人类单纯性先天性心脏病中TBX5基因的突变及表达研究

应用PCR DGGE方法在61个单纯性先天性心脏病核心家系共216位成员中检测TBX5基因8个外显子的突变情况;以β actin作为内对照对单纯性先天性心脏病患者(房间隔缺损12例、室间隔缺损16例、法洛四联症6例)和3个非先天性心脏病患者(正常对照)心肌标本进行RT PCR扩增和定量分析,观察TBX5基因在mRNA水平有无差异。研究了人类单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因突变及表达情况。在所有被检成员中,未发现突变;与非先天性心脏病患者(正常对照)相比,单纯性先天性心脏病患者TBX5基因mRNA表达呈下降趋势。通过本研究认为TBX5基因编码区突变不是人类单纯性先天性心脏病的致病原因,但其转录水平的异常可能是单纯性先天性心脏病的一种潜在致病机制。

法乐四联症患儿NKX2.5、TBX5、GATA4基因的表达研究

目的:探讨NKX2.5、TBX5、GATA4基因与法乐四联症的发病关系及法乐四联症形成的分子机制。方法:10例法乐四联症患儿(法乐四联症组),为我院2005-06至2005-12心脏中心住院患儿。年龄4个月～8岁,平均3.5岁。6例非先天性心脏病(先心病)意外死亡患儿作为对照(对照组),均没有先心病病史和遗传病家族史。年龄4个月～9岁,平均年龄3.8岁。留取各病例右心室流出道心肌组织,提取心肌组织总RNA,逆转录为与RNA链互补的单链DNA(cDNA)。按照引物设计原则进行引物设计,用来扩增心肌组织NKX2.5、TBX5、GATA4、GAPDH mRNA目的片段。引物长度18bp～22bp,扩增片段长度163bp、206bp、237bp、203bp。应用双标准曲线、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法比较NKX2.5、TBX5、GATA4基因的mRNA含量在对照组和法乐四联症组之间的统计学差异。结果:法乐四联症组的NKX2.5mRNA含量较对照组显著降低,差异有统计学意义。TBX5mRNA和GATA4mRNA含量在法乐四联症组与对照组的差异无统计学意义。结论:人心肌组织中有心脏发育相关基因NKX2.5、TBX5和GATA4mRNA的表达;法乐四联症可能与心肌组织中NKX2.5mRNA含量降低相关。

心脏形成关键基因-TBX5在大鼠胚胎心脏中的克隆及表达研究(英文)

为了研究心脏形成关键基因-TBX5的表达情况,选择Wistar大鼠作为从分子水平研究心脏发育的实验动物并从胎鼠心脏中克隆了TBX5 cDNA全长(GenBank登录号:AY859491),其cDNA及氨基酸序列不同于GenBank预测序列;随后应用RT-PCR及Northern blot分析TBX5基因在大鼠各组织中的表达情况,发现TBX5为单一转录本,在大鼠各组织均有表达,心脏中表达最强;构建荧光表达载体,转染大鼠肝癌细胞,观察TBX5亚细胞定位,结果证实TBX5基因在细胞核中表达;最后构建原核表达载体,IPTG诱导表达获得了GST-TBX5融合蛋白。以上工作为进一步鉴定心脏发育中TBX5相关转录因子及研究相互间的调控机制奠定了基础。

先天性房间隔缺损相关TBX5基因新突变研究

目的:研究先天性房间隔缺损(ASD)相关TBX5基因新突变。方法:从中国汉族人群入选62例ASD患者和108名健康对照者,提取基因组DNA。对全部研究对象的TBX5基因的整个编码区进行测序分析以发现新的致病突变。构建野生型及突变型TBX5的真核表达载体,利用脂质体转染COS-7细胞,同时转染报告质粒心房利钠因子-荧光素酶及内对照质粒,应用双荧光素酶报告基因分析试剂研究突变型TBX5的转录活性。结果:在1例散发型ASD患者中发现了1个杂合性TBX5基因新突变,即c.318C>G(p.Y106X)突变。该无义突变不存在于108名健康对照者。功能分析表明突变型TBX5对靶基因的转录激活功能丧失。结论:发现1个ASD相关TBX5基因功能缺失性新突变,对ASD的个体化防治具有潜在的临床意义。

