唾液腺腺泡细胞癌中NR4A3基因重排及NOR-1蛋白表达分析

目的:探讨NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达在唾液腺腺泡细胞癌中的表达及在鉴别诊断中的价值。方法:收集2020年5月—2024年1月于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科诊断的唾液腺癌119例,包括腺泡细胞癌(acinic cell carcinoma,AciCC)63例,黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)31例,分泌性癌(secretory carcinoma,SC)25例。分别使用荧光原位杂交和免疫组织化学染色检测NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达情况,采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:AciCC主要发生于大唾液腺。与MEC和SC相比,AciCC好发于女性(P=0.006)。NR4A3基因重排在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为76.2%(48/63)、0%(0/10)和0%(0/7),NOR-1蛋白表达在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为92.1%(58/63)、9.7%(3/31)和0%(0/25),差异具有统计学意义(P<0.001)。单独使用NR4A3基因重排诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为76.2%和100%。单独使用NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为92.1%和94.6%。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为96.8%和94.6%,曲线下面积为0.896,诊断价值最优。结论:AciCC好发于女性,主要发病部位为大唾液腺。NR4A3基因重排仅见于AciCC中,在诊断工作中具有100%的特异性,但敏感性较低。NOR-1蛋白表达检测具有很好的灵敏度和特异度,可作为鉴别AciCC、MEC和SC的初筛和替代方法。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达检测具有最优的诊断价值。

伴有TCF3-PBX1重排的儿童急性淋巴细胞白血病的临床特征和预后效果

目的探讨伴有TCF3-PBX1重排的儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床特征和预后效果。方法回顾性分析2012年12月至2018年12月我科收治的242初发ALL患儿的临床资料,比较TCF3-PBX1重排阳性患儿(TCF3-PBX1阳性组)与同期TCF3-PBX1重排阴性的中危组B系ALL患儿(对照组)的临床特征、治疗反应和预后效果。所有患儿均按CCLG-2008ALL方案治疗。结果本组病例TCF3-PBX1重排阳性率为4.96%,免疫表型以pre-B为主(66.67%),平衡易位(25.00%)与不平衡易位(33.33%)均较常见。初诊时TCF3-PBX1阳性组LDH水平高于对照组(P <0.05),性别、年龄、白细胞计数及中枢神经系统受累情况比较差异无统计学意义(P> 0.05)。两组诱导缓解d33骨髓象及微小残留病(MRD)水平比较差异无统计学意义(P <0.05),两组3年无事件生存率(EFS)分别为(91.72±8.03)%与(90.61±5.04)%,差异无统计学意义(P> 0.05);两组3年总生存率(OS)分别为(91.72±8.03)%与(93.81±4.33)%,差异无统计学意义(P> 0.05)。TCF3-PBX1阳性组未发现中枢神经系统复发。结论 TCF3-PBX1阳性ALL初诊时伴有LDH水平的升高,按CCLG-ALL 08方案化疗,早期治疗反应及远期预后均良好,未观察到中枢神经系统复发事件增加。

儿童TCF3-PBX1^+急性淋巴细胞白血病中微小残留病与预后的相关性

目的:评价流式细胞仪(FCM)和逆转录-聚合酶链反应(PCR)2种方法检测TCF3-PBX1+ALL微小残留病(minimal residual disease,MRD)的一致性,并评估这2种监测MRD的方法在儿童预后评价中的价值。方法:选取2008年4月到2015年4月本院收治的TCF3-PBX1+ALL患者55例,采用PCR和FCM 2种方法对55例患者的239份骨髓标本进行MRD分析。所有数据均采用SPSS软件version 16.0进行统计分析。结果:55例儿童TCF3-PBX1+ALL中,男性30例,女性25例;中位年龄5(1-14)岁。随访过程中20例复发。应用PCR和FCM进行MRD检测的结果显示,2种方法之间有较强的相关性(K=0.774,P<0.001)。在诱导治疗d 15和d 33时,PCR+和PCR-的2组患者相比,5年DFS和OS的差异均无统计学意义。在诱导治疗d 33时,FCM-(<0.01%)和FCM+(≥0.01%)2组患者的5年DFS率分别为63.9%±7.0%和0(P<0.01);5年OS率分别为66.5%±7.9%和0(P<0.01)。结合FCM和PCR的MRD监测结果,诱导治疗d 33时,FCM-/PCR-组和单阳性组(FCM+/PCR-和FCM-/PCR+)5年DFS率分别为65.4%±7.2%和25.0%±15.3%(P<0.01)。结论:TCF3-PBX1+ALL中,FCM和PCR的MRD检测结果具有良好的一致性。诱导治疗结束(d 33)FCM检测MRD+提示复发风险高。

