPOT.TB最高,极大地减少了结核的漏检率,可以成为结核病早期诊断的一项有效的辅助检查手段。

联检脑脊液中LAM-IgG和TB-DNA在诊断结核性脑膜炎中的应用

目的 了解脑脊液 (CSF)中阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体 (LAM IgG)和TB DNA指标对结脑的诊断价值。方法 以CSF为标本 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测LAM IgG ,用聚合酶链反应(PCR)检测TB DNA。结果 10 2份结脑病人CSF标本 ,LAM IgG阳性率 5 1.0 % (5 2 10 2 ) ,TB DNA阳性率 81.4 % (83 10 2 ) ,LAM IgG阳性及 或TB DNA阳性共 93例 (91.2 % )。 4 0份非结核性的中枢神经系统疾病病例的CSF标本 ,均未检出LAM IgG和TB DNA .结论 LAM IgG和TB DNA均是诊断结脑的较好的指标 ,两者联检可进一步提高检测敏感性。

TB-RNA、TB-DNA联合检测在痰菌阴性肺结核诊断中的应用价值

目的探讨痰结核菌脱氧核糖核酸(TB-DNA)PCR法和痰结核菌核糖核酸(TB-RNA)恒温扩增法联合检测在痰菌阴性肺结核诊断中的应用价值。方法选取初治痰菌阴性肺结核患者210例分别进行TB-DNA、TB-RNA的单一检测和联合检测,对比其灵敏度、特异度及约登指数等差异。结果 TB-DNA检测灵敏度为81.9%,特异度为79.4%,约登指数为0.613,ROC曲线下面积(AUC)为0.826;TB-RNA检测灵敏度为86.2%,特异度为83.3%,约登指数为0.695,AUC为0.849;联合检测的灵敏度为70.6%,特异度为96.6%,约登指数为0.745,AUC为0.936。结论联合检测灵敏度高,特异性强,同时可判定活动性结核,为痰菌阴性肺结核的早期诊断提供重要的临床依据。

基于光谱成像技术的宫颈癌TBS与细胞DNA定量分析联合筛查方法研究

传统的宫颈癌筛查方法主要有TBS分类筛查法和基于细胞DNA的定量分析筛查法,TBS分类筛查法诊断率高但需要经验丰富的医生参与且敏感度低,难以实现宫颈癌早期筛查;基于细胞DNA的定量分析筛查法仅染色细胞核,实现了定量化与自动化分析,敏感度高但特异性差。因此实现宫颈癌TBS与DNA定量分析联合筛查十分必要,但目前TBS与DNA定量分析联合筛查方法均是使用两张不同的细胞涂片分别进行,费时费力费材极为不便,国内外还没有在一张宫颈细胞涂片上联合使用这两种方法的宫颈癌筛查方法。为此提出了一种在一张细胞涂片上同时使用TBS分类法和细胞DNA定量分析法的宫颈癌筛查方法:在同一张细胞涂片上对细胞进行巴氏染色和Feulgen染色,为解决多重染色带来的DNA物质的吸光度干扰问题,建立一套多光谱成像系统,并提出基于线性多元回归的DNA吸光度剥离模型,通过该模型解算出DNA物质的真实吸光度从而实现DNA物质的定量分析;选取接近RGB波长的3个波段细胞图像合成伪彩色图像进行TBS分类筛查。实现了一张细胞涂片上的宫颈癌TBS与DNA定量分析联合筛查,DNA定量分析模型稳定度高、误差小,诊断率高,用于TBS筛查的伪彩色图像颜色明亮、细胞核清晰可见、细胞质边缘明确,该方法在宫颈癌的诊断和筛查中具有很强的实用性。

涂阳肺结核患者TB-DNA定量、γ干扰素释放试验、结核抗体检测的价值

目的探讨肺结核(TB)-DNA定量、γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)、结核抗体检测对活动性肺结核辅助诊断的价值。方法回顾性分析2013年7月至2014年6月入院确诊为肺结核且抗酸杆菌痰涂片阳性51例患者的TB-DNA定量、TSPOT.TB、结核抗体检测指标。结果 T-SPOT.TB检测阳性率为90.2%,灵敏度最高;其次为TB-DNA定量,阳性率为74.5%;结核抗体检测阳性率仅为37.3%,灵敏度最低。结论 T-SPOT.TB检测不受标本采集的影响,灵敏度高,对活动性肺结核的辅助诊断具有较高价值。

