CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病合并纯红细胞再生障碍性贫血1例并文献复习

本文回顾性分析2021年3月山东大学附属威海市立医院收治的1例CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T细胞大颗粒淋巴细胞白血病(T-cell large granular lymphocyte leukemia,T-LGLL)合并纯红细胞再生障碍性贫血(Pure red cell aplasia,PRCA)患者的临床资料,并复习相关文献,以提高对CD4^(-)CD8^(-)TCRγδ^(+)T-LGLL合并PRCA的认知,从而减少临床中的误诊及漏诊。

TCRγδ^+CD^(3+)CD^(4-)CD^(8-)双阴性T细胞在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠慢性病毒性肝炎发病中的作用

目的本研究拟探讨在MHV-3诱导的慢性病毒性肝炎模型小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞在T淋巴细胞中比例变化以及其主要表面分子标记的变化。方法取60只C3H/Hej小鼠,腹腔注射10pfu MHV-3;应用流式细胞仪三色或四色荧光分析法分别检测小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞在T淋巴细胞中的比例及其CD25、CD28、CD30和CD44表达的变化。结果 MHV-3诱导的慢性病毒性肝炎小鼠各时间点外周血和脾脏TCRγδ+DNT在T淋巴细胞中的比例较对照组显著升高(P<0.05);在感染后10天达到最高峰:外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞占T淋巴细胞的比例分别为4.8±1.5%和4.5±1.3%;模型小鼠外周血和脾脏TCRγδ+DNT细胞的表型均为TCRγδ+CD3+CD4-CD8-CD25-CD28-CD30-CD44+。结论感染MHV-3后C3H/Hej小鼠体内TCRγδ+DNT细胞的数量增加,提示TCRγδ+DNT细胞参与了MHV-3诱导的小鼠慢性病毒性肝炎的发生和发展过程。

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因克隆性重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者检测外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体gamma基因(TCRγ)克隆性重排的意义。方法对235例NHL患者进行了254例次血浆游离DNA提取,通过globin基因确定血浆游离DNA存在,通过PCR方法检测IgH(FR3A/VLJ H)和TCRγ(TVG/TJX)基因克隆性重排。并与病理组织DNA及外周血单个核细胞DNA基因克隆性重排结果同时进行对比观察。结果初发及复发患者220例中219例均成功提取到血浆游离DNA。B-NHL患者140例中IgH重排阳性118例(84.3%),TCRγ重排阳性1例(0.7%);T-NHL患者80例中TCRγ重排阳性44例(55%),IgH重排阳性2例(2.5%),IgH和TCRγ重排同时阳性4例(5%);34例临床缓解病例中仅3例(8.8%)提取出血浆游离DNA,但IgH和TCRγ重排均阴性。56例NHL患者血浆游离DNAIgH或TCRγ基因重排结果与病理组织结果一致(P>0.05)。67例NHL患者血浆游离DNA与外周血单个核细胞DNAIgH和TCRγ基因重排结果显示,血浆游离DNA阳性率高于单个核细胞DNA(P<0.05)。结论采用血浆游离DNA检测NHL患者IgH和TCRγ基因克隆性重排具有较高的临床诊断价值,与病理标本高度一致;标本取材简单方便,对NHL的治疗反应监测也有重要参考价值。

昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白及其生物学功能的初步鉴定

目的建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白技术平台并鉴定其表达产物的生物学功能。方法用搭桥PCR获得γ9Fc和δ2(OT3)Fc基因片段,构建成pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫sf9细胞,表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白;Western blot鉴定TCRγ9/δ2-Fc蛋白表达位置;胞内流式细胞仪检测γ9Fc和δ2(OT3)Fc两基因表达效率;蛋白G亲和层析后,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度;激光共聚焦扫描显微镜技术和生物传感器技术检测了TCRγ9/δ2-Fc蛋白与SKOV3细胞和MNS蛋白的结合特性。结果成功构建pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc表达载体,经鉴定发现TCRγ9/δ2-Fc蛋白在sf9细胞内表达,但γ9Fc和δ2(OT3)Fc两基因的表达效率有较大差异。纯化得到一定纯度的TCRγ9/δ2-Fc蛋白,并且具有与SKOV3细胞和MNS蛋白结合的特性。结论成功建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白的技术平台,表达产物TCRγ9/δ2-Fc可以在体外模拟TCRγδ识别抗原的特性。

