TCDCA对AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞中三磷酸肌醇的影响

为了进一步探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型大鼠治疗作用的分子机制,以AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)为研究对象,采用酶联免疫吸附技术(enzyme linked immune sorbent assay,ELISA)检测了TCDCA对AA模型大鼠FLS中三磷酸肌醇(inositol trisphosphate,IP3)含量的影响。研究结果显示,与空白对照组相比较,TCDCA作用15 min和60 min时AA模型大鼠FLS中IP3的含量显著升高(P<0.05),而当TCDCA作用30 min时AA模型大鼠FLS中IP3的含量极显著升高(P<0.01)。由此可知,TCDCA能够提高AA模型大鼠FLS中IP3的含量。

TCDCA对AA大鼠滑膜组织糖皮质激素受体基因表达的影响

为了观察牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎模型滑膜组织中糖皮质激素受体(GR)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠成纤维样滑膜细胞的作用机制,试验制备AA大鼠模型,分离AA大鼠滑膜组织,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠滑膜组织GR mRNA表达的影响。结果表明:与对照组相比,模型组AA大鼠滑膜组织中的GR表达量显著增加(P<0.05);与模型组相比,低剂量(0.1g/kg)TCDCA口服治疗组AA大鼠的GR mRNA表达量显著增加(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠滑膜组织GR mRNA的表达。

牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞EP_2受体mRNA表达的影响

为探讨TCDCA对佐剂性关节炎（AA）模型大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）EP2受体mRNA表达的影响,采用Elisa法测定AA模型大鼠FLS内cAMP的含量,以确定TCDCA作用于FLS的最佳药物浓度;采用RT-PCR法测定最佳TCDCA药物浓度对FLS中EP2受体mRNA的表达量。结果表明,PGE2刺激FLS后,FLS内cAMP的浓度和EP2受体mRNA的表达量均显著升高（P〈0.05）,而TCDCA（10^-4-10^-7 mol/L）能够显著降低PGE2（10^-6mol/L）刺激的FLS内cAMP浓度（P〈0.05）,且存在剂量依赖性;TCDCA（10^-5-10^-7 mol/L）还能够显著降低EP2受体mRNA的表达量（P〈0.05）。这表明TCDCA对PGE2-EP受体-cAMP信号通路产生影响,是其发挥抗关节炎作用的重要分子机制之一。

TCDCA对TGR5介导的NR8383细胞IL-1β的影响

研究牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对TGR5介导的经脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导后NR8383细胞IL-1β的影响。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative,qPCR)法确定TGR5在NR8383细胞中mRNA水平及白介素-1β(Interleukin-1,IL-1β)mRNA表达的影响;采用Western blot法测定TGR5在NR8383细胞中蛋白表达量;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)测定TCDCA对TGR5介导的NR8383细胞IL-1β蛋白活性的影响。结果表明,高表达TGR5的NR8383细胞中IL-1βmRNA表达量和蛋白活性均显著高于正常细胞组,TCDCA能极显著降低LPS诱导的IL-1β基因表达和蛋白活性(P<0.01)。TCDCA是通过TGR5受体进而影响LPS对IL-1β基因水平及蛋白活性的诱导作用。

TCDCA对四氯化碳所致大鼠肝损伤的影响

为了研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对大鼠肝损伤的影响,试验采用大鼠四氯化碳肝损伤模型,观察TCDCA对肝损伤大鼠血清AST、AKP、T-Bil、总蛋白质含量及总抗氧化能力的影响。结果表明:TCDCA能显著降低CCl4所致大鼠急性肝损伤血清中AST、AKP、T-Bil含量;显著升高CCl4所致大鼠急性肝损伤血清中蛋白质含量和总抗氧化能力。因此,TCDCA对CCl4所致大鼠急性肝损伤有一定的保护作用。

牛磺酸鹅去氧胆酸对小鼠免疫功能的影响

目的:研究牛磺酸鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠免疫功能的影响。方法:分别采用流式细胞术双抗标记法、血清溶血素分光光度法、变态反应法、碳廓清法和比浊测定法分别测定TCDCA对T细胞亚群、对血清中抗体含量、单核-巨噬细胞吞噬功能及溶菌酶含量的影响。结果:TCDCA明显提高小鼠外周血中CD4+和CD19+细胞百分率及CD4+/CD8+比值;高、低剂量的TCDCA均能提高小鼠血清平均溶血素含量和血清中溶菌酶的含量,同时也可能增强单核-巨噬细胞吞噬功能及抑制小鼠迟发型变态反应。结论:TCDCA能明显提高小鼠机体的免疫功能。