结核分枝杆菌Mtb8.4DNA疫苗构建及免疫保护研究

目的评价构建结核菌DNA疫苗pVS84免疫小鼠体外产生细胞因子的能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法利用基因技术将结核菌Mtb8.4插入pVAXl载体,构建表达结核菌Mtb8.4蛋白(分泌型)的DNA疫苗pVS84。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS84、pVAXl、plL2S和PBS分别各免疫3次,每次均间隔2周,以等剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内注射免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS84免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mlFN-Y平均含量分别为(290.0±112.9)pg/ml和(501.7±79.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS84免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(39176.9±3702.6)、(18780.1±2535.8)和(24410.3±1846.8)CFU/g,分别低于pVAXl、plL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),仅脾结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS84能够刺激机体产生抗结核菌所需的Thl型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG接近。

荧光定量PCR检测TB-DNA在各类检样中的阳性率分析

目的：分析各类检样使用荧光定量PCR法检测TB—DNA的阳性率情况。方法：收集我院2006年7月～2007年4月期间临床疑似或确诊为结核病患者的各类检样192例，使用荧光定量PCR法进行TB—DNA检测。其中136例检样同时进行抗酸染色查找结核分支杆菌。结果：192例检样中检出TB—DNA阳性28例，总阳性率为14．6％。其中脓液、肺泡灌洗液、痰液和胸水中的阳性率最高，分别达到47．4％、25．7％、30．4％、8．7％。抗酸染色阳性率为7．4％、两种方法结果一致率为95％。结论：荧光定量PCR法检测各类检样中的TB—DNA具有特异、敏感、快速、准确、阴、阳性预测值高的优点。优于传统的涂片、培养等方法，应作为结核病病原学诊断的首选项目使用。

吡啶二羧酸根敏化LaF_3:Tb发光纳米粒子的制备及对DNA的测定

采用水热法合成了水溶性良好的吡啶二羧酸根(DPA)敏化LaF3∶Tb(DPA-LaF3∶Tb)纳米粒子,该粒子的发光强度大且光学性能稳定.X射线衍射分析表明,合成了单一相六方晶系的LaF3晶体;透射电子显微镜结果表明,所合成粒子分散性良好,粒径约为15 nm.测得合成粒子在水相中的发光寿命为2.95 ms.以DPA-LaF3∶Tb纳米粒子为发光探针,基于DNA对纳米粒子的发光猝灭,实现了对DNA的定量测定,该方法的线性范围为0.083～13.0μg/mL;检出限为0.02μg/mL;并研究了共存物质对DNA测定的干扰.

TB－DNA、TAA和AA对良恶性腹水的鉴别价值

应用放射免疫法（ＲＩＡ）、聚合酶链反应（ＰＣＲ）法和高效液相色谱法（ＨＰＩＣ）对１０６例良、恶性腹水（良性组３５例、结核组３５例、恶性组３６例）进行了结核菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）、肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）的癌胚抗原（ＣＥＡ）、糖链抗原（ＣＡ１９－９、ＣＡ５０）和１７种氨基酸（ＡＡ）测定分析。结果：①ＴＡＡ三项指标：恶性组显著高于良性组和结核组（Ｐ＜０．０１）。单项ＣＥＡ、ＣＡ１９－９和ＣＡ５０对恶性腹水的敏感性分别为５８％、７０％、６９％，特异性均为１００％，联合三项检测诊断恶性腹水的敏感性为９６％，特异性为１００％；②ＴＢ－ＤＮＡ：对结核性腹水的敏感性、特异性分别为９７．１４％、９５．７５％；③ＡＡ分析：良性组、结核组和恶性组三者腹水均有ＡＡ含量改变但无鉴别意义（Ｐ＞０．０５）。

胸水ADA、TB-DNA联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的探讨结核性胸膜炎患者的胸水腺苷脱氨酶(ADA)、TB-DNA检测、以及ADA、TB-DNA联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法采用临床流行病学诊断试验的方法,检测87例疑为结核性胸膜炎患者胸水ADA、TB-DNA,ADA用酶法连续监测法,TB-DNA采用PCR方法用金标准将患者分为患病组和对照组,计算敏感性、特异性和准确性。结果胸水ADA对结核性胸膜炎的诊断敏感性、特异性和准确性分别为87.7%,90%,85.5%,TB-DNA对结核性胸膜炎的诊断敏感性、特异性、准确性分别为70.2%,83.3%,74.7%,ADA和TB-DNA联合检测的诊断敏感性、特异性和准确性分别为93.0%,93.3%,93.1%。结论采用酶法连续监测法检测胸水ADA可大幅度提高诊断价值,敏感性、特异性都比以往报道有所提高,如果联合TB-ADA检测更加提高了诊断的敏感性,特异性和准确性,并且基本满足临床需要,不必做过多的检测,以减轻病人负担。

