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猪圆环病毒3型TB GreenⅡ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用
1
作者
李鹏
孙延举
+6 位作者
王寅彪
金前跃
梁晓晓
银梅
王选年
刘兴友
王利平
《河南农业科学》
北大核心
2023年第3期135-142,共8页
为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏...
为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证。结果显示,建立的TB GreenⅡqPCR检测方法特异性良好,在4.74×10^(2)~4.74×10^(7)拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R^(2)=0.999)。建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33%~0.62%,组间变异系数为0.40%~0.73%。对收集的132份临床样品进行检测,PCV3 TB GreenⅡqPCR方法检出率为9.10%(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55%,6/132)。综上,建立的PCV3 TB GreenⅡqPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等。
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关键词
猪圆环病毒3型
tb
green
ⅱ
实时荧光定量PCR
常规PCR
病毒检测
下载PDF
职称材料
基于牛呼吸道合胞体病毒F基因TB GreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:
2
2
作者
郭兵
王海凤
+3 位作者
李妍
张玥
陈彪
秦建华
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期648-653,共6页
为了对牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)进行准确定量检测,针对BRSV F基因设计特异性引物,构建pMD19T-BRSV-gF重组质粒,以其为模板优化反应条件及反应体系,建立TB GreenⅡ荧光定量PCR方法并应用于临床BRSV...
为了对牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)进行准确定量检测,针对BRSV F基因设计特异性引物,构建pMD19T-BRSV-gF重组质粒,以其为模板优化反应条件及反应体系,建立TB GreenⅡ荧光定量PCR方法并应用于临床BRSV检测。结果显示,针对BRSV F基因建立的TB GreenⅡ荧光定量PCR方法标准曲线线性关系良好,相关系数为0.9952;灵敏度高,BRSV最低检测限达3.9×10^(1) copies/μL;特异性良好,可特异性检测出BRSV,对牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒的扩增呈阴性;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数均小于2%。对50份临床样品进行检测,荧光定量PCR对BRSV的阳性检出率(26%)明显优于常规PCR方法(14%)。结果表明针对BRSV F基因建立的TB GreenⅡ荧光定量PCR检测方法适合BRSV的临床检测。
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关键词
牛呼吸道合胞体病毒
F基因
荧光定量PCR
tb
green
ⅱ
荧光染料
原文传递
题名
猪圆环病毒3型TB GreenⅡ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用
1
作者
李鹏
孙延举
王寅彪
金前跃
梁晓晓
银梅
王选年
刘兴友
王利平
机构
新乡学院生命科学与基础医学学院
河南科技学院动物科技学院
新乡医学院公共卫生学院
河南省农业科学院动物免疫学重点实验室
河南农业大学动物科技学院
出处
《河南农业科学》
北大核心
2023年第3期135-142,共8页
基金
河南省科技攻关计划项目(202102110094)
新乡市科技攻关计划项目(GG2019018)。
文摘
为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证。结果显示,建立的TB GreenⅡqPCR检测方法特异性良好,在4.74×10^(2)~4.74×10^(7)拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R^(2)=0.999)。建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33%~0.62%,组间变异系数为0.40%~0.73%。对收集的132份临床样品进行检测,PCV3 TB GreenⅡqPCR方法检出率为9.10%(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55%,6/132)。综上,建立的PCV3 TB GreenⅡqPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等。
关键词
猪圆环病毒3型
tb
green
ⅱ
实时荧光定量PCR
常规PCR
病毒检测
Keywords
Porcine circovirus 3
tb greenⅱ
Real⁃time quantitative PCR
Conventional PCR
Virus detection
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
基于牛呼吸道合胞体病毒F基因TB GreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:
2
2
作者
郭兵
王海凤
李妍
张玥
陈彪
秦建华
机构
河北农业大学动物医学院农业农村部奶牛健康养殖重点实验室(部省共建)
河北北方学院动物科技学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期648-653,共6页
基金
河北省现代农业产业技术体系奶牛创新团队建设项目奶牛疫病防控基金资助项目(HBCT2018120205)。
文摘
为了对牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)进行准确定量检测,针对BRSV F基因设计特异性引物,构建pMD19T-BRSV-gF重组质粒,以其为模板优化反应条件及反应体系,建立TB GreenⅡ荧光定量PCR方法并应用于临床BRSV检测。结果显示,针对BRSV F基因建立的TB GreenⅡ荧光定量PCR方法标准曲线线性关系良好,相关系数为0.9952;灵敏度高,BRSV最低检测限达3.9×10^(1) copies/μL;特异性良好,可特异性检测出BRSV,对牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒的扩增呈阴性;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数均小于2%。对50份临床样品进行检测,荧光定量PCR对BRSV的阳性检出率(26%)明显优于常规PCR方法(14%)。结果表明针对BRSV F基因建立的TB GreenⅡ荧光定量PCR检测方法适合BRSV的临床检测。
关键词
牛呼吸道合胞体病毒
F基因
荧光定量PCR
tb
green
ⅱ
荧光染料
Keywords
bovine respiratory syncytial virus
F gene
real-time fluorescence quantitative PCR
tb greenⅱ
fluorescent dye
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒3型TB GreenⅡ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用
李鹏
孙延举
王寅彪
金前跃
梁晓晓
银梅
王选年
刘兴友
王利平
《河南农业科学》
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
基于牛呼吸道合胞体病毒F基因TB GreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立
郭兵
王海凤
李妍
张玥
陈彪
秦建华
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
原文传递
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