非霍奇金淋巴瘤IgH和TCRγ基因重排临床分析

目的探讨骨髓IgH和TCRγ基因重排检测对NHL诊断及骨髓浸润的临床价值。方法收集确诊的NHL患者55例,对其骨髓IgH和TCRγ基因重排检测结果进行统计分析,并与骨髓活检进行对照分析。结果 B细胞淋巴瘤(B-NHL)IgH基因重排总阳性率42.86%,T细胞淋巴瘤(T-NHL)TCRγ基因重排总阳性率84.62%。骨髓IgH和TCRγ基因重排阳性往往提示骨髓浸润,提示更差的分期及预后。结论 IgH和TCRγ基因重排作为分子标志,对NHL的诊断和检测骨髓浸润及指导治疗、提示预后有重要的临床应用价值。

VR1012-TCRγV_1真核表达载体的构建

目的:构建含TCRγV1基因的重组表达载体。方法:从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取总RNA,反转录合成 cDNA克隆入VR1012质粒;转化感受态细菌E.ColiDH5α,以通用引物PCR扩增筛选阳性克隆,并双酶切鉴定;小 量提取质粒进行测序。结果:测序结果证实重组载体中的外源片段序列与GenBank中TCRγV1序列完全相符。结 论:成功构建了含TCRγV1基因的重组表达载体。

pcDNA3/TCRγV_1真核表达载体的构建及表达

目的 :构建含TCRγV1基因的真核表达质粒并检测其在小鼠骨骼肌中的表达。方法 :从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取RNA ,用RT PCR法扩增含BamHⅠ与HindⅢ酶切位点的TCRγV1基因序列 ,将TCRγV1基因PCR产物插入pcDNA3后转化到大肠杆菌DH5α ,阳性克隆酶切鉴定后测序分析。大量提取质粒 ,股四头肌注射法免疫小鼠 ,RT PCR法检测小鼠肌肉中TCRγV1mRNA的表达。结果与结论 :pcDNA3/TCRγV1重组质粒构建成功 ,并能在小鼠骨骼肌中表达。

NK/T细胞淋巴瘤的病理、免疫组化表型及TCRγ基因重排的检测

目的 探讨NK/T细胞淋巴瘤 (NK/TCL)的临床病理学特征和免疫组化表型及TCRγ基因重排的检测 ,为诊断和鉴别诊断提供依据。方法 收集 30例NK/TCL及其临床资料 ,用免疫组化S P法标记LCA ,CD5 6 ,CD3,CD45RO ,CD2 0及CK抗体和聚合酶链式反应扩增方法检测 12例NK/TCL的TCRγ基因重排。结果 NK/TCL组织学特点为多形性淋巴细胞增生 ,大片的凝固性坏死和血管浸润 ;免疫组化表达LCA、CD3、CD45RO和CD5 6阳性 ,CD2 0、CK阴性 ;12例NK/T细胞淋巴瘤TCRγ基因重排的阳性率为 6 6 .7%(8/ 12 )。结论 NK/TCL是一组异质性肿瘤 ,结合其组织学特点和免疫组化表型可做出诊断 ;NK/TCL超过半数存在TCRγ基因重排 ,表明大部分为T细胞的单克隆性增生。

Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析

目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排,比较多重引物与单对引物扩增效果。结果两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性条带,测序并比对证实为TCRγ基因重排;与胚系基因比对发现,重排后TCRγ基因存在删除和增加的碱基序列;多重引物扩增产物中出现阳性条带的组合,其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCRγ基因重排,重排序列体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式PCR扩增TCRγ基因重排,扩增效果与单对引物一致。

淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排的多重引物分析

目的探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义。方法引物分为两组扩增淋巴瘤DNA,PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析(SSCP)检测。结果两组多重引物PCR的阳性率高于通用引物阳性率;B细胞淋巴瘤组织中存在一定比例克隆性TCRγ基因生重排;部分淋巴瘤中存在两种TCRγ基因重排。结论多重引物和降落式PCR适于淋巴瘤TCRγ基因重排研究,可提高检出率、判断淋巴瘸组织中不同TCRγ基因重排情况;SSCP可排除假阳性。