胸水ADA、TB-DNA联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的:探讨胸水腺苷脱氨酶(ADA)、TB-DNA检测,以及ADA、TB-DNA联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法:采用临床流行病学诊断试验的方法,检测97例疑为结核性胸膜炎患者胸水中ADA、TB-DNA的含量,ADA用酶法连续监测法,TB-DNA采用PCR方法,用金标准将患者分为患病组和对照组,计算敏感性、特异性和准确性。结果:胸水ADA对结核性胸膜炎的诊断敏感性、特异性和准确性分别为87.7%,90%,88.5%;TB-DNA对结核性胸膜炎的诊断敏感性、特异性、准确性分别为70.2%,83.3%,74.7%;ADA和TB-DNA联合检测的诊断敏感性、特异性和准确性分别为93.0%,93.3%,93.1%。结论:胸水ADA联合TB-DNA检测可提高结核性胸膜炎诊断的敏感性,特异性和准确性,能基本满足临床需要。

荧光监测TB-DNA在呼吸系统疾病中的应用价值研究

目的:探讨肺泡灌洗液与胸腔积液中TB-DNA检查在呼吸系统疾病中的应用价值。方法:选取肺部影像学异常患者113例,分别行肺泡灌洗液TB-DNA及痰找抗酸杆菌监测;再选取胸腔积液患者90例,同时行胸腔积液ADA及胸腔积液TB-DNA监测。结果:肺部影像学异常患者113例中,明确诊断肺结核27例,TB-DNA灵敏度为92.6%,痰找抗酸杆菌灵敏度为63.%,差异有统计学意义(P<0.05);非肺结核患者中无1例TB-DNA增高,特异度达93.0%。胸腔积液患者90例中,结核性胸膜炎29例,胸腔积液ADA增高5例,仅1例胸腔积液TB-DNA增高。结论:分析荧光定量PCR检测TB-DNA是临床病原菌检测的一种具有高灵敏度、高准确性、高特异度、定量范围宽、操作简单、快速安全、污染最少的可靠的DNA体外扩增技术,对临床辅助诊断肺结核具有较高的实用价值。

T-SPOT.TB,TB-Ab和TB-DNA在肺结核与非结核分枝杆菌肺病鉴别诊断中的价值研究

目的探讨结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB),结核抗体(TB-Ab)和结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TB-DNA)在肺结核与非结核分枝杆菌肺病鉴别诊断中的价值。方法回顾南京市胸科医院2013年3月~2017年4月收治的肺结核病人140例,非结核分枝杆菌肺病患者39例。两组患者均抽血做T-SPOT.TB,TB-Ab(胶体金法和蛋白芯片法)检测,培养阳性的标本同时做TB-DNA检测。统计四种方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、假阳性率、假阴性率、阴性似然比、阳性似然比、诊断符合率和约登指数。结果 T-SPOT.TB敏感度、诊断符合率显著高于TBAb和TB-DNA(χ~2=6.91~87.46,P<0.01)。T-SPOT.TB特异度显著高于TB-Ab(χ~2=13.18~24.98,P<0.01),而与TB-DNA差异无统计学意义(Fisher’s Exact Test,P=0.62>0.05)。结论 T-SPOT.TB检测在肺结核与非结核分枝杆菌肺病鉴别诊断中有很高的敏感度、特异度和诊断符合率,对两种疾病的鉴别诊断有很大价值。

荧光分光光度法研究DNA与稀土离子Tb^(3+)的作用机理

研究了脱氧核糖核酸(DNA)与Tb3+的相互作用,发现DNA能增敏Tb3+的特征荧光,且热变性DNA对Tb3+的荧光增敏作用比DNA强几十倍.基于上述实验现象,探讨了四种核苷酸d-AMP,d-CMP,d-GMP,d-TTP及四种核苷dA、dC、dG、dT与Tb3+相互作用的荧光光谱,发现DNA对Tb3+的荧光增敏除与鸟嘌呤碱基有关外,还有可能与磷酸基有关.进一步选择了含有不同数目磷酸基的核苷酸GMP、GDP、GTP及dG研究磷酸基的作用,实验结果表明不含磷酸基的dG不增敏Tb3+的荧光,而分别含有1、2、3个磷酸基的GMP、GDP、GTP三种核苷酸对Tb3+的荧光增敏程度依次为GTP>GDP>GMP,认为DNA对Tb3+的荧光增敏是鸟嘌呤碱基和磷酸基共同作用的结果.

