EGTA对SLET细胞TCR/CD3复合物介导的[Ca^(2+)]i反应的影响

目的 :证实SLE患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号传导异常有关以及EGTA对其影响 ,探讨SLE的发病机理。方法 :用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用EGTA干预后 ,分别粘附细胞仪连续观察 10minT细胞 [Ca2 + ]i的变化 ,并评价 [Ca2 + ]i反应与CD3分子的相关性。结果 :正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 .10 5 ) ;SLE患者高峰值、平台值T细胞的 [Ca2 + ]i反应明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 0 1) ;加入EGTA后二者 [Ca2 + ]i反应有显著差异 :二者的T细胞CD3阳性率无差异 (P =0 .6 6 5 )。结论 :SLE患者T细胞TCR/CD3介导的信号转导途径存在异常 ,且不受EGTA的影响 ,可能是贮存库 [Ca2 + ]i释放的增加所致。

SLE患者T细胞TCR/CD3介导[Ca^(2+)]i反应与InsP_3生成量的相关性

目的 :研究SLE患者T细胞功能异常是否与TCR/CD3复合物介导的生物化学信号传导异常有关 ,以及这种信号转导异常与InsP3 生成量的相关性。方法 :用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞并制备其悬液 ,用流式细胞术测定CD3+细胞的阳性率。将抗CD3单抗与羊抗鼠IgG相交联刺激T细胞后 ,用粘附细胞仪连续观察 10min ,观察T细胞胞内游离Ca2 + 的变化。用流式细胞术 ,检测正常人和SLE患者T细胞上CD3+ 表达的阳性率是否有差异。用InsP3 放射受体试剂盒检测InsP3 的生成量。结果 :①用尼龙柱吸附除去B细胞得到T细胞悬液 ,用流式细胞术检测CD3+ 细胞的阳性率占90 %以上。②正常人和SLE患者T细胞的 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 .10 5 ) ,SLE患者T细胞的 [Ca2 + ]i反应的高峰值、平台值明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1)。③正常人和SLE患者T细胞上CD3+ 表达的阳性率没有差异 (P =0 .6 6 5 )。④二者InsP3 的生成量无差异 (P =0 .5 37)。结论 :SLE患者T细胞TCR/CD3介导的 [Ca2 + ]i反应存在异常 ,这种异常与InsP3

系统性红斑狠疮T细胞TCR/CD3介导的[Ca^(2+)]i反应与InsP_3生成量的相关性研究

目的 研究SLET细胞是否存在TCR CD3复合物介导的异常生物化学信号转导 ,及其异常与三磷酸肌醇(Inositol1,4 ,5 triphosphate,InsP3)生成量的相关性。方法 用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞并制备其悬液 ,用流式细胞术测定悬液的CD3+ 细胞阳性率 90 %以上。将抗CD3单抗与羊抗鼠IgG相交联刺激T细胞后 ,用粘附细胞仪连续观察10min ,观察T细胞胞内游离Ca2 + 的变化。用流式细胞术检测正常人和SLET细胞上CD3+ 表达的阳性率。用InsP3放射受体试剂盒检测InsP3的生成量。结果 ①正常人和SLET细胞的 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 .10 5 ) ,SLET细胞的 [Ca2 + ]i反应的高峰值、平台值明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 0 1)。②正常人和SLET细胞上CD3+ 表达的阳性率没有差异 (P =0 .6 6 5 )。③二者InsP3的生成量无差异 (P =0 .5 37)。结论 SLET细胞TCR CD3介导的 [Ca2 + ]i反应存在异常 ,且与InsP3的生成量无关。

