喉癌局部免疫反应中TIL细胞亚群与TCF-β_1的作用及其相关性

目的 探讨TIL、TGF-β_1在喉癌中表达及其肿瘤临床分期、细胞分化、转移的关系。方法 采用鼠抗人单克隆抗体通过免疫组化SABC法对10例正常对照组(扁桃体)和38例喉癌标本中各因子进行检测。结果 喉癌中单个核细胞主要是CD_3、CD_4和CO_8分布与CD_3一致,CD_8:CD_4为1.4:1。正常对照组中浸润总数及各亚群细胞数均明显多于喉癌组。随TNM分期增高,CD_4/CD_8下降,NK、Mφ及IL-2R^+下降。分化好的间质中淋巴细胞数多于分化差的。在发生肿瘤转移的喉癌病人CD_8增高、CD_4减少、TGF-β_1在喉癌及正常对照组中差异显著,在不同分期及不同发生部位间差异不显著,而在高低分化者间差异显著,TGF-β_1与CD_4表达无相关性、而与CD_8表达有相关性。结论 TIL淋巴亚群、TGF-β_1在喉癌的临床分期,病理分级、转移等方面各有作用,CD_4在喉癌局部免疫中起关键作用,CD_8细胞在对抗癌中起主要作用,TGF-β_1可能在抑制喉癌细胞增殖分化方面有较积极的作用,在判断是否有淋巴结转移方面有明显临床意义,CD_4、CD_8与TGF-β_1在喉癌中的表达有一定协同性。

中药单体调控TGF-β1/Smad信号通路防治糖尿病肾病研究进展

转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/Smad信号通路是糖尿病肾病肾脏纤维化的关键信号通路之一。TGF-β1/Smad信号通路能通过促进细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚,抑制ECM的降解,增加纤连蛋白和胶原蛋白Ⅳ表达,促进炎症因子释放,诱导足细胞凋亡等对肾纤维化过程进行调控,部分中药单体可调控TGF-β1/Smad信号通路,显著干预糖尿病肾病的发生发展过程,且取得良好的临床疗效。目前,已初步明确TGF-β1/Smad在糖尿病肾病发生发展中的作用机制,但仍存在许多问题:(1)TGF-β1/Smad信号通路在干性糖尿病肾病和湿性糖尿病肾病中的参与程度和差异不明确;(2)不同功效的中药对纤维化保护性通路发挥正向调节和负向调节作用方向尚不明确;(3)TGF-β1/Smad信号通路会与其他通路形成信号串扰,需探索各条通路间的相互影响机制,并在微观领域深入观察各信号通路对细胞的调控机制;(4)很多中药既能干预TGF-β1/Smad信号通路,又能干预其他通路如自噬、凋亡,在糖尿病肾病的临床治疗中,其疗效的核心机制到底是哪一通路,可能需要精准靶向药物对信号通路进行阻断和促进后,观察疗效的变化来确定;(5)现有的通过调控TGF-β1/Smad治疗糖尿病肾病的临床研究较少,主要以动物实验和基础实验为主,缺少大样本、多中心、前瞻性、长周期的高质量临床试验;(6)目前关于中药有效成分的研究较多,但在中药单体、单体组合方面的研究存在明显不足。今后,需进一步明确TGF-β1/Smad信号通路在干性糖尿病肾病和湿性糖尿病肾病中的参与程度及差异性,明确不同功效的中药对纤维化保护性通路的调节作用,应用分子对接等技术探索中药的有效成分,尤其是对中药单体及单体组合。

Smad2／3／4和TCF-β1在先天性巨结肠症组织中的表达

转化生长因子-β（TGF-β）是许多具有共同生物学特性的信号分子组成的大家族，称为TGF-β超家族（transforminggrowthfactor-betasuperfamily），TGF-β1是其中一员。TGF-β1是一类具有多种功能的多肽类生长因子，主要功能是抑制细胞生长，促进基质形成，与多种疾病的发生发展密切相关。

