CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病合并纯红细胞再生障碍性贫血1例并文献复习

本文回顾性分析2021年3月山东大学附属威海市立医院收治的1例CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病(T-cell large granular lymphocyte leukemia,T-LGLL)合并纯红细胞再生障碍性贫血(Pure red cell aplasia,PRCA)患者的临床资料,并复习相关文献,以提高对CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T-LGLL合并PRCA的认知,从而减少临床中的误诊及漏诊。

抗人γδTCR单链抗体G5-4ScFv的制备及生物学功能分析

目的构建并应用原核表达体系表达能体外刺激人γδT细胞增殖的抗人γδTCR单链抗体。方法在成功建立稳定分泌鼠抗人γδTCR单克隆抗体杂交瘤细胞系G5-4的基础上,通过RT-PCR,扩增得到该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因;通过搭桥PCR法,用连接肽(Gly4Ser)3,将VH和VL连接起来,构建了抗人γδTCR单链抗体G5-4ScFv基因。将该基因插入原核表达载体pET22b(+),并在大肠杆菌TransB(DE3)中经IPTG诱导表达。通过SDS-PAGE,Werstern blot进行鉴定,并通过流式、固相扩增、细胞因子检测、杀伤检测等方法分析单链抗体G5-4ScFv的生物学功能。结果单链抗体G5-4ScFv的相对分子质量约30 ku,能与γδTCR特异结合;固相化能刺激人PBMC中γδT细胞增殖,2周时其纯度可达90%;扩增得到的γδT细胞能有效杀伤肿瘤细胞系,如Daudi细胞,并在刺激时能有效分泌IFN-γ和TGF-α。结论成功构建并表达了具有生物学活性的抗人γδTCR单链抗体G5-4ScFv,为进一步研究其用于制备肿瘤过继免疫治疗用细胞制剂奠定了基础。

HIV/AIDS患者γδ-T淋巴细胞受体基因多样性的特征研究

目的:分析HIV/AIDS患者γδ-T细胞受体(TCR-!链)多态性特征。方法:运用多重引物PCR片段荧光分析技术,对HIV/AIDS患者(n=30)的γδ-T细胞受体(TCR-!链)进行基因重排分子测定,并与健康人群比较。结果:与健康人群比较,HIV/AIDS患者的γδ-T细胞受体(TCR-!链)基因呈现单一化重组表达,其表面标志物受体的多样性出现损害。结论:HIV/AIDS患者γδ-T细胞受体TCR-!链基因多态性变化,可以作为反映机体黏膜免疫系统状态的一个药物疗效评价指标,该技术的运用为中医药治疗HIV/AIDS患者免疫系统缺陷疾病的疗效评价提供了新的方法手段。

后循环梗死患者的BAEP、BR、TCR变化的临床意义

目的探讨后循环梗死(PCI)患者脑干听觉诱发电位(BAEP)、瞬目反射(BR)、三叉神经-颈反射(TCR)三种电生理变化。方法选择50例经头颅MRI检查证实为PCI患者,分别行BAEP、BR、TCR检查。BAEP观察其波形,Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ峰波潜伏期(PL)、峰波间期(IPL)、波幅(Amp);BR观察R1、R2、R2’波平均潜伏期、波幅;TCR观察各成分潜伏期、波幅、A值。结果 50例中,BAEP检查异常45例,异常率90%,异常主要表现为Ⅲ、Ⅴ波PL延长,Ⅲ～ⅤIPL大于Ⅰ～ⅢIPL,Ⅰ/Ⅴ波幅大于1。BR检查异常42例,异常率84%,异常主要表现为R1、R2、R2’波PL延长,R2、R2’波幅下降。TCR检查仅5例异常,异常率10%,头颅MRI显示多为延髓梗死。结论 BAEP、BR两种电生理检查方法能较好反映PCI患者脑干功能异常;TCR电生理检查方法异常率低,但对延髓梗死检查有特异性。三者联合应用可提供重要参考价值。

人胎儿胸腺T细胞亚群抗原的表达及其定位──免疫组织化学研究

用免疫组织化学法和多种识别Ｔ细胞亚群的抗体，观察了１５例胎儿胸腺内Ｔ细胞亚群的抗原表达及其分布。结果表明，胸腺皮、髓质Ｔ细胞对Ｌｅｕ４抗体均呈阳性，但髓质部较强。Ｌｅｕ３ａ和Ｌｅｕ２ａ阳性细胞分布于胸腺皮质、髓质，但髓质部阳性数目少于皮质。ＡＩＧ３和ＮＫ阳性细胞均分布于髓质，皮质几乎为阴性。ＩＬ－２Ｒ细胞分布于被膜下、皮质和髓质。ＢｒｄＵ标记的细胞主要存在于皮质，特别是外皮质区。此外胸腺内还有γδＴ和αβＴ细胞。这两种细胞体积大，形状不规则，有时有小的突起，深染。它们主要分布在皮髓质交界处、髓质和被膜下。本文还对上述各种Ｔ细胞抗原的表达及其可能的相互关系进行了讨论。

树突状细胞刺激γδT细胞扩增诱导干细胞移植时GVL研究

目的 :研究γδT细胞的体外生存期 ,抗白血病活性及可能引起的移植物抗宿主反应 (GVHD) ,为自体及异体移植后输注γδT细胞诱导移植物抗白血病反应作前期基础研究。方法 :对移植患者采集物用GM -CSF +IL - 4进行培养 ,使其分化和扩增为树突状细胞 (DC) ;然后用DC和细胞因子IL - 2刺激其CD4+T细胞扩增后 ,协同DC共同刺激γδT细胞扩增 ,进而用MTT比色法和CFU -GM集落培养研究其功能。结果 :γδT细胞能在体外长期大量扩增。扩增的γδT细胞对多种白血病细胞株具有杀伤作用 ,而对自体及异体CFU -GM集落形成能力无显著影响。结论 :γδT细胞可望用于造血干细胞移植后的过继免疫治疗 ,值得进一步做有关临床研究。

