RNA干扰PLCε诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的实验研究

目的探讨以RNA干扰沉默人源磷脂酶Ce(phospholipase Cepsilon,PLCε)基因表达后诱导人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的作用和机制。方法脂质体介导重组阳性质粒pGenesil-PLCε(以下简称P)和阴性质粒pGenesil-NP(以下简称NP)转染BIU-87细胞48h后,用RT-PCR和Western blot检测转染前后PLCεmRNA和蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,电镜观察细胞形态改变。结果转染P质粒后可明显抑制PLCεmRNA和蛋白表达水平,抑制率分别为78.7%和76.6%;流式细胞术显示P质粒转染组细胞周期发生改变呈明显G0/G1期阻滞,并出现亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加(P<0.05);电镜观察P质粒转染组细胞可见凋亡小体。结论:RNA干扰沉默PLCε基因表达可诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡,其作用机制与细胞周期分布的改变有关。

基质金属蛋白酶-2在人膀胱肿瘤中的定位表达

目的 探讨MMP - 2在膀胱移行细胞癌 (TCCB)中的定位表达。方法 应用免疫组织化学方法检测MMP -2在 9例正常膀胱和 48例TCCB组织中的表达。结果 MMP - 2阳性表达位于膀胱肿瘤组织的胞膜、胞浆和部分间质组织内 ,呈巢状或灶状分布于肿瘤的周边区。结论 MMP - 2在膀胱肿瘤浸润转移中起到关键性作用。

MMP-9mRNA在人膀胱肿瘤中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达。方法应用RT-PCR方法检测MMP-9mRNA在26例正常和31例TCCB组织。结果MMP-9mRNA在膀胱肿瘤组织水平明显高于正常膀胱组织。结论MMP-9mRAN的过度表达和膀胱肿瘤侵润转移密切相关。

MDR1/P-gp在膀胱移行细胞癌中的表达及与Fas和Survivin蛋白表达的关系

目的:探讨膀胱移行细胞癌中MDR1基因(P-糖蛋白)与Fas、Survivin表达的相互关系及其与膀胱癌生物学行为的相关性。方法:应用免疫组织化学方法检测64例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱粘膜中P-GP、Fas、Survivin的表达。结果:膀胱移行细胞癌中P-GP、Survivin的表达阳性率高于正常粘膜,与膀胱癌的分级有关(P<0.01);而Fas在膀胱正常粘膜中表达高于移行细胞癌,差异有统计学意义(P<0.01)。复发性膀胱癌P-GP的阳性表达率高于初发膀胱癌(P<0.01)。膀胱移行细胞癌P-GP的表达与Fas呈负相关,而与Survivin表达无关。结论:膀胱移行细胞癌的MDR1(多药耐药基因)与Fas的表达密切相关,而与凋亡抑制蛋白Survivin的表达无关。本研究为采用MDR逆转剂或Fas干扰剂以增加膀胱移行细胞癌的化疗敏感性提供实验依据。

藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖抑制作用

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌是否具有增殖抑制作用。方法:MTT法检测藏花素对T24细胞增殖的影响;应用形态学手段观察细胞形态学的改变;流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学。荷瘤小鼠模型建立,测定藏花素处理后荷瘤小鼠体内抑瘤率。结果:藏花素能明显抑制T24细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;藏花素作用后G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例逐渐减少;对照组裸鼠肿瘤的平均体积明显大于藏花素处理组裸鼠肿瘤的平均体积,其差异具有显著性(P<0.05),裸鼠生长抑制率为27.8%。结论:体内外实验证明,藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖有抑制作用。

磷脂酶Cε基因在膀胱移行细胞癌中表达及其临床意义

目的探讨磷脂酶Cε(phospholipase Cε,PLCε)基因在膀胱移行细胞癌表达及临床意义。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测27例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱对照组中PLCε mRNA表达,分析其与膀胱病理学特征的关系。结果PLCε mRNA在膀胱移行细胞癌的表达显著高于正常膀胱组织(P<0.01),PLCε的表达和膀胱移行细胞癌分期有关(P<0.05)而与分级无关(P>0.05)。结论PLCε基因在膀胱移行细胞癌组织中呈高表达,可能是未来检测膀胱移行细胞癌一种新的有价值的肿瘤标志物,同时也可能成为膀胱肿瘤生物学治疗中一个新靶点。

