TCA-丙酮沉淀法提取聚合草叶蛋白的研究

目的本研究旨在用TCA-丙酮沉淀法对聚合草叶蛋白进行提取,为聚合草叶蛋白的大规模制备奠定基础。方法测定聚合草干叶、鲜叶中的蛋白含量,提取的蛋白经真空冷冻干燥后称重,确定所提蛋白的纯度并计算蛋白提取率。结果以鲜叶为原料时的提取率为51.76%,所得蛋白的纯度为54.2%;以干叶为原料时,蛋白提取率为46.45%,蛋白纯度为48.3%。结论利用TCA-丙酮沉淀法从聚合草鲜叶中提取粗蛋白优于干叶。

2型猪链球菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

为改进适用于2型猪链球菌分泌组双向电泳样品的制备方法,本研究将无蛋白细菌培养液培养2型猪链球菌,分别以超滤-冻干法、超滤-冻干-丙酮沉淀法和改良超滤-冻干-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法富集培养物上清中的细菌分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高。因此,改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的2型猪链球菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

双向电泳比较两种方法获得的水稻叶片蛋白

水稻是研究单子叶植物遗传和分子生物学的模式植物,是研究植物基因组学和蛋白质组学的一个重要的生物材料。双向电泳作为蛋白质组学中蛋白分离的主要方法,其关键步骤在于蛋白质的提取。为了比较不同蛋白提取方法,采用TCA/丙酮沉淀法和Mg/NP-40提取法分别提取水稻叶片总蛋白,用双向凝胶电泳分离两种方法获得的蛋白。结果表明,在双向图谱中,Mg/NP-40提取法分离的蛋白点数较多,RuBisCO大亚基的含量较低,适于分离等电点在5～7范围内、分子量在14～20kD和高于67kD的水稻叶片蛋白质;TCA/丙酮沉淀法分离的蛋白点数较少,适于分离等电点在4～5范围内、分子量在31～67kD内的水稻叶片蛋白质。

烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adustaWZFF.W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65.5%,其中LacA平均纯化了29.2倍,LacB纯化了5.1倍,LacC纯化了18.5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA:68.7kDa、LacB:80.2kDa、LacC:77.2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45-70℃,最适反应pH3.0-5.5,65℃时LacC比LacA稳定,LacC在pH3.5-6.0稳定,LacA在pH5.0-9.0稳定,Al3+对LacA、LacC的酶活有促进作用,Cl-、Fe3+、Hg2+抑制LacA、LacC的酶活,Cu2+抑制LacC的酶活,而对LacA的活性没有明显影响。

豆壳过氧化物酶的分离纯化新工艺研究

采用一种新的简单纯化工艺进行了过氧化物酶分离纯化实验研究。该工艺为酶液经硫酸铵-丙酮协同沉淀,丙酮分级沉淀,最后用硫酸锌除杂。使豆壳过氧化物酶的Rz达到1.32,总酶活收率为65%。使用了丙酮-硫酸铵协同沉淀法,即有机溶剂-无机盐二相系统,是一种简便有效的分离纯化生物大分子的新方法。

三氯乙酸/丙酮蛋白质提取法在白内障晶状体蛋白提取中的应用

目的：比较不同蛋白质提取方法在白内障晶状体蛋白提取中的效果，寻找适合白内障晶状体蛋白质组学研究的蛋白质提取方法。 方法：采用裂解液溶解白内障晶状体组织样本，超声裂解离心后分别采用三氯乙酸/丙酮法和 ReadyPrep 2 D Cleanup Kit对晶状体蛋白样本进行提取、二维电泳，并对电泳后凝胶进行染色、图像采集和图像分析。 结果：在2-DE图谱上蛋白斑点的相对分子量在14～97．4kDa之间，等电点在5～9之间，其中高丰度蛋白相对分子量处于20～31 kDa范围内，低丰度蛋白斑点相对分子量处于31～43 kDa范围内。经TCA/丙酮沉淀法处理的含有透明质酸钠白内障晶状体蛋白样本，二维电泳凝胶图谱背景较清晰，蛋白斑点较清楚，共检测到35～40个左右的蛋白斑点。 结论：在人白内障晶状体蛋白质组学研究中，TCA/丙酮法具有较好的纯化效果，为人晶状体组织蛋白质组学的质谱分析研究提供了可靠的二维电泳凝胶图谱。

大鼠皮质双向电泳样品制备方法的优化

目的优化大鼠皮质双向电泳样品制备方法,初步建立双向电泳条件,提高电泳分辨率和重复性。方法分别应用三氯乙酸/丙酮沉淀法、超速离心法及改良超速离心法制备电泳样品,并比较各处理方法对电泳的影响。改良超速离心法即将混合了匀浆液Ⅱ的匀浆物4℃放置过夜后再进行后续处理。结果改良超速离心法所制备的电泳样品,不仅可以减少蛋白的降解,还可以增加蛋白的溶解性,从而获得分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。结论改良超速离心法更适于制备来源于中枢神经系统双向电泳样品。

