TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的对TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中的微量蛋白进行测量的效果进行分析。方法采用随机抽样的方法,抽取2007年9月～2010年9月就诊的进行尿液标本检测的患者90例,再将其随机分为A、B、C3组,平均每组30例。A组采用丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定;B组患者采用CAN/TFA沉淀法对微量蛋白进行测定;C组患者采用TCA/丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定。对三组的测量结果进行比较分析。结果分析结果表明,C组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显高于其他两组患者,差异有显著的统计学意义(P<0.01);A组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显低于其他两组患者,有显著的统计学意义(P<0.01)。结论采用TCA/丙酮沉淀法对尿液微量蛋白含量进行测量的效果比较理想,具有操作简单、高效等特点,可以作为临床对患者进行尿液微量蛋白测量的首选方法,值得进一步推广。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的 :探讨TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白的效果影响。方法:分别选用丙酮沉淀法和TCA/丙酮沉淀法对尿液标本进行处理,并对两种方法双向电泳结果进行比较分析。结果 :TCA/丙酮沉淀后的尿液标本蛋白点数高于单纯丙酮沉淀,且单纯丙酮沉淀处理的标本清晰度及分辨率均低于TCA/丙酮沉淀处理标本。讨论:在丙酮沉淀前应用TCA可以消除干扰等电聚焦的盐类物质,进一步降低标本的导电能力,提高蛋白提取率。

小麦幼穗蛋白质双向电泳条件的优化

本研究以温光敏小麦为试材,用TCA/丙酮和酚提取法提取小麦幼穗蛋白样品,进行了双向电泳优化分析,并对双向电泳过程中出现的问题进行了讨论。结果表明,用TCA/丙酮法提取小麦幼穗蛋白质其产率(浓度)高于酚提取法。SDS-PAGE电泳显示,用TCA/丙酮提取法提取的蛋白质能获得较清晰条带,分辨率较高,而酚提取法提取的蛋白质其条带模糊,分辨率低。对蛋白质纯化除盐可以提高分辨率,减少横竖纹,获得背景清晰的圆形蛋白点。通过ImageMasterTM 2D Platinum5.0软件分析凝胶图谱,结果显示纯化后可降低噪点,纯化后蛋白点数可从未纯化蛋白点数的216增加到583。显然,采用TCA/丙酮法可获得高浓度高质量的蛋白质,而进一步纯化、除盐离子可进一步获得背景清晰可高重复性的电泳图谱。在双向电泳实验过程中,观察到一些异常缺陷胶的出现,如双向电泳图谱中蛋白点扩散,蛋白聚集形成斑点串,没有点或点很少,出现纵纹横纹及图谱扭曲等影响图谱质量的严重问题,本研究对这些问题做了分析并提出了解决方案。

双向电泳比较两种方法获得的水稻叶片蛋白

水稻是研究单子叶植物遗传和分子生物学的模式植物,是研究植物基因组学和蛋白质组学的一个重要的生物材料。双向电泳作为蛋白质组学中蛋白分离的主要方法,其关键步骤在于蛋白质的提取。为了比较不同蛋白提取方法,采用TCA/丙酮沉淀法和Mg/NP-40提取法分别提取水稻叶片总蛋白,用双向凝胶电泳分离两种方法获得的蛋白。结果表明,在双向图谱中,Mg/NP-40提取法分离的蛋白点数较多,RuBisCO大亚基的含量较低,适于分离等电点在5～7范围内、分子量在14～20kD和高于67kD的水稻叶片蛋白质;TCA/丙酮沉淀法分离的蛋白点数较少,适于分离等电点在4～5范围内、分子量在31～67kD内的水稻叶片蛋白质。

2型猪链球菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

为改进适用于2型猪链球菌分泌组双向电泳样品的制备方法,本研究将无蛋白细菌培养液培养2型猪链球菌,分别以超滤-冻干法、超滤-冻干-丙酮沉淀法和改良超滤-冻干-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法富集培养物上清中的细菌分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高。因此,改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的2型猪链球菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。

橡胶树胶乳C-乳清双向电泳样品制备技术的建立及优化

在TCA/丙酮沉淀法的基础上,用乙醇和乙醚洗涤(称双乙法)沉淀获得橡胶树胶乳C-乳清蛋白样品,并在样品溶解时通过超声助溶进一步提高样品的溶解度。结果显示,利用改良后的样品制备方法(TCA/丙酮+双乙法+超声处理)所获得的C-乳清蛋白样品的溶解性大幅增加,蛋白得率高达8.47 mg/mL C-乳清,为传统TCA/丙酮法的1.6倍;同时降低了盐离子浓度,等电聚焦时升压顺利、聚焦完全,双向电泳的图谱质量明显改善,在银染2D胶上可获得1 206个蛋白点,为传统TCA/丙酮法的2.7倍。本文对胶乳C-乳清蛋白样品制备方法进行深入优化,获得了重现性较好的高质量双向电泳蛋白图谱,促进了橡胶树蛋白质组学研究。

银杏小孢子叶球蛋白提取和双向电泳体系优化(Ⅱ)