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响

目的:应用基因表达谱芯片研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响。方法:MTT法测定藏花素对T24细胞的生长抑制率,选出藏花素最佳作用时间和浓度,运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的变化,筛选差异表达基因。RT-PCR和免疫细胞化学验证上调基因p21^(WAF1)和下调基因cyclinD1。结果:MTT实验结果显示3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h的抑制率与对照组相比有显著意义(P<0.05)。基因芯片检测发现3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h引起该细胞系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异2倍以上的基因共836个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面,最为明显的是与细胞生长调节相关的细胞周期调节基因、细胞凋亡调控基因、DNA复制相关基因等类型。RT-PCR检测其中的细胞周期调节相关基因p21^(WAF1)和cyclinD1,结果与基因芯片相符。同时免疫细胞化学结果从蛋白表达水平上佐证p21^(WAF1)和cyclinD1变化与芯片结果一致。结论:藏花素可以诱导T24细胞基因表达谱广泛的改变,并可能通过调控细胞周期相关基因的表达来抑制T24细胞的增殖。

细胞周期素G_1和G_2在膀胱癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌(尿路上皮癌)中的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2000-2006年有完整临床和病理资料的膀胱移行细胞癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱移行细胞癌和5例癌旁组织中细胞周期素G1和G2的表达水平。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对细胞周期素G1和G2的表达进行定量分析,并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果细胞周期素G1在膀胱移行细胞癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达。而细胞周期素G2在膀胱移行细胞癌中呈低表达,癌旁组织中呈高表达。膀胱移行细胞癌与癌旁组织相比,差异有显著性(P<0.05)。随着移行细胞癌组织中细胞周期素G1表达的增高,周期素G2的表达却显著下降,两者呈显著负相关(P<0.01)。结论细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌与癌旁组织中对细胞周期调控和/或DNA修复起了重要作用,并参与了诱导细胞凋亡的过程。

PLCε siRNA转染对膀胱癌细胞株T24侵袭能力的影响

目的:研究磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)siRNA表达质粒的转染对人膀胱癌细胞系T24侵袭转移能力的影响。方法:分别将携有PLCεsiRNA基因的真核表达质粒两对p11-PLCε和p12-PLCε载体体外转染T24细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PLCεmRNA的表达情况,应用Transwell小室侵袭试验、明胶酶谱分析分别研究转染前、后膀胱癌细胞侵袭转移能力的变化,并以空载质粒HK-A转染和未转染细胞为对照。结果:RT-PCR检测显示pll-PLCε,p12-PLCε转染成功后T24细胞PLCεmRNA表达明显比空质粒HK-A转染和未转染细胞减弱;p12-PLCεsiRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(26.8±5.8)和pll-PLCεsiRNA转染细胞穿透侵袭小室滤膜的数目(25.8±6.2)明显少于未转染细胞(34.8±6.9)和HK-A转染细胞(33.8±5.7)(P<0.01);明胶酶谱分析显示转染pll-PLCε、p12-PLCε均使细胞分泌MMP-2、MMP-9明显低于未转染细胞和HK-A转染细胞。结论:推测转染外源性PLCεsiRNA基因能下调PLCε基因的表达并能抑制膀胱癌细胞侵袭转移。

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞VEGF-C表达水平的影响

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor,VEGF-C)表达水平的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度及不同时间藏花素对T24细胞抑制率,选出最佳药物浓度和最佳作用时间。用RT-PCR和基因芯片分别检测最佳作用时间和最佳药物浓度作用前后T24细胞VEGF-C的表达。结果:MTT显示藏花素抑制T24细胞生长具有时间和剂量依从性,3mmol/L藏花素作用48h对T24细胞的抑制率最高。RT-PCR显示藏花素组VEGF-C表达明显减少,基因芯片扫描结果中藏花素组VEGF-C表达也显著下调。结论:藏花素抑制T24细胞增殖,可能与下调VEGF-C的表达,从而减少肿瘤血管的生成有关。