TCRγδT淋巴细胞和母胎免疫调节的关系

妊娠是一复杂的生理过程,妊娠早期母胎界面的免疫反应状态决定妊娠结局。TCRγδT淋巴细胞具有识别绒毛滋养细胞表达的人类白细胞抗原G和E,并通过某种机制调节Th1/Th2型细胞因子的平衡偏移及免疫效应细胞活性等作用,而这些因素是参与母胎界面免疫反应的关键环节,认为TCRγδT淋巴细胞在妊娠早期的母胎免疫调节中发挥重要作用。

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞TCRαβ和TCRγδ的表达研究

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞TCRαβ和TCRγδ的表达,评价慢性乙型肝炎患者的细胞免疫状态,并初步探究随病情发展TCRαβ和TCRγδ表达率的变化趋势。方法流式细胞术测定38例慢性乙型肝炎、14例乙型肝炎肝硬化患者淋巴细胞中TCRαβ、TCRγδ的表达率。结果TCRαβ在慢性乙型肝炎患者中的表达率明显低于正常对照组(P<0.01)。慢性乙型肝炎各组之间TCRαβ的表达率比较:重度组和乙型肝炎肝硬化组表达率显著低于轻度组(P<0.01,P<0.01),乙型肝炎肝硬化组显著低于中度组(P<0.05)。而TCRγδ在慢性乙型肝炎各组之间比较以及与正常对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞中TCRαβ表达能力显著低于正常人,并随病情进展,其表达能力逐渐降低,提示慢性乙型肝炎患者外周血T细胞免疫功能下降。

特发性红皮病患者石蜡包埋组织TCRγ基因重排分析

目的:检测特发性红皮病患者石蜡包埋皮肤组织T细胞受体(TCR)γ基因重排。方法:提取特发性红皮病患者石蜡包埋组织DNA 28份,利用BIOMED-2系统TCRγ引物组合进行TCRγ基因重排检测,以28例银屑病患者石蜡包埋组织作为阴性对照。结果:特发性红皮病患者石蜡包埋组织TCRγ基因重排阳性率为7.1%,对照组阳性率为0。结论:部分TCRγ基因重排阳性特发性红皮病患者可发展成T细胞淋巴瘤。

T—NHL TCRγ多重引物基因重排PCR参数优化

目的优化PCR多个参数分析福尔马林固定石蜡包埋标本中T细胞非霍奇金淋巴瘤（T—NHL）的TCRγ多重引物基因重排，以建立PCR扩增中不同变量性能改变的重要意义。方法优化PCR循环参数，采用优化的PCR方法检测53例T—NHL的TCRγ基因重排率。结果53例T—NHL中，采用优化的TCRγ多重引物克隆性TCRγ基因重排检测率为62．3％。结论实验性的调整PCR参数对FFPE组织的克隆分析，可能会有很大的价值。

TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白体内抗肿瘤效果研究

目的:研究TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白在体内抗肿瘤效果。方法:通过同位素99mTc标记技术观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内的显像和分布,观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc对荷瘤裸鼠肿瘤生长和生存期的影响。结果:在荷瘤裸鼠体内99mTc-TCRγ9/δ2(OT3)-Fc与肿瘤组织有明显的结合,并且其可抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长速度,延长小鼠生存期。结论:本研究初步证实TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内有一定的抗肿瘤效果,为肿瘤靶向性抗体治疗提供了新的思路。

T细胞淋巴瘤TCRγV_1重排基因真核表达载体的构建

目的 构建含TCRγV1重排基因的真核表达质粒。方法 用PCR法扩增含XbaI与BglII酶切位点的TCRγV1基因序列 ,对VR10 12载体及TCRγV1基因PCR产物经双酶切 ,用连接酶将两者连接并转化到大肠杆菌DH5α ,对重组质粒经序列测定 ,称VR10 12 /TCRγ。结果 已构建的质粒VR10 12 /TCRγ经序列测定含有完整的TCRγV1基因片段。结论 VR10 12 /TCRγ表达载体的构建为基因治疗淋巴瘤奠定了基础。