TCAB1和PinX1在癌症中的相关研究进展

端粒酶通过在染色体末端增加端粒重复来支持肿瘤细胞的增殖。然而,其低丰度和有限的表达模式限制了我们对这个重要的酶的了解。PIN2/TRF1相互作用端粒酶抑制剂1(PinX1)是一种位于人类染色体8p23的新型克隆基因,在维持端粒长度和染色体稳定性方面起着至关重要的作用。它已被证明参与大多数恶性肿瘤的肿瘤发生和进展。端粒酶卡扎尔体蛋白1(TCAB1)是新发现的端粒酶关键核心蛋白组分,属于WD40家族同源物。近年来研究证实,TCAB1与肿瘤的发生发展及预后等生物学行为密切相关。因此,PinX1和TCAB1可能是人类癌症新的潜在诊断生物标志物和治疗靶点,可能在不同的人类癌症中发挥不同的作用。

TCAB1慢病毒表达载体的构建及其在人子宫内膜间质细胞中的表达

目的构建TCAB1基因的慢病毒过表达载体并验证在人子宫内膜间质细胞株(St-T1b)过表达效果。方法通过PCR获取TCAB1全长基因,进行TA克隆,进一步亚克隆构建TCAB1慢病毒表达载体,包被慢病毒后感染St-T1b细胞,通过观察荧光表达和实时定量PCR验证其表达。结果成功构建PLVX-TCAB1-IRES-ZsGreen1慢病毒表达载体并获得相应的慢病毒。荧光显微镜、实时定量PCR结果表明,TCAB1基因可在St-T1b细胞中实现过表达效果。结论成功构建人TCAB1基因特异性的重组慢病毒过表达载体,且证实包被的慢病毒可实现TCAB1基因在St-T1b细胞中的过表达,为后续人TCAB1在人子宫内膜间质细胞的功能研究奠定了基础。

TCAB1在子宫内膜异位症在位内膜中的表达及其作用

目的:探讨TCAB1在内异症(EMs)患者中的表达及其可能的致病机制。方法:选取EMs患者在位内膜和正常妇女子宫内膜。Western blot法检测TCAB1蛋白表达。原代培养EMs患者在位内膜间质细胞(ESC)和正常内膜ESC,实时定量PCR检测TCAB1mRNA表达。构建TCAB1慢病毒沉默表达载体,感染ESC株THESCs,G418筛选稳定沉默表达TCAB1的细胞株后,分别采用MTT、流式细胞术观察细胞增殖和凋亡的变化。结果:与正常患者比较,EMs在位内膜中TCAB1呈异常高表达(P=0.006);在位内膜ESC中也呈高表达趋势(P=0.0014)。TCAB1基因在ESC中沉默表达能抑制细胞的增殖(P<0.05)、促进其凋亡(P<0.001)。结论:TCAB1在EMs患者呈异常高表达,可能通过提高逆流子宫内膜抗凋亡能力使之更易于在盆腹腔内生长,这有望为内异症临床治疗提供新的研究方向。