膀胱移行细胞癌血管生成拟态的实验

目的寻找在膀胱癌中是否存在血管生成拟态(VM),探讨VM的生物学意义。方法对85例膀胱移行细胞癌存档石蜡标本采用过碘酸雪夫氏反应(periodic acid schiff,PAS)和CD31双重染色,寻找血管生成拟态,分析VM存在的临床意义。结果在85例膀胱癌组织中有8例存在血管生成拟态,这些管道呈现PAS阳性、CD31阴性,其中2例为中分化膀胱癌,6例为低分化膀胱癌,包括T2期1例,T3期4例,T4期3例。8例中有6例出现淋巴结转移。VM存在与否与膀胱癌的病理分级、临床分期和淋巴结转移均有相关性(P<0.05)。结论中低分化膀胱癌中存在血管生成拟态,VM可作为判定膀胱癌恶性程度的一个指标和膀胱癌治疗的新靶向。

T24膀胱癌细胞ARID1A基因的表达与细胞增殖活力相关性研究

目的探讨AT丰富结合域1A(ARID1A)基因的表达与膀胱癌细胞T24增殖活力的关系,为进一步基因功能研究提供基础。方法利用梯度稀释法分离获得膀胱移行癌细胞系T24的高增殖亚克隆细胞株,体外评价细胞株和亲代细胞系增殖活力差异,检测细胞周期调控基因CCND1和膀胱癌肿瘤干细胞标志因子CD44。检测染色质重建复合物SWI/SNF亚基基因ARID1A在亚克隆和亲代细胞系的转录表达水平差异。结果分离得到65个T24的亚克隆细胞株,其中T24-9亚克隆细胞株不同于亲代的梭形形态,呈细小的圆形形态,增殖能力明显强于亲代,CC-ND1、ARID1A和CD44的mRNA表达量均有增加。结论 T24细胞系中的含有高增殖活力的干细胞细胞亚群,染色质重建复合物基因ARID1A转录活跃,可能增加ARID1A突变的风险。

缺氧诱导因子-1α与上皮型钙黏蛋白在膀胱癌中的表达及相关性研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、上皮型钙黏蛋白(CDH1)与膀胱移行细胞癌的发生、病理分级和临床分期之间的关系及两者在膀胱移行细胞癌表达的相关性。方法应用免疫组织化学(SP)的方法测定50例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱组织中的HIF-1α与CDH1的表达。结果HIF-1α与膀胱移行细胞癌的发生、病理分化程度和临床分期之间之间明显相关(分别P<0.05、P<0.05、P<0.05),CDH1与膀胱移行细胞癌的发生、病理分化程度和浸润性之间明显相关(分别P<0.01、P<0.05、P<0.01),HIF-1α与CDH1在膀胱移行细胞癌中的表达呈负相关(r=-0.600,P<0.01)。结论HIF-1α与CDH1联合检测可能有助于判断预后,HIF-1α与膀胱移行细胞癌中CDH1的表达下降有关。

EphA2及其磷酸化在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的研究上皮细胞激酶-2(EphA2)及其磷酸化与膀胱癌生物学特性的关系。方法采用Western blotting和免疫沉淀技术分别测定20例膀胱移行细胞癌(TCCB)和10例正常膀胱黏膜EphA2和磷酸化上皮细胞激酶(EphA2-P)的表达。结果 EphA2在膀胱移行细胞癌中的表达明显高于正常膀胱黏膜(P<0.001),在膀胱移行细胞癌低分化组表达强于高分化组;EphA2-P在正常膀胱黏膜中的表达高于膀胱移行细胞癌(P<0.001)。结论 EphA2及其磷酸化参与膀胱移行细胞癌的恶性表达,EphA2将成为判定膀胱癌恶性程度的指标和膀胱癌治疗的新靶向。