TBX5基因靶序列单核苷酸多态性与先天性心脏病的关系

目的探讨TBX5基因3'非翻译区靶序列SNPs与先天性心脏病(CHD)遗传易感性的关系,为CHD的分子机制研究提供线索。方法利用HaploView软件筛选TBX5基因3'非翻译区功能性单核苷酸多态性(SNP),并应用高分辨率熔解曲线检测TBX5基因3'非翻译区SNP。采用病例对照研究分析SNP位点与CHD的关联。结果HaploView软件筛选出TBX5基因3'非翻译区有意义的标签SNP rs883079,高分辨率熔解曲线法成功检测该SNP位点(rs883079)的G/G、G/A及A/A 3种基因型。TBX5基因rs883079(G>A)位点等位基因或基因型分布频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);与CHD易感性关联,A是CHD的危险等位基因,A/A为CHD的危险基因型(P<0.05)。结论TBX5基因rs883079位点SNP与CHD有关系,rs883079(G>A)携带突变纯合子基因型A/A个体患CHD的危险性升高。

房颤相关TBX5基因单核苷酸多态性临床意义

目的了解房颤与TBX5基因单核苷酸多态性(SNP)的关联性。方法选取房颤患者92例及无房颤患者(对照组)93例,提取外周血基因组DNA,行TBX5基因rs3825214位点的SNP检测。结果 TBX5基因rs3825214位点呈多态性表现(AA、AG和GG型),房颤组和对照组基因型分布差异有统计学意义(P<0.05);房颤组等位基因以G为主,对照组等位基因以A为主(P<0.05);TBX5基因SNP对房颤发生有影响(P<0.05)。结论房颤与TBX5基因rs3825214位点多态性相关,GG基因型人群房颤发生率可能增高,G等位基因或为房颤易感基因。

家族性Holt-Oram综合征1例并文献复习

目的探讨Holt-0ram综合征的临床特点及诊疗预后。方法对有上肢骨骼畸形的患儿,行超声心动图及影像学检查,并对其父母及患儿进行了全外显子组测序全基因。结果患儿存在先天性心脏病,并检测到先证者12q24.21区域存在约0.6 Kb的片段杂合缺失,遗传自母亲,结合其临床特点,诊断为Holt-Oram综合征。结论对存在上肢骨骼畸形患儿,需要注意Holt-Oram综合征,注意其存在心脏疾患可能,以帮助其早期诊断治疗及遗传咨询。

心手综合征合并右心室双出口并文献复习

目的分析心手综合征（HOS）合并右心室双出口的临床和遗传学特点，并复习相关文献资料。方法回顾性分析1例合并有心室双卅口的HOS患者的临床、影像学资料，结合文献（5例患者）复习该病的临床特点、遗传学进展和诊疗方法。结果患者为男性，43岁，以生后即发现心脏杂音，伴劳力性呼吸困难5年余为主诉于2015年8月17日就诊，X线检查显示双上肢骨骼畸形，超声心动图显爪有心室双出口．主动脉瓣下室间隔缺损，肺动脉高压，心功能不全，心电图显示窦性心动过缓，Ⅰ度房室传导阻滞。经药物利尿、强心治疗，随访至2016年6月，心功能未进一步恶化。结论HOS多合并心脏畸形，但合并什心室双出口者极为罕见。临床检查结合TBX5基因检测可以确诊本病，及时治疗能够改善预后。

NKX2.5基因和TBX5基因在先天性心脏病试管婴儿中的突变检测

目的探讨患先天性心脏病的试管婴儿与自然受孕儿间是否存在NKX2.5基因和TBX5基因突变差异。方法应用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对68例试管婴儿先天性心脏病患儿和98例自然受孕先天性心脏病患儿的NKX2.5基因编码区1、2和TBX5基因编码区4、5、8进行突变检测。结果在患先天性心脏病的试管婴儿与自然受孕儿中,均发现NKX2.5基因编码区1中第63位碱基发生突变(c.63A>G),该位点基因型及等位基因频率的分布在两组间差异无统计学意义。NKX2.5基因编码区2和TBX5基因编码区4、5、8未检测到突变。结论先天性心脏病的试管婴儿与自然受孕儿间NKX2.5基因和TBX5基因突变无差异,推测辅助生殖技术并未引起NKX2.5基因和TBX5基因突变。