系统性红斑狼疮患者T细胞TCR/CD3复合物介导的信号传导研究

目的 :证实SLE患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号转导异常有关。方法 :用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用Thapsigargin和EGTA干预后 ,分别用粘附细胞仪连续观察 1 0minT细胞 [Ca2 +]i的变化 ,并评价[Ca2 +]i反应与CD3分子和InsP3 生成量的相关性。结果 :正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 +]i反应的基准值相似 (P =0 1 0 5) ;SLE患者T细胞的 [Ca2 +]i反应高峰值、平台值明显高于正常对照 (P <0 0 0 1 ,P <0 0 0 1 ) ;加入Thapsigargin后二者 [Ca2 +]i反应无显著差异 ,而加入EGTA后二者 [Ca2 +]i反应有显著差异 ;二者的T细胞CD3阳性率和InsP3 生成量无差异 (P =0 665 ,P =0 537)。结论 :SLE患者T细胞TCR CD3介导的信号转导途径存在异常 ;SLE患者T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号途径异常所致。

SLE患者T细胞TCR/CD3复合物介导的[Ca^(++)]i反应与患者临床特征相关性的研究

为研究SLE患者原发的T细胞功能异常与TCR/CD3复合物介导生物化学信号转导异常相关,及与其临床特征的相关性。用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞悬液,用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞,粘附细胞仪连续观察10min,观察T细胞犤Ca++犦i的变化,并分析其与患者的临床特征相关性。发现正常人和SLET细胞的[Ca++]i反应的基准值相似(P=0.105),SLE患者T细胞高峰值和平台值均明显高于正常对照(P<0.001,P<0.001),且与患者临床特征无关。

Thapsigargin对SLE患者T细胞TCR/CD3复合物介导的[Ca^(2+)]i反应的影响

目的 : 证实SLE患者T细胞功能异常是否与TCR CD3复合物介导的 [Ca2 +]i反应异常有关 ,以及 [Ca2 +]i反应异常的原因。方法 : 用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相关联刺激T细胞 ,并用Thapsigargin干预后 ,分别用粘附细胞仪连续观察 10minT细胞 [Ca2 +]i的变化 ,并评价 [Ca2 +]i反应与CD3分子表达的相关性。结果 : 正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 +]i反应的基准值相似 (P =0 .10 5 ) ;SLE患者T细胞的[Ca2 +]i反应高峰值、平台值明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 0 1) ;加入Thapsigargin后二者 [Ca2 +]i反应无显著差异 ,二者的T细胞CD3阳性率无差异 (P =0 .6 6 5 )。结论 : SLE患者T细胞TCR CD3介导的[Ca2 +]i反应存在异常 ,并且这种异常不是因为胞内Ca2 +库排空后跨膜Ca2 +内流不同所致。

系统性红斑狼疮T细胞TCR/CD3信号转导异常的研究进展

T细胞受体/CD3复合体(TCR/CD3)与抗原呈递细胞(APC)表面的组织相容复合物(MHC)-抗原肽发生交连是T细胞特征性识别抗原,活化细胞、传导信号并发生抗原特异免疫反应的重要起始途。系统性红斑狼疮T细胞TCR/CD3信号传导异常是T细胞免疫功能障碍的基础。本文就系统性红斑狼疮T细胞TCR/CD3信号转导异常的研究进展作一综述。

抗TCR／CD3单克隆抗体研究应用的现状与展望（一）抗TCR／CD3单克

ＴＣＲ／ＣＤ３复合体是Ｔ细胞功能和特异性的主要调节者，抗ＴＣＲ／ＣＤ３单克隆抗体（抗ＴＣＲ／ＣＤ３ＭｃＡｂ）能模拟其重量性配体，并与之结合，然而这些抗体导致Ｔ细胞呈现两个相反的效应─—Ｔ细胞的活化和抑制，且这两方面在基础研究及临床中都被广泛应用。本文首先归纳概述了抗ＴＣＲ／ＣＤ３ＭｃＡｂ及其体内的免疫抑制机制，并对其在自身免疫病和器官移植领域中的应用进行了综述。

抗TCR/CD3单克隆抗体的免疫增强作用及其应用

抗ＴＣＲ／ＣＤ３单克隆抗体（抗ＴＣＲＭｃＡｂ，抗ＣＤ３ＭｃＡｂ）对Ｔ细胞具有强活化作用，已成为当今最常用的Ｔ细胞活化剂之一。本文从免疫增强角度着重归纳了抗ＴＣＲ／ＣＤ３ＭｃＡｂ激活Ｔ细胞的条件、机制和效应。