基质金属蛋白酶-2与膀胱移行细胞癌侵袭和转移的关系

目的 研究金属蛋白酶 -2 (MMP -2 )在膀胱移行细胞癌 (TCCB)组织中的表达规律 ,探讨其与肿瘤的侵袭和转移的关系。方法 通过免疫组织化学、原位杂交及酶谱分析等方法研究 47例手术切除的TCCB中MMP -2的表达情况 ,同时取 5例正常膀胱组织作为对照。结果 在正常膀胱组织中MMP -2不表达或微弱表达 ,而在肿瘤组织中MMP -2呈不同程度的阳性表达。随着TCCB临床病理分期、分级的升高 ,MMP -2表达呈现增高趋势 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 MMP -2表达与TCCB的侵袭和转移性密切相关。临床上可以将MMP -2作为判断TCCB进展的标志物。

膀胱移行细胞癌中EphA2的表达和肿瘤MVD计数的关系

目的:探讨膀胱移行细胞癌中EphA2的生物学意义以及EphA2与微血管密度(MVD)的关系。方法:应用免疫组织化学技术检测85例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱粘膜中EphA2的表达,采用CD31染色标记微血管,行肿瘤微血管密度计数。结果:膀胱移行细胞癌和正常膀胱粘膜EphA2表达阳性率分别为89.4%(76/85)、40%(4/10),两组间差异有统计学意义(P<0.01);EphA2表达程度与膀胱癌的病理分级、临床分期和淋巴结转移均有相关性(P<0.05);膀胱移行细胞癌EphA2阴性组与EphA2阳性纽间肿瘤微血管密度(MVD)计数差异有统计学意义(P<0.05),EphA2不同阳性程度组之间MVD计数差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:EphA2可作为判定膀胱癌恶性程度的参考指标,与肿瘤微血管生成相关,有望成为膀胱癌治疗的新靶向。

明胶酶A(MMP-2)蛋白在评估膀胱移行细胞肿瘤进展期的作用

目的 研究明胶酶A(MMP 2 )在不同病理分期、分级的膀胱移行细胞肿瘤 (TCCB)中的表达规律 ,并探讨以MMP 2来判断TCCB进展情况的可能性及方法。方法 通过免疫组织化学和明胶酶谱等方法对 4 7例手术切除的TC CB组织中MMP 2蛋白进行定量检测 ,同时取 5例正常膀胱组织作为对照。对检测结果进行统计学分析。结果 (1)MMP 2蛋白在TCCB中呈阳性表达 ,在正常膀胱组织中MMP 2不表达或呈微量表达 ;(2 )随着TCCB临床病理分期、分级的升高 ,MMP 2表达量呈现增高趋势 ,有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 MMP 2蛋白表达与TCCB的恶性发展密切相关。临床上可将MMP 2作为判断TCCB进展情况的标志物。

EphA2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的探讨EphA2在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP方法,检测56例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱组织中EphA2蛋白的表达,并分析其与临床病理因素的关系。结果TCCB组织中EphA2阳性表达率为67.19%,显著高于正常膀胱组织(P<0.05);随着膀胱癌病理分级增加,EphA2的阳性表达率增加(P<0.05)。浸润性TCCB组织的EphA2阳性表达率明显高于浅表性TCCB,二者之间比较差异有显著意义(P<0.05)。结论EphA2的表达异常可能参与TCCB的发生、发展与浸润,可能会成为膀胱肿瘤患者恶性度和判断预后的重要生物学指标,并有可能成为治疗人类TCCB的作用靶点。

浸润性膀胱癌组织中肿瘤血管形成与淋巴结转移间的关系

目的 通过对浸润性膀胱移行细胞癌(TCCB,T2～T4 NXMO)组织中血管形成的定量研究,探讨微血管密度(Microvessel Density,MVD)与淋巴结转移之间的关系。方法 应用免疫组织化学SP法对23例淋巴结阴性及15例淋巴结阳性浸润性膀胱移行细胞癌组织中的血管进行染色,用微血管密度(MVD)表示血管形成的程度。结果 有淋巴结转移的病例TCCB肿瘤组织中MVD明显高于无转移组(p<0.01)。结论 肿瘤血管形成在TCCB的生长转移过程中起到重要作用,在浸润性ICCB中MVD可推测淋巴结转移状况。