牛磺鹅去氧胆酸的抗炎作用机理

运用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)按0.2g/kg剂量,经灌胃给药后,测量致炎前和致炎后不同时期大鼠足跖肿胀度,并采用荧光分光光度法和ELISA双抗夹心法分别测定AA大鼠外周血中NO、LTB4含量。结果:TCDCA连续给药21d,可显著抑制AA大鼠不同时期的足跖肿胀,显著降低血清中NO水平;TCDCA连续给药4d,可显著降低AA大鼠外周血中LTB4含量。结论:TCDCA的抗炎作用与其抑制LTB4和NO产生有关。

HPLC-ELSD法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量

目的:建立熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)含量的测定方法。方法:应用 HPLC-EISD法直接测定熊胆粉中 TUDCA 和 TCDCA 的含量。色谱条件:色谱柱:Varian C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-醋酸-醋酸铵缓冲液(pH4.5)(70:30),流速:0.8mL·min^(-1);ELSD 漂移管温度:105℃,载气流速:3.2L·min^(-1),雾化气体(空气)压力:0.5MPa。结果:在选定的色谱条件下,TUDCA 和 TCDCA 可达到很好的分离。TUDCA 进样量在0.378～6.056μg范围内,TCDCA 进样量在0.489～7.829μg范围内均呈良好的线性关系。结论:该方法简便、快速,结果准确,重现性好。

牛磺鹅去氧胆酸对大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α和IgG的影响

研究牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IgG含量的影响。用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎模型,采用重量法测定AA大鼠胸腺指数、脾指数;采用ELISA双抗夹心法和免疫比浊法测定AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α和IgG的含量。结果显示,与模型组比较,TCDCA可抑制AA大鼠胸腺指数,提高AA大鼠外周血中IL-1β、IL-6、TNF-α含量,降低AA大鼠外周血中IgG含量。

牛磺酸鹅去氧胆酸对小鼠体内氧自由基代谢的影响

研究了牛磺酸鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠体内氧自由基代谢的影响。分别采用黄嘌呤氧化酶化学发光法、化学比色法、紫外分光光度法、硫代巴比妥酸法及酶标法测定了小鼠血浆、肝脏、脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量及血浆中一氧化氮合成酶(NOS)的活性。结果显示,高、低剂量的TCDCA均能显著提高小鼠血浆和肝组织中的SOD活性,显著提高小鼠肝组织中CAT的活性,显著提高小鼠血浆中NOS活性,显著降低小鼠肝组织中GSH-Px活性;高剂量TCDCA能极显著提高小鼠脑组织中GSH-Px活性;低剂量TCDCA能显著提高小鼠血浆中CAT活性;高、低剂量的TCD-CA能分别显著降低小鼠血浆和脑组织、肝脏中的MDA含量。试验表明TCDCA具有显著的抗氧化作用。

RP-HPLC梯度法测定8种蛇胆中结合型胆汁酸的含量

目的:用 HPLC 梯度洗脱法同时测定蛇胆中牛磺胆酸(TCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺去氧胆酸(TDCA)、甘氨胆酸(GCA)4种结合型胆汁酸的含量。方法:用美国 Zorbax Extend C_(18)柱,乙腈-0.15%磷酸氢二钠溶液梯度洗脱0～20min(15:85～40:60)。流速1.0mL·min^(-1),检测波长203nm。结果:TCA、TCDCA、TDCA、GCA 在进样量为2～39μg范围内线性关系良好。该方法回收率 TCA 为99.5%(RSD=0.5%),TCDCA 为100.3%(RSD=1.8%),TDCA 为100.0%(RSD=1.8%),GCA 为98.9%(RSD=2.2%)。结论:HPLC 梯度法能将蛇胆中结合型胆汁酸很好分离,方法简单,准确。

麦饭石复合添加剂对熊胆粉质量与产量的影响

选用6只胆汁产量稳定、体况相近的黑熊,随机分成2组。试验组添加1%的麦饭石复合添加剂,对照组不加。进行熊胆汁引流和熊胆粉成分分析试验。经过90d的熊胆汁引流试验,试验组和对照组的熊胆汁产量分别为233.97mL、204.58mL,差异显著(<0.05);干粉率分别为5.08%和4.66%,干粉率差异不显著(>0.05);试验期试验组和对照组的熊胆粉产量分别为11.87g和9.53g,干胆产量差异极显著(<0.01);熊胆粉成分分析结果表明,对照组和试验组的牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)含量分别为20.42%和37.38%,经检验差异极显著(<0.01)。