TCR和CD3ε在αβ和γδΤ细胞上表达的比较研究——TCR/CD3复合物内2个TCR异二聚体结合3条CD3ε链的证据

关于TCR/CD3复合物的化学计量测定法的公认模式是每个复合物由1或2个TCR异二聚体与2个CD3ε相结合.它们主要建立在分解细胞膜复合物等生化研究的基础上.最近定量研究αβ和γδ淋巴细胞的CD3ε和TCR链的相关比例是在未变性条件下进行.定量流式细胞测定法(QFCM)研究表明αβ和γδPBL表达的CD3ε链分别为β-和δ-链的1.56和1.52倍.相应地,CD3ε分别与TCR-α,TCR-β,TCR-γ及TCR-δ的比值表现在三株多克隆细胞株和Jurkat细胞上均非常接近于l.50.这些结果清楚地表明αβ以及γδT细胞表达的CD3ε大约为每一种TCR链的1.50倍.这强烈地显示αβ和γδ的TCR/CD3复合物由2个TCR异二聚体与3个CD3ε链相结合(或这种结合比例的成倍增大).此外,本研究显示γδSPBL表达的TCR和CDε链1.90倍于αβPBL(-δ对一β).进一步发现,CD4^+αβPBL的TCR-β和CD3ε.表达较高,同时在CD8^+和CD8^-的γδPBL上均有TCR-δ和CD3ε表达.这些结果证明,CD8^+或CD8-γδPBL,CD4^+aβPBL和CDS8^+αβPBL表达的TCR/CD3复合物水平是依次减少的.

抗CD3mAb诱导TN细胞向过渡型CD8单阳性细胞分化

本实验观察了在IL-7维持TN细胞生长的体外细胞培养系统中,抗CD 3 mAb对TN细胞分化的作用。发现抗CD 3 mAb在体外能诱导TN细胞分化产生CD 4^-CD 8^+及部分CD 4^(lo)CD 8^+细胞。由于多数CD 8^+细胞为TCRβ^-,故抗CD 3 mAb诱导产生的CD 4^-CD 8^+细胞是DN向DP分化的不成熟过渡状态细胞。抗TCR βmAb也能诱导CD 4^-CD 8^+细胞产生,但其诱导分化能力弱于抗CD3 mAb。在体外细胞培养条件下,抗CD 3mAb诱导的DN→DP转化伴有IL-2 Rα表达下调,并且IL-7诱导的TCRβ分子表达也受到抑制。当TN细胞在IL-7条件下培养3天后,抗CD 3 mAb便失去诱导TN细胞分化的能力,表明抗CD 3 mAb诱导的TN细胞分化可能是通过细胞表面pre-TCR复合体进行的。

SLE患者T细胞TCR/CD3复合物介导的信号转导研究

为证明SLE患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号转导异常有关。用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用Thapsigargin和EGTA干预后 ,用分别粘附细胞仪连续观察 10minT细胞 [Ca2 + ]i的变化 ,并评价 [Ca2 + ]i反应与CD3分子、InsP3 生成量和患者临床特征的相关性。结果显示 :正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 10 5 ) ;SLE患者高峰值、平台值T细胞的 [Ca2 + ]i反应明显高于正常对照 (P <0 0 0 1,P <0 0 0 1) ;加入Thapsigargin后二者 [Ca2 + ]i反应无显著差异 ,而加入EGTA后二者 [Ca2 + ]i反应有显著差异 ;二者的T细胞CD3阳性率和InsP3 生成量无差异 (P =0 6 6 5 ,P =0 5 37) ;且 [Ca2 + ]i异常反应与患者的疾病活动性无关。这些结果提示 :SLE患者T细胞TCR/CD3介导的信号转导途径存在异常 ;SLE患者T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号途径异常所致。