酿酒酵母超氧化物歧化酶的分离纯化研究

酿酒酵母CNU94经发酵培养后,离心收集菌体,将菌体用甲苯法破壁得到的粗酶液调节pH除杂蛋白,丙酮二次沉淀后,用DEAE32纤维素柱层析梯度洗脱,得到纯化的SOD,其比活为3500u/mg,收率为58.3%。PAGE电泳后的活性染色显示,酵母超氧化物歧化酶具4条明显的同功酶。该样品经KCN,H2O2,CHCl3乙醇抑制试验,酶类型为Cu/ZnSOD。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。

有机溶剂二次沉淀法提取纯化酵母菌超氧化物歧化酶的研究

酿酒酵母BUV094经发酵培养后,离心收集菌体,将菌体用甲苯法破壁得到粗酶液,粗酶液经调节PH除杂蛋白,丙酮二次沉淀三步纯化工艺,得到纯化的SOD,其比活为1015U/mg,收率为65.2%。PAGE电泳后的活性染色显示,酵母超氧化物歧化酶具四条同功酶。该样品经K C N,H2O2,氯仿—乙醇抑制试验,酶类型为Cu/ZnSOD。

三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取

目的探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率。方法采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比。结果三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响。结论三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究。

丙酮沉淀法提取金花茶多糖的研究

[目的]确定丙酮沉淀法提取花金花茶(Camellia chrysantha(Hu)Tuyama)多糖的最佳工艺条件。[方法]以金花茶为研究对象,以水为溶剂,在一定的条件下提取金花茶多糖,提取液用丙酮进行沉淀,选取沉淀剂用量、沉淀时间和离心时间3个因素做单因素试验,然后以离心时间、丙酮加入量、沉淀时间作为因素,进行正交试验,来确定最佳提取条件。[结果]丙酮沉淀法的最佳工艺条件为:离心时间为15 min,丙酮加入量为20 ml、沉淀时间为12 h,在此条件下的所得粗茶多糖含量量为0.003 7 g。[结论]该研究建立的检测方法简便、快速,具有较强的实用性。

三氯乙酸沉淀罗非鱼肉蛋白酶解液的液相色谱分析

用不同浓度三氯乙酸(TCA)溶液沉淀罗非鱼肉Alcalase2.4L酶解液,采用高效体积排阻色谱法对酶解液及沉淀后所得上清液的分子量分布进行分析,研究TCA对酶解液中蛋白或肽的沉淀效果。结果表明,1、2、5h酶解液的不同分子量肽段在1%、3%、5%、7%、10%TCA中都有沉淀作用,大于9.5ku组分的沉淀百分比在47.86%～59.28%之间,2.5～1.4ku的在38.41%～65.49%之间,1.0ku的在21.32%～78.89%之间。随TCA浓度的增加,沉淀百分比增加或减少。

水稻根系蛋白质提取方法的改良

提取出高纯度的根系蛋白质是获得分离效果好、清晰度高的水稻根系蛋白质双向电泳图像的关键。本研究以水稻六叶期幼苗根系为材料,运用改良的TCA/丙酮/SDS法和TCA/丙酮法、TCA/丙酮/Tris-HCl对水稻根系蛋白质进行抽提,进行蛋白质双向凝胶电泳。结果表明:改良的TCA/丙酮/SDS法适用于水稻根系蛋白质组研究,并且350μg上样量获得的双向凝胶电泳图像更为清晰、重现性好,具有较好蛋白质分离效果。

小麦幼穗蛋白质双向电泳条件的优化

本研究以温光敏小麦为试材,用TCA/丙酮和酚提取法提取小麦幼穗蛋白样品,进行了双向电泳优化分析,并对双向电泳过程中出现的问题进行了讨论。结果表明,用TCA/丙酮法提取小麦幼穗蛋白质其产率(浓度)高于酚提取法。SDS-PAGE电泳显示,用TCA/丙酮提取法提取的蛋白质能获得较清晰条带,分辨率较高,而酚提取法提取的蛋白质其条带模糊,分辨率低。对蛋白质纯化除盐可以提高分辨率,减少横竖纹,获得背景清晰的圆形蛋白点。通过ImageMasterTM 2D Platinum5.0软件分析凝胶图谱,结果显示纯化后可降低噪点,纯化后蛋白点数可从未纯化蛋白点数的216增加到583。显然,采用TCA/丙酮法可获得高浓度高质量的蛋白质,而进一步纯化、除盐离子可进一步获得背景清晰可高重复性的电泳图谱。在双向电泳实验过程中,观察到一些异常缺陷胶的出现,如双向电泳图谱中蛋白点扩散,蛋白聚集形成斑点串,没有点或点很少,出现纵纹横纹及图谱扭曲等影响图谱质量的严重问题,本研究对这些问题做了分析并提出了解决方案。