中医药对TGF-β_1调控作用的研究进展

转化生长因子β（Transforming growth factor—β，TGF—β1）超家族成员是在发育和组织内环境稳定中起中枢作用的多功能生长因子β1，具有调节细胞生长、死亡或凋亡、细胞分化和细胞外基质合成等不同的生物学功能。TGF—β被认为是病理状态下细胞外基质积聚导致组织纤维化的关键调节因子回。体内大多数细胞都可分泌TGF—β，许多细胞表面都有TGF—β受体。

颌间Ⅲ类矫形力作用下转化生长因子β1在髁突软骨中的基因表达

目的 观察颌间Ⅲ类矫形力不同作用时间下转化生长因子 β1(TGF_β1)在髁突软骨中的基因表达。 方法 选用青春生长发育期雌性恒河猴 6只 ,随机分为 3、6月实验组和对照组 ,实验组戴用颌间Ⅲ类双阻板磁力矫治器 ,对照组不戴。苏木精—伊红染色观察髁突软骨组织形态 ,原位杂交方法检测髁突软骨TGF_β1mRNA的表达 ,并进行统计学处理。结果 ①组织学观察表明 :与对照组相比 3月组髁突软骨前份有一定程度增厚 ,中、后份变薄 ;6月组髁突软骨厚度变化与 3月组相似。②原位杂交结果表明 :对照组TGF_β1mRNA前份表达较弱 ,中、后份表达较强 ;3月组髁突软骨前中后份TGF_β1mRNA表达均增强 ,以前份最强 ;6月组髁突软骨TGF_β1mRNA表达比 3月组明显减少 ,但前份仍强于中后份。实验组之间以及实验组与对照组之间的差异均有统计学意义 (P <0 0 1)。结论 髁突软骨TGF_β1mRNA的表达强弱与颌间Ⅲ类矫形力不同的作用时间有关。 3月组TGF_β1mRNA表达较 6月组明显 ,提示

中药复方对DMN诱导的肝纤维化大鼠Ⅳ型胶原和TGF-β1蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方对二甲基亚硝胺(DNM)诱导大鼠肝纤维化后Ⅳ型胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制。方法:采用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,实验分为正常组、模型组和治疗组,观察肝组织羟脯氨酸含量,肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平及肝组织病理变化。结果:补肾柔肝方对肝纤维化有明显的治疗作用,治疗组羟脯氨酸含量要显著低于模型组,同时能使肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1(TGF-βl)蛋白表达水平下调。结论:补肾柔肝方可用于治疗肝纤维化。其机制可能与下调TGF-β1表达,抑制Ⅳ型胶原表达有关。

黄芪多糖对结直肠癌根治术后患者的影响

目的 探讨黄芪多糖对结直肠癌根治术患者术后NLR、PLR及血清外泌体TGF-β1水平的影响。方法 选取2020年1月—2021年7月确诊为结直肠癌且拟行结直肠癌根治术的60例患者,随机分为治疗组(常规术前治疗+黄芪多糖)30例和对照组(常规术前治疗)30例。比较2组患者确诊后第1天及术后第7天CRP、NLR、PLR、CEA、CA125、CA199、PNI及血清外泌体TGF-β1的水平。结果 治疗组患者术后第7天CRP、NLR、PLR、CEA、CA125、CA199及TGF-β1水平均低于对照组(均P<0.05),PNI水平高于对照组(P<0.05);确诊后第1天的各项指标以及患者基本资料等差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 黄芪多糖可以降低NLR、PLR以及血清外泌体TGF-β1的水平,改善结直肠癌根治术患者的预后。