TBX5基因多态性、环境暴露指数与口腔癌发病风险的关联研究

目的研究TBX5基因多态性、环境暴露指数与口腔癌发病的关联。方法采用病例对照研究方法,以2010年9月—2016年12月期间福建医科大学附属第一医院口腔颌面外科住院的新发口腔癌患者为病例组,共纳入300例;同期选取前往该医院其他科室就诊的非肿瘤患者作为对照组,共纳入445例。问卷调查人口学特征,采集外周静脉血5 ml,检测TBX5基因rs10492336位点的单核苷酸多态性(SNPs)。以口腔癌为因变量,根据环境暴露指数得分,分为低危组(0~2.31分)和高危组(2.32~11.76分)。分析TBX5基因rs10492336位点SNPs、环境暴露指数与口腔癌的关联,并探讨两者之间的交互作用。结果病例组和对照组对象的年龄分别为(56.19±13.10)、(54.56±12.48)岁。与携带CC基因型相比,携带共显性遗传模型AC基因型、显性遗传模型AC+AA基因型口腔癌发病OR(95%CI)值分别为0.69(0.49~0.98)、0.70(0.51~0.97);与低危组相比,高危组的口腔癌发病风险OR(95%CI)值为3.72(2.55~5.43)。基因-环境交互作用分析结果显示,与携带CC基因型且环境暴露指数为高危组相比,携带AC+AA基因型且环境暴露指数为低危组的口腔癌发病风险OR(95%CI)值为0.18(0.10~0.31),rs10492336位点SNPs与环境暴露指数间存在相乘交互作用(β=-0.405,P<0.001)。结论TBX5基因rs10492336位点SNPs及环境暴露指数与口腔癌发病有关,且rs10492336位点SNPs与环境暴露指数存在相乘交互作用。

TBX5基因多态性与单纯性先天性心脏病易感性的关联分析

目的探讨TBX5基因上的rs1895585,rs78441425和rs55646156单核苷酸多态性位点与单纯性先天性心脏病易感性的相关性。方法收集112例单纯性先天性心脏病患者及112例正常患者的外周血标本,提取基因组DNA,在Hap Map数据库中选出TBX5基因的标签SNP,运用Illumina Bead Xpress Reader对TBX5基因的标签SNP进行基因分型。结果将病例组与对照组进行关联分析发现,TBX5基因上的rs1895585,rs78441425和rs55646156三个位点在两者之间存在显著性差异。结论本研究发现TBX5基因上的rs1895585,rs78441425和rs55646156三个位点可能与单纯性先天性心脏病发病风险之间存在相关性。

Tbx5基因在牙鲆变态初期的表达

鲽形目鱼类仔鱼经过变态后形成眼睛和偶鳍等器官左右不对称的稚鱼。Tbx家族成员参与脊椎动物心脏、肢体和眼等器官的发育,而Tbx基因与鲽形目鱼类变态的关系目前尚无报道。运用扫描电镜和软硬骨染色等方法对出膜后2 d(变态早期)和26 d(变态前期)的牙鲆仔鱼的形态进行观察,牙鲆出膜后2 d胸鳍原基出现,出膜后26 d胸鳍发育成熟,而在出膜后26 d胸鳍和腹鳍仍左右对称。我们克隆了牙鲆Tbx5基因的CDS序列,该序列编码的多肽具有部分T-box保守结构域,与斑马鱼Tbx5同源性高达93%。系统进化分析显示:这段CDS序列与硬骨鱼的Tbx5基因聚为一支,但与四足动物Tbx5相分离。整体原位杂交显示出膜后26 d的牙鲆仔鱼中,Tbx5基因不仅在胸鳍、眼背侧、脊柱和尿囊表达,且在胸鳍和眼背侧的表达呈现左右不对称,左侧面(有眼侧)的表达量均高于右侧面(无眼侧)的表达量。综上结果显示,牙鲆Tbx5基因可能参与了变态过程中眼睛与胸鳍左右不对称的形成。