TCAB1蛋白在喉鳞癌组织中的表达及与临床特征之间的关系

目的 通过检测喉鳞癌组织中EB病毒(EBV)感染和TCAB1蛋白的表达情况,初步探讨TCAB1蛋白过表达在EBV感染阳性喉鳞癌组织中的作用机制。方法 收集2011—2018年宁夏医科大学总院(n=113)及上海市眼耳鼻喉科医院(n=12)的125份喉鳞癌及癌旁组织标本进行EBV基因检测及免疫组化TCAB1蛋白定性检测分析、喉鳞癌患者术后生存分析。结果 肿瘤发生部位多位于声门区(92/125,73.6%),病程多在一年之内(91/125,72.8%);EBV感染喉鳞癌的阳性率为61.6%(77/125),且喉鳞癌组织的分化程度、临床分期、肿瘤部位比较,差异无统计学意义(P> 0.05);TCAB1蛋白主要在喉鳞癌组织的细胞核内表达;TCAB1蛋白阳性率为78.4%(98/125),其与喉鳞癌的发生发展,差异有统计学意义(P<0.05),同时与EB病毒感染也有关(P <0.05),但TCAB1蛋白的表达与喉鳞癌患者的喉鳞癌组织的分化程度、临床分期、肿瘤部位比较,差异无统计学意义(P> 0.05);EBV感染、TCAB1蛋白的表达情况与喉鳞癌术后患者的预后比较,差异无统计学意义(P> 0.05),但肿瘤部位是喉鳞癌术后患者的预后独立危险因素。结论 本研究发现EBV感染及TCAB1蛋白表达均与喉鳞癌的发生发展密切相关,提示TCAB1基因参与了EBV感染喉鳞癌的发病过程。

TCAB1基因RNAi慢病毒载体的构建及在人子宫内膜间质细胞中沉默TCAB1基因的效应

目的构建TCAB1基因RNAi慢病毒载体,为子宫内膜异位症(EMs)的基因靶向治疗提供理论依据。方法化学合成3条靶向TCAB1基因的siRNA,转染HEK-293T细胞,24h后采用荧光素酶报告系统筛选有效siRNA,其对TCAB1mRNA有明显抑制作用。针对已经筛选确定的TCAB1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoI和HpaI酶切后的LV1载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV1-shRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV1-shRNA、pRev、pVsvg、pcgv四质粒共转染包装细胞HEK-293T细胞,包装产生慢病毒,分别于转染后48h、72h收取病毒上清,感染人子宫内膜间质细胞(ESC),进行RT-qPCR检测TCAB1基因相对表达量,检测LV1-shRNA干扰效率。结果 PCR和测序证实,成功构建TCAB1 shRNA的慢病毒载体LV1-shRNA。结论成功构建TCAB1基因的RNAi慢病毒载体,其转染ESC细胞后显著抑制了TCAB1的表达,为子宫内膜异位症的基因靶向治疗提供了实验基础。

WRAP53与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征及预后的关系

目的:探讨端粒酶新核心亚单位(WD40-encoding RNA antisense to p53,WRAP53)又名端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集28例PTC患者的癌及癌周正常新鲜组织标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPR-PCR)及免疫组织化学法分别检测WRAP53 mRNA及蛋白在PTC及周围正常组织中的表达,收集117例PTC术后患者的临床数据及对应的癌组织的石蜡切片进行免疫组化检测,分析其蛋白表达水平与甲状腺乳头状癌患者的临床病理特征的相关性,最后应用蛋白质表达图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库探究WRAP53与PTC预后之间的关系。结果:qPR-PCR及免疫组化结果提示WRAP53在PTC中较正常组织高表达(P<0.05)。与WRAP53低表达的PTC患者相比,WRAP53高表达的PTC患者肿瘤直径更长,更易出现淋巴结转移(P<0.05)。HPA数据库显示WRAP53高表达的PTC患者的生存率差于WRAP53低表达的PTC患者(P=0.041)。结论:通过本次研究表明,WRAP53在PTC组织中表达较周围正常组织升高,且其高表达与PTC增殖、淋巴结转移及不良预后相关。WRAP53可能是治疗PTC新的潜在靶点。

TCAB1与肿瘤及其放射敏感性关系的研究进展

端粒酶（telomerase）是一种合成端粒序列的核糖核蛋白复合物,主要由端粒酶逆转录酶（the telomerase reverse transcriptase,TERT）、端粒酶RNA（the telomerase RNA component,TERC）及与酶活性和组装相关的一些蛋白质组成。端粒酶能使端粒的长度和结构得以稳定,从而保护染色体。