儿童TCF3-PBX1融合基因阳性急性前体B淋巴细胞白血病临床特征及预后分析

目的探讨儿童TCF3-PBX1融合基因阳性急性前体B淋巴细胞白血病(B-ALL)的临床特征及预后因素。方法回顾性分析2011年4月至2020年12月福建省5家医院(福建医科大学附属协和医院、厦门大学附属第一医院、福建医科大学附属漳州市医院、福建医科大学附属泉州第一医院、福建省南平市第一医院)收治的1287例初诊B-ALL患儿的临床资料。根据TCF3-PBX1融合基因检测结果,将患儿分为TCF3-PBX1阳性组与TCF3-PBX1阴性组,比较两组患儿的临床特征、早期治疗反应[诱导中及诱导结束时的微小残留病(MRD)]及远期疗效[总生存(OS)及无事件生存(EFS)],采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Cox比例风险模型分析TCF3-PBX1阳性B-ALL的预后影响因素。83例TCF3-PBX1阳性ALL患儿中,62例治疗方案、危险分层、疗效评价采用中国儿童白血病协作组(CCLG)-ALL 2008方案,21例采用中国儿童肿瘤协作组(CCCG)-ALL 2015方案,比较两组疗效及严重不良事件(SAE)发生率。结果1287例B-ALL患儿中,83例(6.4%)TCF3-PBX1阳性。与TCF3-PBX1阴性组相比,TCF3-PBX1阳性组初诊白细胞计数(WBC)≥50×10^(9)/L的患儿比例更高,但诱导第15天或第19天MRD≥1%、诱导第33天或第46天MRD≥0.01%的患儿比例均更低(均P<0.05)。Cox回归单因素分析显示,诱导治疗第15天或第19天MRD≥1%、诱导第33天或第46天TCF3-PBX1定量≥0.01%为OS及EFS的危险因素(均P<0.05)。多因素分析显示,诱导治疗第15或第19 MRD≥1%为OS(HR=10.589,95%CI 1.903~58.933,P=0.007)及EFS(HR=10.218,95%CI 2.429~42.980,P=0.002)的独立危险因素;诱导治疗第33天或第46天TCF3-PBX1定量≥0.01%为EFS的独立危险因素(HR=6.058,95%CI 1.463~25.087,P=0.013),但不是OS的独立危险因素(HR=3.550,95%CI 0.736~17.121,P=0.115)。TCF3-PBX1阳性组10年EFS率及OS率分别为84.6%(95%CI 76.9%~93.1%)、89.1%(95%CI 82.1%~96.6%),与TCF3-PBX1阴性组差异均无统计学意义(均P>0.05)。80例接受规范治疗的患儿中,与接受CCLG-ALL 2008方案治疗的患儿相比,接受CCCG-ALL 2015方案治疗的患儿感染相关SAE发生率更低[0(0/21)比20.3%(12/59),χ^(2)=5.22,P=0.022],但两组的治疗相关死亡率、复发率、EFS及OS差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论TCF3-PBX1阳性儿童B-ALL总体预后良好,诱导中期MRD≥1%及诱导结束TCF3-PBX1定量≥0.01%可能为不良预后的影响因素,CCCG-ALL 2015方案在获得良好疗效的同时可减少感染相关SAE。