胸水ADA、TB-DNA联合检测在结核性胸膜炎中的诊断运用

目的分析胸水ADA、TB-DNA联合检测对结核性胸膜炎诊断运用价值。方法对我院收治的结核性胸膜炎患者183例、癌性胸水患者65例以及炎性胸水患者49例作为研究对象,分别进行ADA、TB-DNA的检测,并对ADA、TB-DNA在三种疾病中的阳性率以及对结核性胸膜炎的敏感度、特异性以及准确性进行分析。结果结核性胸膜炎患者的ADA含量(72.3±23.2 IU/L)明显高于炎性胸水患者(38.4±12.9 IU/L)以及癌性胸水患者(24.3±6.5 IU/L);ADA、TB-DNA联合检测对结核性胸膜炎的特异性84.2%,敏感性98.91%以及准确性为93.26%。结论对结核性胸膜炎患者采用胸水ADA、TB-DNA联合检测可明显提高其检出率,并有助于对结核性胸膜炎胸水、癌性胸水以及炎性胸水的鉴别。

痰TB-DNA、分枝杆菌核酸、涂片找抗酸杆菌及血T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断价值研究

目的通过研究统计痰TB-DNA、痰分枝杆菌核酸、痰涂片找抗酸杆菌、血清T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断敏感度、特异度、诊断预测值、诊断准确率,进一步探讨不同临床检测方法对肺结核的诊断价值,指导肺结核患者的临床诊治。方法通过回顾性分析我院2017年1月-2019年12月呼吸内科、感染性疾病科诊断为活动性肺结核的患者,以痰结核菌培养结果为对照标准,分别统计出痰TB-DNA、痰分枝杆菌核酸、痰涂片找抗酸杆菌、血T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确率,探讨我院临床上四种实验室方法对诊断肺结核的临床价值。结果通过上述方法统计出痰TB-DNA、痰分枝杆菌核酸、痰涂片找抗酸杆菌、血T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断敏感度分别是84.7%、88.1%、74.7%、96.0%,特异度分别是65.3%、69.2%、86.5%、17.8%,阳性预测值分别是83.0%、85.%、92.0%、70.7%,阴性预测值分别是68.1%、73.5%、62.1%、68.4%,诊断准确率分别是78.2%、82.0%、78.5%、70.5%。结论跟传统方法痰结核菌培养、痰涂片找抗酸杆菌比较,TB-DNA、分枝杆菌核酸、TB-SPOT.TB试验在时效、灵敏度方面更具优势,能敏感检测出人体是否感染肺结核,对患者的早期诊断及指导治疗具有重要意义。

脑脊液TB-DNA联合血清LAM抗体对结核性脑膜炎诊断的临床价值分析

目的分析脑脊液中结核杆菌(tubercle bacillus,TB)DNA(TB-DNA)和血清分枝杆菌阿拉伯糖甘露糖脂(lipoarabinomannan,LAM)IgG抗体(LAM-IgG)联合检测在结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)诊断中的价值,为TBM的早期诊断提供参考。方法选取2011年1月至2016年8月在河北省胸科医院住院的TBM患者49例纳入TBM组,非TBM颅内感染患者52例纳入非TBM组,正常体检者60例纳入正常对照组。采用酶联免疫吸附测定检测LAM-IgG水平,采用聚合酶链反应检测三组研究对象TB-DNA水平,并进行对比分析。结果 TBM组患者脑脊液细胞学检查全部呈混合细胞反应。非TBM组患者中呈中性粒细胞为主的混合细胞反应28例,呈淋巴样细胞反应24例,正常对照组60例脑脊液细胞学检查均正常,三组比较差异具有显著性(P<0.05)。与正常对照组相比,TBM组和非TBM组患者脑脊液中蛋白质均增加、糖和氯化物均减少(P<0.05);与非TBM组相比,TBM组患者脑脊液中糖和氯化物均减少(P<0.05)。TBM组患者TB-DNA阳性44例,非TBM组患者TB-DNA阳性4例,脑脊液TB-DNA检测特异度为96.43%,灵敏度为89.80%。TBM组患者LAM-IgG阳性27例,非TBM组患者无阳性,血清LAM-IgG检测特异度为100.00%,灵敏度为55.10%;联合检测(并联)特异度为97.30%,灵敏度为92.00%。结论脑脊液TB-DNA和血LAM-IgG的检测有助于TBM的早期诊断,且二者联合能够进一步提高检测灵敏度。