TCAB1在子宫内膜异位症中表达及意义

目的:探讨TCAB1基因在子宫内膜异位症(EMs)在位内膜、正常子宫内膜的蛋白表达差异。方法:应用免疫组织化学法(PV-9000二步法)检测11例EMs、13例正常分泌期、13例正常增生期子宫内膜腺体上皮细胞及间质细胞中TCAB1蛋白的表达情况。结果:EMs在位子宫内膜腺体上皮细胞及间质中TCAB1表达强度均显著高于正常增生期内膜,差异有统计学意义(P<0.05);与正常增生期子宫内膜比较,分泌期内膜腺上皮细胞、间质细胞中TCAB1表达强度有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TCAB1在EMs患者在位内膜中异常高表达,提示其可能参与内膜异位症的发生发展,有望为EMT临床诊断及基因靶向治疗提供新的思路。

TCAB1在宫颈鳞状上皮内病变及宫颈鳞癌中的表达

[目的]探讨TCAB1在宫颈鳞状上皮内病变及宫颈鳞癌的表达及意义。[方法]选取2016年1月至2018年8月海南医学院第二附属医院病理科宫颈鳞状细胞癌组织60例,低级别鳞状上皮内病变组织30例,高级别鳞状上皮内病变40例组织及正常宫颈组织30例,采用免疫组化法检测各组的TCAB1表达。[结果]低级别鳞状上皮内病变、高级别鳞状上皮内病变和宫颈鳞癌组TCAB1阳性比例逐渐升高,依次为40.0%(12/30)、75.0%(30/40)和81.7%(49/60),明显高于对照组的0.7%(2/30)(P<0.05)。[结论] TCAB1可能参与宫颈鳞状细胞癌的发生发展。

siRNA干扰TCAB1对人主动脉平滑肌增殖的影响及机制

目的:探究TCAB1沉默对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响及可能机制。方法:采用RNAi技术设计并合成靶向沉默TCAB1基因表达的三对特异性si RNA序列(si TCAB1-331、si TCAB1-619、si TCAB-749)和一对阴性对照序列(NC),使用lipo2000将si TCAB1、NC转染HASMC,分为3个组:干扰组(si TCAB1)、空白对照组(BC)、阴性对照组(NC),转染24小时倒置荧光显微镜观察细胞转染情况;通过RT-qPCR和Western blot从3个干扰靶点中筛选效果最好的干扰靶点。进一步转染si TCAB1-749后,MTS检测HASMC 24、48、72 h的增殖能力,48小时用RT-qPCR和Western blot检测CyclinD1表达量变化,流式细胞术检测HASMC的细胞周期变化。结果:RT-qPCR和WB结果显示si TCAB1-749为最好的干扰靶点;转染24、48、72 h后,si TCAB1-749组增殖水平明显低于NC组、BC组(P<0.05)。流式结果显示:si TCAB1-749组处于G1期细胞比率有所增加,处于S期细胞比率减少(P<0.05),且si TCAB1-749组细胞周期蛋白cyclinD1表达也下降(P<0.05)。结论:沉默TCAB1能抑制HASMC的增殖,其机制可能与阻碍细胞周期蛋白cyclinD1有关。

骨髓间充质干细胞对293T衰老细胞的作用机制研究

目的建立293T细胞衰老模型,评价脐带间充质干细胞对293T衰老细胞端粒及端粒酶相关基因TCAB1的影响。方法通过叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导获得293T细胞衰老模型,用猕猴骨髓间充质干细胞(BMSC)分别与293T细胞、293T细胞衰老模型共培养5d后,采用RT-qPCR法检测细胞端粒相对长度及端粒酶相关基因TCAB1的水平变化。结果通过200μmol/Lt-BHP处理293T细胞2h后,大量细胞出现衰老改变,而凋亡较少。与BMSC共培养5d后,293T细胞及衰老模型的端粒延长和TCAB1基因表达水平均有所升高(P<0.05)。结论t-BHP能够诱导293T细胞衰老,BMSC与293T细胞共培养具有提高细胞端粒酶活性和延长端粒的作用。