一株H3N2亚型猪流感病毒广东分离株的基因组序列分析

从广东省疑似流感发病猪分离到1株H3N2亚型猪流感病毒（A/Swine/Guangdong/01/2005（H3N2））,对其各个基因进行克隆与测序,并与GenBank中收录的其它猪流感、禽流感和人流感的相关基因进行比较,结果表明,HA全基因与广东2003~2004年分离的H3N2猪流感毒株的核苷酸序列同源性在99%以上,与纽约90年代末分离的H3N2人流感毒株同源性在98.5%以上;NA基因与纽约1998~2000年分离的H3N2人流感毒株的核苷酸序列同源性在99%以上;NS基因、M基因的核苷酸序列与H1N1亚型猪流感毒株A/swine/HongKong/273/1994（H1N1）的核苷酸序列同源性较高,分别为97.9%、98.4%,与美洲A/swine/Iowa/17672/1988（H1N1）的核苷酸序列同源性分别为96.7%、97.1%;其他基因的核苷酸序列与H3N2人流感毒株具有很高的同源性。因此,推测其M和NS基因来源于H1N1亚型猪流感病毒,HA、NA及其他基因均来源于H3N2亚型人流感病毒。表明此H3N2亚型猪流感病毒为H3N2亚型人流感病毒和H1N1亚型猪流感病毒经基因重排而得到的重组病毒。

TCF3-PBX1融合基因阳性成人急性淋巴细胞白血病的临床和实验研究

目的探讨TCF3-PBX1融合基因阳性的成人急性淋巴细胞白血病（ALL）的形态学、免疫学、细胞遗传学和临床特点。方法采用R显带技术进行常规核型（CC）分析，间期荧光原位杂交（FISH）技术和RT—PCR技术检测TCF3-PBX1融合基因，流式细胞术（FCM）检测细胞免疫表型；分析19例TCF3-PBX1融合基因阳性成人ALL的临床和实验率特征并进行长期随访。结果本组19例TCF3-PBX1融合基因阳性ALL占同期成人ALL的3．13％；其中L1 12例，L2 7例。细胞遗传学检测7例为t（1；19）平衡易位，10例为der（19）t（1；19）不平衡易位，2例为正常核型。9例经RT—PCR检测的病例均有TCF3-PBX1融合基因转录本，17例经间期FISH检测TCF3-PBX1融合基因均为阳性。18例行FCM检测的患者中16例为B淋系抗原表达，2例为T淋系抗原表达。17例患者有不同程度的肝、脾、淋巴结等髓外浸润。本组患者经1个疗程诱导化疗后17例获得完全缓解（CR），CR率为94．7％，中位无复发生存时间为3．2个月，中位总生存期为7．2个月。结论TCF3-PBX1融合基因阳性成人ALL有着独特的临床和实验室特点；治疗缓解率高，但短期内易复发，总生存期短，应该采取更积极的治疗以改善预后；间期双色FISH联合CC及RT—PCR可以提高TCF3-PBX1融合基因的检出率。

TCF3-PBX1阳性急性淋巴细胞白血病相关基因的筛选及生物信息学分析

目的研究比较TCF3-PBX1阳性和阴性急性淋巴细胞白血病基因表达的差异,并寻找在特定类型白血病的发生、发展过程中起重要作用的基因,为临床诊疗提供新思路。方法在公共基因芯片数据库GEO中下载GSE11877数据集,利用R编程语言,应用贝叶斯检验和倍比法(fold change)筛选差异表达基因(校正P<0.05,并且log2(fold change)>2)。利用DAVID数据库进行生物学过程功能富集分析。结果共获得207个数据集,其中TCF3-PBX1阳性组23个,阴性组184个,最终汇总获取2 890个基因的表达水平,其中27个符合条件的差异基因被选出,这些基因的功能大致分为细胞骨架结构、细胞信号转导、转录调控、细胞黏附、细胞凋亡等。功能富集分析显示BANK1、GAB1、ZAP70等8个基因在TCF3-PBX1阳性白血病发生、发展过程中可能起到关键作用。结论利用生物信息学方法能有效分析基因芯片数据并获取生物内在信息,TCF3-PBX1阳性白血病的发生是由于多种基因表达改变所致,为确定其早期诊断标志与新治疗靶位提供了新的思路。

重组HIV-1跨膜蛋白gp41在大肠杆菌中的表达

1目的 构建重组 HIV- 1SF2株跨膜蛋白 gp41基因片段的原核表达克隆并在大肠杆菌中表达。2方法 通过聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,然后用限制性内切酶将其与原核表达载体 p MAL - p2定向连接 ,构建成重组质粒转入大肠杆菌 DH5α菌中。经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE电泳分析有无重组蛋白表达。3结果 获得了重组的原核表达质粒及其表达产物。4结论 在 p MAL - p2中构建的 HIV - 1gp41重组质粒可在大肠杆菌中表达。