吸入糖皮质激素对实验性肺纤维化的干预作用

为观察吸入糖皮质激素对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的干预作用,并探讨其作用机制,通过气管内注入博莱霉素复制肺纤维化模型,随机分为对照组(C组)、模型对照组(M组)和模型干预组(B组),每组10 只。B组给予每天雾化吸入布地奈德(0.5 mg/kg体重)进行干预。ELISA方法测定血及支气管肺泡灌洗液 (BALF)中转化生长因子β1(TCF—β1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平,同时观察病理、血气分析等变化。结果表明,第1周M组、B组均有肺泡炎,肺系数、BALF中性粒细胞高于对照组;第4周,B组肺纤维化程度较M组减轻(P<0.05)。血气分析与病理结果相符,第1周M组、B组氧分压均低于对照组(P<0.05),第4周B组升高。第4周B组BALF中TGF-β1水平低于M组(37.70±5.05vs68.14±13.89,P<0.01)。M组BALF中 MCP-1水平高于其他组。结论:吸入布地奈德可减轻博莱霉素诱导的肺纤维化,抗纤维化作用的机制与降低 TGF-β1和MCP-1水平或阻止其升高有关。

桃红芪术软肝煎对肝纤维化大鼠病理及TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:观察桃红芪术软肝煎抗大鼠肝纤维化的作用及对TGF-β/Smad信号通路的影响。方法:选取105只Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、对照药物组(秋水仙碱组、扶正化瘀胶囊组)、桃红芪术软肝煎组(桃红芪术低剂量组、中剂量组、高剂量组)。除空白组外,分3、6、9周3个时间点采用50%CCl41 mL/kg橄榄油溶液腹腔注射进行肝纤维化模型制作,同时进行HE染色和Masson染色观察肝纤维化的病理表现;并采用免疫组织化学法检测肝脏组织的E-Cadherin、Vimentin、转化生长因子(TGF)-β_1、Smad2蛋白表达;RT-PCR方法检测肝脏组织的E-Cadherin、Vimentin、TGF-β_1、Smad2的mRNA表达。结果:肝纤维化病理结果显示,随着造模、给药时间的延长,各给药组均能明显阻断模型大鼠肝组织纤维化进展;与模型组比较,第9周时桃红芪术高剂量组作用最明显。免疫组织化学结果显示,与模型组比较,用药各组从第3周至第9周,E-cadherin表达均较模型组表达明显增加(P<0.05),用药各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,用药各组TGF-β_1表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05),用药各组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,模型组Smad2 mRNA表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),桃红芪术低剂量组Vimentin mRNA、Smad2 mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),桃红芪术软肝煎中剂量组Smad2 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);扶正化瘀胶囊组TGF-β_1 mRNA、Vimentin mRNA表达量均较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:桃红芪术软肝煎可持续通过TGF-β/Smad信号通路调节上皮间质转化,治疗肝纤维化。

层粘连蛋白γ2诱导小鼠肝细胞AML12细胞发生上皮-间质转化

目的:观察层粘连蛋白γ2(lamininγ2,LAMC2)对小鼠肝细胞AML12分化的作用,探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路对AML12细胞LAMC2表达的影响。方法:利用小鼠LAMC2慢病毒过表达载体转染AML12细胞,通过实时荧光定量PCR(qPCR)观察LAMC2对AML12细胞分化的影响。利用TGF-β1和TGF-β1通路抑制剂(SB431542)刺激AML12细胞,明确TGF-β1信号通路对LAMC2表达的作用。最后利用小干扰RNA(siRNA)抑制AML12细胞LAMC2表达,通过qPCR和Western blot检测TGF-β1预处理AML12细胞后对其分化的影响。结果:过表达LAMC2显著上调AML12细胞间质细胞相关标志物α-SMA和1型胶原蛋白(Col1a1)mRNA水平,下调成熟肝细胞标志物白蛋白(ALB)mRNA水平。TGF-β1成功诱导小鼠肝细胞AML12细胞发生上皮-间质转化。TGF-β1上调AML12细胞Tgfbr1和LAMC2的mRNA表达水平,并且与TGF-β1的作用时间呈正相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1诱导AML12细胞发生上皮-间质转化和促进LAMC2表达的作用,皆可被TGF-β1通路抑制剂SB431542阻断。重要的是,抑制肝细胞LAMC2表达可有效阻断TGF-β1诱导AML12细胞上皮-间质转化。结论:LAMC2参与TGF-β1诱导小鼠肝细胞AML12细胞上皮-间质转化,抑制LAMC2阻断TGF-β1诱导上皮-间质转化。