粪产碱杆菌ZWS11菌株对烟嘧磺隆的酶促降解特性

为明确粪产碱杆菌Alcaligenes faecalis ZWS11菌株对烟嘧磺隆的酶促降解特性,采用丙酮沉淀、超声波破碎和高速离心等方法,提取制备了ZWS11菌株的胞外和胞内粗酶液以及菌体碎片悬浮液,并分别测定了其酶活力。结果表明：当V（菌体发酵液）：V（丙酮）=1：3时提取到的胞外粗酶液具有较高的酶活力;胞外粗酶液、胞内粗酶液和菌体碎片悬浮液对24.9μmol/L烟嘧磺隆的平均降解率分别为87.4%、16.9%和17.4%,胞外粗酶液的降解能力与胞内粗酶液或菌体碎片悬浮液相比差异显著（P〈0.05）,由此确定对烟嘧磺隆起降解作用的酶属于胞外酶。最适降解条件研究表明：该降解酶的酶促反应适宜温度为35℃,较适p H值为6.0,反应时间为30 min,在此条件下其对烟嘧磺隆的降解率在80%以上。此外,该降解酶在35~70℃、p H值4.0~9.0范围内均能够保持较高的酶活力,对烟嘧磺隆的降解率均在60%以上,表明该降解酶具有较好的热稳定性和酸碱稳定性。加入不同浓度十二烷基硫酸钠（SDS）和苯甲基磺酰氟（PMSF）,对该降解酶的活力表现出了不同程度的抑制作用。研究结果可为烟嘧磺隆降解酶制剂的规模化生产及被烟嘧磺隆污染土壤的生物修复提供科学依据。

MgFe_2O_4纳米复合氧化物的制备和气敏性能

用反滴定化学共沉淀法制备了纳米尺寸尖晶石型的复合金属氧化物MgFe_2O_4粉体。用X射线粉末衍射分析、透射电镜等手段研究了其结构特性。MgFe_2O_4粉体颗粒均匀，700℃煅烧1 h粉体平均粒径约为20 nm。研究表明：煅烧温度对材料的结构及性能有较大的影响。以MgFe_2O_4纳米粉体为原料制备了旁热式气敏元件，测试了元件的敏感特性和响应恢复特性。结果显示，MgFe_2O_4是一种良好的n型半导体气敏材料，700℃煅烧1 h所得纳米粉体制作的元件在300℃工作温度时对CH_3COCH_3有较高灵敏度和良好的选择性，对体积分数为1 000×10_(-6)的CH_3COCH_3的灵敏度可达36.87。并对气敏机理给予了解释。

^(125)I-TOC和^(125)I-F-PGA放射化学纯度的测定

为比较3种测定125I标记的奥曲肽(TOC)和叶酸-青霉素酰化酶复合物(F-PGA)的放射化学纯度(RCP)的方法是否具有一致性,采用Iodogen法对TOC和F-PGA进行放射性碘标记,并用高效液相色谱法(HPLC)、三氯醋酸(TCA)沉淀法和纸层析法测定标记物的放射化学纯度(RCP),其中TCA沉淀法设4种蛋白浓度以观察其对RCP测定的影响。结果表明,HPLC和纸层析法均能有效分离标记物和游离碘,且HPLC测定这种标记物的RCP最为精确可信。在TCA沉淀法中,用0.2%的小牛血清白蛋白(BSA)测得的RCP最低,而用其它3个BSA浓度测得的RCP则无明显差异(P>0.05);当RCP<10%时,TCA沉淀法与纸层析法测得的RCP间无明显差异(P>0.05),而要高于HPLC(P<0.01);当RCP>10%时,对125I-TOC而言,TCA沉淀法要略低于HPLC和纸层析(P<0.05),但后2种方法无明显差异(P>0.05),且对125I-F-PGA而言,3种方法无明显差异(P>0.05)。3种方法两两之间显著相关(r=0.996~0.999,P<0.001)。

竹节参总皂苷的纯化方法研究

比较了大孔树脂吸附与丙酮沉淀法对竹节参总皂苷的纯化效果。结果表明,大孔吸附树脂对竹节参总皂苷具有较好的纯化能力,D101大孔树脂对竹节参总皂苷的吸附能力最佳。最佳洗脱条件为:60%的乙醇洗脱,洗脱剂用量为3BV(BV为树脂体积倍数),洗脱流速为1 mL/min。该条件下竹节参总皂苷纯度可达88.12%(丙酮沉淀法64.30%)。

西兰花多肽的提取及其抗氧化活性分析

采用丙酮沉淀法提取西兰花花蕾粗多肽,并利用凝胶过滤层析对提取物进行分离纯化,制备西兰花多肽组分;采用超氧阴离子、DPPH自由基的清除及还原力测定实验研究多肽组分的抗氧化活性。结果表明:利用丙酮沉淀法、凝胶过滤层析等方法可分离获得3个组分,其中组分II在0.01 mg/m L和0.1 mg/m L浓度时,其超氧阴离子自由基清除率分别为23.38%、45.19%,高于同浓度维生素C;还原力分别为同浓度维生素C的1.37倍和1.6倍,表现出了良好的抗氧化活性,为进一步开展活性研究及西兰花多肽功能产品开发提供了参考。