牛磺鹅去氧胆酸对FLS细胞中GR介导的HSP 90基因表达的影响

采用实时荧光定量PCR法分析了牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对佐剂性关节炎模型(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中由糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)介导的热休克蛋白90基因(heat shock protein 90 gene,HSP90)mRNA表达的影响。结果表明,TCDCA可以极显著性(P<0.01)下调FLS细胞内HSP 90 mRNA的表达,同时加入GR的特异性抑制剂RU486后可抑制TCDCA对HSP 90 mRNA的作用。由此证明了TCDCA是通过GR受体发挥抗炎和免疫调节作用的。

牛磺鹅去氧胆酸对糖皮质激素引起小鼠免疫抑制的影响

采用80mg/kg剂量的地塞米松对小鼠进行腹腔注射制备免疫抑制小鼠模型;牛磺鹅去氧胆酸(Tauroche-nodeoxycholic acid,TCDCA)设计了0.05、0.10、0.20g/kg低、中、高3个给药剂量对小鼠灌胃给药;检测免疫器官质量,碳粒廓清法检测单核-巨噬细胞吞噬功能,流式细胞术检测外周血CD4+和CD8+细胞亚群百分率及CD4+与CD8+的比值,ELISA检测血清中IgG的含量。结果显示:模型小鼠和正常小鼠相比较,脾指数、单核-巨噬细胞吞噬功能、CD4+和CD8+亚群百分率及血清IgG含量均极显著降低(P<0.01),说明地塞米松制备的小鼠模型免疫功能极显著低下。给药组与模型组相比较,TCDCA的3个剂量组对小鼠脾指数均无显著影响(P>0.05);低剂量组和中剂量组极显著增强单核-巨噬细胞系统吞噬功能(P<0.01);3个剂量组均显著提高外周血中CD4+细胞百分率(P<0.05),中剂量组显著提高CD4+与CD8+的比值(P<0.05);低剂量组和中剂量组显著提高小鼠血清中IgG含量(P<0.05)。结果表明,TCDCA对糖皮质激素免疫抑制小鼠的非特异性免疫和特异性细胞免疫、体液免疫功能具有恢复作用,但对脾脏萎缩无恢复作用。

牛磺鹅去氧胆酸对TGR5介导的NR8383细胞TNF-ɑ的影响

采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative,qPCR)法检测牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对TGR5介导的NR8383细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因水平的影响,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)检测NR8383细胞中TNF-ɑ蛋白活性的变化情况。结果显示:高表达TGR5的NR8383细胞中TNF-α的mRNA表达量和蛋白活性均显著低于正常细胞组;另外,TCDCA能极显著降低LPS诱导的TNF-α基因表达量和蛋白活性(P<0.01)。结果表明:TCDCA通过TGR5受体调控LPS对TNF-α基因表达及蛋白活性的诱导作用。

鸭胆汁中鹅去氧胆酸提取方法的建立

以鸭胆膏为原料,以高效液相色谱法和薄层层析法测定鹅去氧胆酸(CDCA)含量,研究钡盐法提取CDCA以及理化影响因素,建立了制备高纯度CDCA的工艺方法。以500mL鸭胆汁水解过后制得19.4g总胆酸,其中含有8.13g CDCA,而且在水解过程中部分牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)转化生成了CDCA。上述方法简单有效,成本低廉,为临床分离鹅去氧胆酸提供了新的工艺方案。

牛磺鹅去氧胆酸对糖皮质激素受体激活效应

探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对糖皮质激素受体(GR)的激活效应,采用免疫荧光术检测NR8383细胞内GR的表达及不同浓度TCDCA对NR8383细胞核移位的影响,采用实时荧光定量PCR法分析了TCDCA对AA大鼠FLS细胞中由GR产生的VCAM-1和COX-2mRNA表达的影响,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析了TCDCA对AA大鼠FLS细胞中由GR介导的VCAM-1蛋白表达的影响。结果表明,TCDCA可以极显著性(P<0.01)的激活NR8383细胞内的GR受体,且在加入GR的特异性抑制剂RU486之后,GR受体的荧光值显著下降,表明RU486阻断了TCDCA对GR受体的激活作用。而TCDCA组和DEX组间无显著性差异(P>0.05);TCDCA可以抑制VCAM-1及COX-2的表达量。由此进一步证明TCDCA是通过GR受体发挥抗炎和免疫调节作用。