地榆成分3,3'-二甲氧基逆没食子酸-4-木糖苷对NIH3T3细胞促增殖作用及其机制研究

本文探讨地榆成分3,3'-二甲氧基逆没食子酸-4-木糖苷(3,3'-dimethyl ellagic acid-4-xylycoside,DEAX)促进NIH3T3细胞增殖和迁移的作用及其分子机制。实验采用UPLC-DAD-TOF-MS对受试样品DEAX进行纯度分析和结构验证,然后采用MTS法考察不同DEAX浓度和作用时间对NIH3T3细胞增殖的影响;应用划痕法检测不同浓度的DEAX对NIH3T3细胞迁移能力的影响,并分别使用ELISA和qRT-PCR检测DEAX处理NIH3T3细胞的TGF-β1和I型胶原蛋白的蛋白表达和mRNA表达水平。结果表明DEAX能显著促进NIH3T3细胞的增殖和迁移,提高TGF-β1和I型胶原蛋白mRNA表达及蛋白表达水平。提示DEAX可通过调控TGF-β1和I型胶原蛋白mRNA及蛋白表达水平,以促进NIH3T3细胞增殖和迁移,为阐明地榆促创面愈合的物质基础及其机理提供了实验依据。

搜风愈喘方调控TGF-β1/Smad2/3信号通路干预哮喘大鼠气道重塑的作用机制

目的:探讨搜风愈喘方调控转化生长因子-β1及其信号转导蛋白Smad(TGF-β1/Smad)信号通路干预哮喘大鼠气道重塑的作用机制。方法:将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松0.000125 g/kg组和搜风愈喘方11.4 g/kg组,除正常对照组外,其余大鼠均制备慢性哮喘模型,造模成功后各组分别予蒸馏水和对应药物灌胃,连续21 d。观察各组一般情况;ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-13(IL-13)含量;HE染色、PAS染色和Masson染色观察大鼠肺组织病理改变、杯状细胞分泌黏液及气道胶原沉积情况;记录支气管管腔内周长(Pi)、气道管壁面积(WAt)、气道平滑肌层面积(WAm)、观察大鼠气道重塑情况;透射电镜观察大鼠肺组织中上皮细胞和平滑肌细胞情况;Real-time PCR法检测大鼠肺组织Tgfb1、Smad2、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,Asma)、Vegf和Il13 mRNA表达;Western blot法检测大鼠肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠存在呼吸深快、烦躁喘促等症状且BALF中TGF-β1、VEGF和IL-13含量显著升高(P<0.01);肺组织中广泛可见炎性细胞浸润、杯状细胞增生以及胶原纤维沉积;气道重塑相关指标显著升高(P<0.01);肺组织超微结构显示肺组织中上皮细胞和平滑肌细胞水肿程度严重,胞内基质溶解、变淡,胶原纤维排列紊乱,细胞器和线粒体肿胀;Tgfb1、Smad2、Smad3、Asma、Vegf和Il13 mRNA相对表达显著上调(P<0.01);TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,地塞米松0.000125 g/kg组和搜风愈喘方11.4 g/kg组大鼠呼吸平缓,精神活跃;大鼠BALF中TGF-β1、VEGF、IL-13含量显著降低(P<0.01),支气管周围炎性细胞浸润程度减轻、杯状细胞增生不明显且胶原纤维沉积情况明显改善,气道重塑相关指标明显降低(P<0.05或P<0.01);超微结构显示肺组织上皮细胞和平滑肌细胞水肿程度明显减轻,胞内基质均匀,线粒体未见明显肿胀;Tgfb1、Smad2、Smad3、Asma、Vegf和Il13 mRNA表达下调(P<0.05或P<0.01);TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:搜风愈喘方可通过减少细胞外基质合成、抑制平滑肌细胞增生和上皮间质转化(EMT),干预哮喘大鼠气道重塑,降低TGF-β1、VEGF和IL-13含量,且与抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路传导,下调TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA表达相关。