Thapsigargin及EGTA对SLE T细胞TCR/CD_3复合物介导的[Ca^(2+)]i反应的影响

目的 证实SLE患者T细胞功能异常是否与TCR/CD3 复合物介导的 [Ca2 + ]反应异常有关 ,以及 [Ca2 + ]i反应异常的原因。方法 用CD3 单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用Thapsigargin和EGTA干预后 ,分别粘附细胞仪连续观察 10minT细胞 [Ca2 + ]i的变化 ,并评价 [Ca2 + ]i反应与InsP3 生成量的相关性。结果 正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 + ]i反应的基准值相似(P =0 10 5 ) ;SLE患者T细胞的 [Ca2 + ]i反应高峰值、平台值明显高于正常对照 (P <0 0 0 1,P <0 0 0 1) ;加入Thapsigargin后二者[Ca2 + ]i反应无显著差异 ,而加入EGTA后二者 [Ca2 + ]i反应有显著差异 ;二者的T细胞InsP3 生成量无差异 (P =0 5 3 7)。结论 SLE患者T细胞TCR/CD3 介导的 [Ca2 + ]i反应存在异常 ,这种 [Ca2 + ]i反应异常是储存库内Ca2 +

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的 通过分析TCRVβ基因片段选择性扩增 ,了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病 (GVHD)患者中的表达特点 .方法 采用RT -PCR扩增 10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCRVβ 2 4个基因片段 ,分析其TCRVβ基因的表达情况 ,GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性 .结果 经 2 4个Vβ引物所分别进行的RT -PCR检测TCRVβ各亚家族基因的表达情况 ,发现 10例病人外周血与正常人表达 2 4个Vβ亚家族有明显的不同 ,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建 ,仅表达 5～ 2 2个亚家族基因 ;9例GVHD患者外周血仅表达 2～ 8个TCRVβ亚家族 ,其中 7例均表达Vβ3.对 6例GVHD患者的基因扫描显示 ,均存在克隆性T细胞生长 .结论 移植后病人外周血淋巴细胞TCRVβ基因片段部分受抑制 ,部分基因片段呈选择性扩增 .GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达 。

SLE患者T细胞PKA活性及患者血清因子对PKA活性的影响

目的 研究SLE患者T细胞功能异常是否与T细胞CA/cAMP/PKA信号转导途径存在异常有关 ,探讨SLE的发病机理。方法 用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞悬液 ,用流式细胞术测定CD3 阳性细胞 90 %以上 ,用CD3 单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联和rIL - 1α共同刺激T细胞 2 4h ,用RT -PCR检测IL - 2和IL - 2RmRNA的表达 ,证实T细胞是否活化。用PKA检测试剂盒检测T细胞PKA总体活性变化 ,用SLE血清或含不同浓度IFN -α的完全培养基和正常人T细胞培养 2 4h ,用上述方法激活T细胞 ,分别测量T细胞PKA的总体活性。结果 SLE患者T细胞活化后PKA总体活性是下降的 ,SLE患者血清免疫复合物及不同浓度的IFN -α均不能使正常人T细胞的PKA总体活性下降。结论 SLE患者T细胞CA/cAMP/PKA信号传导途径存在异常 ,SLE患者T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号途径异常所致。

关于αβ和γδΤ细胞受体识别抗原性质的讨论

自从第8届国际免疫学会在布达佩斯召开以来,一些关于T细胞识别的重要争议问题已经得到或至少是部分得到答案.但遗留下来的其它问题希望将在第9届大会上提出来讨论.

T细胞在激活诱导凋亡中的信号途径

淋巴细胞AICD是免疫系统维持稳定的一种重要机制。现在已知的可引发AICD的途径包括CD3/TCR途径、CD2途径、CD47途径、CD30途径。它们最终将信号传递至两条凋亡途径,引起细胞死亡。第一条是死亡受体信号传导途径,其中主要包括Fas/PasL途径、Apo-TRAIL等TNF受体超家族起始的途径。另外,Bcl-2家族构成的线粒体途径可能参与一定的调节作用。