TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的对TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中的微量蛋白进行测量的效果进行分析。方法采用随机抽样的方法,抽取2007年9月～2010年9月就诊的进行尿液标本检测的患者90例,再将其随机分为A、B、C3组,平均每组30例。A组采用丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定;B组患者采用CAN/TFA沉淀法对微量蛋白进行测定;C组患者采用TCA/丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定。对三组的测量结果进行比较分析。结果分析结果表明,C组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显高于其他两组患者,差异有显著的统计学意义(P<0.01);A组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显低于其他两组患者,有显著的统计学意义(P<0.01)。结论采用TCA/丙酮沉淀法对尿液微量蛋白含量进行测量的效果比较理想,具有操作简单、高效等特点,可以作为临床对患者进行尿液微量蛋白测量的首选方法,值得进一步推广。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的 :探讨TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白的效果影响。方法:分别选用丙酮沉淀法和TCA/丙酮沉淀法对尿液标本进行处理,并对两种方法双向电泳结果进行比较分析。结果 :TCA/丙酮沉淀后的尿液标本蛋白点数高于单纯丙酮沉淀,且单纯丙酮沉淀处理的标本清晰度及分辨率均低于TCA/丙酮沉淀处理标本。讨论:在丙酮沉淀前应用TCA可以消除干扰等电聚焦的盐类物质,进一步降低标本的导电能力,提高蛋白提取率。

双向电泳比较两种方法获得的水稻叶片蛋白

水稻是研究单子叶植物遗传和分子生物学的模式植物,是研究植物基因组学和蛋白质组学的一个重要的生物材料。双向电泳作为蛋白质组学中蛋白分离的主要方法,其关键步骤在于蛋白质的提取。为了比较不同蛋白提取方法,采用TCA/丙酮沉淀法和Mg/NP-40提取法分别提取水稻叶片总蛋白,用双向凝胶电泳分离两种方法获得的蛋白。结果表明,在双向图谱中,Mg/NP-40提取法分离的蛋白点数较多,RuBisCO大亚基的含量较低,适于分离等电点在5～7范围内、分子量在14～20kD和高于67kD的水稻叶片蛋白质;TCA/丙酮沉淀法分离的蛋白点数较少,适于分离等电点在4～5范围内、分子量在31～67kD内的水稻叶片蛋白质。

2型猪链球菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

为改进适用于2型猪链球菌分泌组双向电泳样品的制备方法,本研究将无蛋白细菌培养液培养2型猪链球菌,分别以超滤-冻干法、超滤-冻干-丙酮沉淀法和改良超滤-冻干-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法富集培养物上清中的细菌分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高。因此,改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的2型猪链球菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。

橡胶树胶乳C-乳清双向电泳样品制备技术的建立及优化

在TCA/丙酮沉淀法的基础上,用乙醇和乙醚洗涤(称双乙法)沉淀获得橡胶树胶乳C-乳清蛋白样品,并在样品溶解时通过超声助溶进一步提高样品的溶解度。结果显示,利用改良后的样品制备方法(TCA/丙酮+双乙法+超声处理)所获得的C-乳清蛋白样品的溶解性大幅增加,蛋白得率高达8.47 mg/mL C-乳清,为传统TCA/丙酮法的1.6倍;同时降低了盐离子浓度,等电聚焦时升压顺利、聚焦完全,双向电泳的图谱质量明显改善,在银染2D胶上可获得1 206个蛋白点,为传统TCA/丙酮法的2.7倍。本文对胶乳C-乳清蛋白样品制备方法进行深入优化,获得了重现性较好的高质量双向电泳蛋白图谱,促进了橡胶树蛋白质组学研究。

标本处理方法对尿液蛋白电泳的影响

目的探讨不同蛋白沉淀方法对尿液标本蛋白电泳效果的影响。方法采集尿液标本8份,分别采用丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法及ACN/TFA沉淀法对尿液标本进行蛋白沉淀,然后进行双向电泳,比较3种标本处理方法后蛋白电泳蛋白点数及图像清晰程度。结果 TCA/丙酮沉淀后电泳图谱清晰,丙酮沉淀法及ACN/TFA沉淀后单边电泳图谱具有较多横纹干扰条带,尿液标本TCA/丙酮沉淀后电泳蛋白点数高于丙酮沉淀法及ACN/TFA沉淀法,差异具有统计学意义。结论在丙酮沉淀前应用TCA可以消除干扰等电聚焦的盐类物质,进一步降低标本的导电能力,并且能够最大程度地提取尿液中的蛋白质。

蓖麻种子蛋白质双向电泳优化体系的建立

为建立蓖麻种子蛋白质双向电泳优化体系,本研究以‘2129’品系蓖麻种子为试验材料,采用2-DE技术的方法,对其进行研究。结果表明:酚提取法比TCA/丙酮沉淀法更适宜提取蓖麻种子的总蛋白质;24 cm pH 3-10NL的干胶条比pH 4~7的干胶条更适宜应用在蓖麻种子的2-DE电泳中;对蛋白质样品进行除杂比不除杂得到的蛋白质图谱更加清晰,且横条纹和纵条纹都有所减少;蛋白质上样量为800μg时获得的蛋白质图谱最佳。本研究将为蓖麻种子蛋白质组学的研究提供基础数据和技术支持。