焦磷酸溴代醇诱导γ9δ2T淋巴细胞产生的实验研究

目的探讨焦磷酸溴代醇(BrHPP)诱导人外周血单核细胞产生γ9δ2T淋巴细胞的方法,同时与抗γδTCR诱导产生的细胞进行比较,并用IL-2诱导的细胞作为对照,以提供一种新的诱导γ9δ2T淋巴细胞的方法,为γ9δ2T淋巴细胞的研究应用提供有效的细胞。方法分离健康人外周血单核细胞,计数后加到细胞培养瓶培养,每瓶先加入IL-2,1000IU/ml,然后按不同浓度加入BrHPP、抗γδTCR等,至培养第10天用流式细胞仪检测3种方法培养细胞γ9δ2TCR的表达。结果培养10天3种细胞γ9δ2TCR的表达分别为BrHPP:61.6%;anti-γδTCR:10.7%;IL-2:0.6%。结论 BrHHP可以诱导出高表达γ9δ2的T淋巴细胞。

T细胞抗原受体γδ^+T细胞在小鼠暴发型肝炎模型中的作用

目的:T细胞抗原受体(TCR)γδ+T细胞是一种表型和功能独特的T淋巴细胞亚群。通过检测TCRγδ+T细胞在3型鼠肝炎病毒(MHV-3)诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的比例变化,初步探讨TCRγδ+T细胞在该疾病模型中的作用。方法:通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导暴发型肝炎,利用流式细胞术来检测小鼠外周血、肝脏及脾脏TCRγδ+T细胞的比例变化,并进行统计学分析。结果:BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,全部在3～6天内死亡,小鼠外周血、脾脏及肝脏中的TCRγδ+T细胞占CD3+T细胞的比例均在感染后48小时发生显著升高(P<0.05)。MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中TCRγδ+T细胞的比例显著升高,与疾病严重程度呈正相关。结论:TCRγδ+T细胞可能在小鼠暴发型肝炎发生发展中发挥重要作用,为进一步研究小鼠暴发型肝炎的发病机制提供更充分的理论基础。

共表达TcRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究

目的:构建共表达TCRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体Ad.TCRα12.2-IRES-Vβ7.1,并研究其杀伤肝癌细胞的作用。方法:提取外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,用RT-PCR的方法得到TCRα12-2基因。TCRVβ7.1基因由pCDN3.1-Vβ7.1扩增获得,将这两个基因以IRES相连克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中。穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出可同时表达TCRα12-2和TCRVβ7.1的重组腺病毒。然后提取病毒基因组DNA,对外源目的基因进行PCR鉴定;病毒感染宫颈癌细胞(HELA),48小时后提取细胞总RNA,通过RT-PCR鉴定目的基因表达;最后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达。对鉴定正确的病毒进行大量扩增并测定滴度。用MTT比色法检测Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞HEPG2和BEL-7402的杀伤作用。结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,RT-PCR和流式细胞仪检测表明目的基因可以有效的表达。Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和Ad-GFP感染组。结论:成功构建了双表达TCRα12-2和TCRVβ7.1基因的重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,且其感染后的PBMC可有效的杀伤肝癌细胞。

利用γδ TCR四聚体检测分析外周血中CD14+CD277+单核-巨噬细胞的比例及其与治疗转归的关系

目的 探讨外周血中CD14+单核-巨噬细胞在γδ T细胞识别磷酸化抗原中的作用及其与治疗转归的关系.方法 应用3种γδ TCR四聚体对肺结核患者外周血和新生儿脐带血单个核细胞进行流式染色,分析各类抗原提呈细胞( APC)所占比例,根据临床病例分析其与治疗转归的关系.结果 在结核患者外周血和脐带血中同时与CD277抗体、γδ TCR四聚体结合比例最大且结合力最强的细胞是CD14+单核-巨噬细胞,其百分率中位数( P50)值在抗结核治疗1个月时达到最高峰值,综合临床病症结果显示该时段患者病情明显好转.结论 CD14+单核-巨噬细胞在γδ T细胞识别磷酸化抗原的各类提呈细胞群中所占比例最大,为深入探讨γδ T细胞限制性识别磷酸化抗原机制及同时参与固有免疫与适应性免疫提供了实验资料.

雷公藤多苷对IgAN大鼠外周血γδT细胞分泌TGF-β1功能的影响

目的:研究雷公藤多苷对IgA肾病(IgAN)大鼠外周血γδT细胞分布及表达转化生长因子β1(TGF-β1)功能的影响。方法:复制IgAN大鼠模型,并予雷公藤多苷干预治疗,同时给予泼尼松对照,运用流式细胞仪检测各组用药前后外周血γδT细胞比率、放射免疫法检测血清IgA水平;以抗TCRγδ单克隆抗体(mAb)固相法,体外选择性地扩增γδT细胞。在体外培养的条件下,以抗CD3抗体刺激48h后,用ELISA法测定培养体系中TGF-β1的表达。结果:雷公藤多苷能抑制血清IgAN外周血γδT细胞与血清IgA的升高,同时还能抑制γδT分泌TGF-β1的过度分泌。结论:通过降低血清IgAN外周血γδT细胞与血清IgA水平,同时抑制γδT分泌TGF-β1的过度分泌,可能是雷公藤多苷治疗IgAN的作用机制之一。