以银杏小孢子叶球为材料,比较了不同的提取的方法、蛋白质裂解液组成、pH值范围以及不同质量浓度SDS-PAGE凝胶对双向电泳的影响。结果表明:TCA/丙酮/酚法比TCA/丙酮法更适合于银杏小孢子叶球蛋白的提取;含有硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出748个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白点数多620个。采用pH3-10的胶条分离时,蛋白点集中在pH=4～8,使用pH=4～7的胶条,图谱胶点重叠少,也较清晰,更利于低丰度蛋白的检出。用TCA/丙酮/酚提取蛋白,并以蛋白质裂解液Ⅱ溶解蛋白,采用pH=4～7线性17 cm的IPG胶条1,2%SDS-PAGE凝胶进行双向凝胶电泳,银杏小孢子叶球蛋白质能得到较好的分离,图谱清晰。

温莪术蛋白双向电泳技术的建立

目的:建立温莪术的双向电泳技术(2-DE)体系。方法:采用TCA/丙酮沉降法提取蛋白,并用超速离心去除杂质。采用固相pH胶条在IPGphor TM Ⅲ等电聚焦系统上进行等电聚焦,采用Bio-Rad电泳仪进行SDS-PAGE电泳,以银染法染色。结果:得到了上百个点的双向电泳图谱。结论:本研究成功建立了温莪术蛋白双向电泳技术体系。

植物蛋白质双向电泳样品制备研究进展

蛋白质双向电泳是蛋白质组学的支撑技术,在微生物和动物蛋白质分析上取得较大进展,但在植物蛋白质分析上却进展不大,究其原因在于难以制备到适于双向电泳的植物蛋白质样品。笔者综述了植物蛋白质双向电泳样品制备的方法,分析各种方法的优缺点,并提出今后植物蛋白质样品制备的研究重点。

适用于双向电泳分析的链格孢菌体蛋白提取方法的筛选

为筛选出一套适用于双向电泳分析的链格孢菌蛋白的提取方法,以该菌为研究材料,首先采用TCA-丙酮法、磷酸-TCA-丙酮法、SDS提取法和TCA/丙酮-SDS/酚抽提法分别提取菌丝蛋白质,然后进行蛋白质浓度的测定和单向SDS-PAGE试验,并建立双向电泳体系。结果表明:TCA/丙酮-SDS/酚抽提法所获得的蛋白质浓度为15.9 mg/mL,分别是其他三种方法所得蛋白浓度的2.64、4.61和1.43倍;SDS-PAGE图谱中形成的条带数目最多、丰度最好;所获得的2-DE图谱背景清晰干净,无明显的横纵条纹,分辨率高,可辨别的蛋白质点数为1 138个,是TCA-丙酮法所分离蛋白点数的1.89倍。由此可知,TCA/丙酮-SDS/酚抽提法为链格孢菌蛋白提取的最优方法,该方法所提取的蛋白质适用于双向电泳分析及后续的蛋白质组学研究。

标本处理方法对尿液蛋白电泳的影响

目的探讨不同蛋白沉淀方法对尿液标本蛋白电泳效果的影响。方法采集尿液标本8份,分别采用丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法及ACN/TFA沉淀法对尿液标本进行蛋白沉淀,然后进行双向电泳,比较3种标本处理方法后蛋白电泳蛋白点数及图像清晰程度。结果 TCA/丙酮沉淀后电泳图谱清晰,丙酮沉淀法及ACN/TFA沉淀后单边电泳图谱具有较多横纹干扰条带,尿液标本TCA/丙酮沉淀后电泳蛋白点数高于丙酮沉淀法及ACN/TFA沉淀法,差异具有统计学意义。结论在丙酮沉淀前应用TCA可以消除干扰等电聚焦的盐类物质,进一步降低标本的导电能力,并且能够最大程度地提取尿液中的蛋白质。

大麻蛋白质组的双向电泳技术建立

蛋白组学研究中最关键步骤是样品制备,为得到高质量的双向电泳蛋白图谱,作者通过对TCA/丙酮法对大麻茎、叶进行蛋白样品制备、双向电泳技术流程进行优化,建立了适于大麻茎、叶的双向电泳技术体系.优化双向电泳体系为：裂解液在传统配方中加入Tris-HCl（p H=8.8）,以Triton X-100代替CHAPS,蛋白裂解后加入4倍体积100%预冷丙酮等均可有效去除各种非蛋白杂质;IPG胶条p H=4~7,24 cm,考染上样量800μg/胶条可得到背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱.大麻茎中可分辨的蛋白点为1 027±12,叶中为905±8.该体系能同时适用于大麻茎、叶,并能满足下一步蛋白质谱测序分析的要求,可为大麻蛋白组学的发展提供技术支持.

蓖麻种子蛋白质双向电泳优化体系的建立

为建立蓖麻种子蛋白质双向电泳优化体系,本研究以‘2129’品系蓖麻种子为试验材料,采用2-DE技术的方法,对其进行研究。结果表明:酚提取法比TCA/丙酮沉淀法更适宜提取蓖麻种子的总蛋白质;24 cm pH 3-10NL的干胶条比pH 4~7的干胶条更适宜应用在蓖麻种子的2-DE电泳中;对蛋白质样品进行除杂比不除杂得到的蛋白质图谱更加清晰,且横条纹和纵条纹都有所减少;蛋白质上样量为800μg时获得的蛋白质图谱最佳。本研究将为蓖麻种子蛋白质组学的研究提供基础数据和技术支持。