基因扫描分析B-CLL的TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性

利用RT-PCR扩增12例B-CLL外周血单个核细胞的TCR Vβ基因24个亚家族的互补决定区3(CDR3),以了解T细胞的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果显示:12例B-CLL共表达13个TCRVβ亚家族T细胞,每例病人仅表达3-9个Vβ亚家族,主要为Vβ2,Vβ3,Vβ6,Vβ7,Vβ17或Vβ19,9例病人的一个或两个Vβ3家族T细胞里克隆性生长。提示B-CLL选择性地表达TCR VβT细胞,大部分B-CLL出现克隆性增殖T细胞,这可能是对白血病细胞相关抗原的免疫反应。

妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒素B对成年子代CD3^+TCR Vβ8^+T细胞的影响

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。孕鼠自然分娩后子代鼠生长至成年,流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞;并观察成年子代鼠再次给予SEB时胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的应答变化。结果妊娠期母鼠给予SEB可导致雌、雄性成年子代鼠胸腺CD3+TCR Vβ8+T细胞的比例(雌性:1.760,雄性:1.098),较对照组的(雌性:2.714,雄性:2.088)明显减少(P<0.05),其外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的变化与胸腺中类似。PBS组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后其胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞较同窝对照组明显减少(P<0.05);而SEB组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后与其同窝PBS对照组比较,胸腺中CD3+TCR Vβ8+T细胞无变化(P>0.05),但外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞则明显增加(P<0.05)。结论妊娠期母鼠给予SEB改变其成年子代大鼠CD3+TCR Vβ8+T细胞对再次SEB刺激的应答方式。

一例弥漫性大B淋巴细胞瘤组织样本T细胞TCR α/β CDR3谱序的初步分析

目的 FQ-PCR溶解曲线法初步分析1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者组织标本中T细胞TRAV和TRBV基因各家族CDR3谱序。方法提取4例淋巴结增生组织和1例弥漫性大B淋巴细胞瘤患者的mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因的CDR3区,利用FQ-PCR技术了解其克隆性,溶解曲线单峰家族基因测序分析CDR3区基因和氨基酸序列。结果该例淋巴瘤患者淋巴结组织T细胞FQ-PCR溶解曲线分别在TRAV10、TRAV18和TRBV6、TRBV24家族中出现单峰表现,其CDR3区氨基酸序列为CAGANFGNEKLTFGTGTCR、CAPSFSGYSTLTFGKGTM、CASSERGQPQHFGDGTCR、CATTPAGEYYGYTFGSGT-CR,4例增生淋巴结组织FQ-PCR溶解曲线均为寡峰和多峰。结论该例淋巴瘤组织中FQ-PCR溶解曲线单峰家族的T细胞可能为高应答T细胞,本实验为进一步研究淋巴溜的免疫应答机制和个体化治疗提供了研究基础。

孕鼠接触葡萄球菌肠毒素B对子代新生鼠TCR Vβ8^+T细胞的影响

目的:观察孕鼠接触葡萄球菌肠毒素B(SEB)对其子代新生鼠胸腺及外周血TCR Vβ8^+T细胞的影响。方法:在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB(SEB组),同时设立注射磷酸盐缓冲溶液对照组。孕鼠自然分娩后获取出生后0~5 d的子代新生鼠胸腺及外周血,流式细胞仪检测其TCR Vβ8^+T细胞比例。结果:与对照组比较,SEB组出生后0~3 d的新生鼠胸腺中CD4^+Vβ8^+T细胞比例均减少(P<0.05~P<0.01),出生后4~5 d 2组差异均无统计学意义(P>0.05);出生后0~5 d,SEB组胸腺中CD8^+Vβ8^+T细胞比例均低于对照组(P<0.05~P<0.01);出生后0~5 d,SEB组CD4^+Vβ8^+及CD8^+Vβ8^+T细胞的绝对数均较对照组明显减少(P<0.01)。新生鼠出生后0~5 d,SEB组外周血CD4^+Vβ8^+T细胞比例均较对照组明显减少(P<0.01);CD8^+Vβ8^+T细胞比例亦均较对照组减少(P<0.05~P<0.01);出生后0~5 d,SEB组外周血CD4^+Vβ8^+及CD8^+Vβ8^+T细胞绝对数均较对照组明显减少(P<0.01)。结论:妊娠期大鼠接触SEB可减少子代新生鼠胸腺及外周血TCR Vβ8^+T细胞,并保留至成年期。

乙肝疫苗无应答者CD4^+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征的研究

目的:研究乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化特征,分析乙肝疫苗有应答者和无应答者TCR Vβ基因单克隆改变的差异性。方法:采用多引物PCR技术扩增80例乙肝疫苗接种者CD4+T细胞TCR Vβ基因22个家族的CDR3区基因片段,对PCR产物分别应用琼脂糖凝胶电泳和基因扫描两种方法检测。结果:80例乙肝疫苗接种者中有58例产生抗体,有22例未产生抗体。TCR Vβ基因单克隆改变主要集中在Vβ2、Vβ8、Vβ9、Vβ11和Vβ17五个家族上,乙肝疫苗无应答组这五个Vβ基因单克隆改变频率明显低于乙肝疫苗有应答组(P<0.01或P<0.05)。结论:CD4+T细胞TCR Vβ基因克隆化改变是影响机体对乙肝疫苗免疫应答效果的重要因素之一。

恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理检测分析

目的探讨B细胞性淋巴瘤中Ig基因重排和T细胞性淋巴瘤中TCR基因重排的特点。方法回顾性分析213例恶性淋巴瘤和24例淋巴反应性增生组织样本,利用3730毛细血管电泳对提取的DNA进行PCR扩增,检测B细胞性淋巴瘤中Ig基因重排和T细胞性淋巴瘤中TCR基因重排。结果 B细胞性淋巴瘤中IgHA的总阳性率为43.21%,IgHB的总阳性率为29.63%,IgHC的总阳性率为30.25%,IgHD的总阳性率为16.67%,IgHE的总阳性率为3.09%,IgLκA的总阳性率为42.59%,IgLκB的总阳性率为23.46%,IgLλA的总阳性率为25.93%,IgH(A+B+C+D+E)+IgLκ(A+B)+IgLλA的总阳性率为88.27%;T细胞性淋巴瘤中TCRB-A的总阳性率为31.37%,TCRB-B的总阳性率为58.82%,TCRB-C的总阳性率为23.53%,TCRG-A的总阳性率为60.78%,TCRG-B的总阳性率为21.57%,TCRD的总阳性率为29.41%,TCRβ+TCRγ+TCRδ的总阳性率为78.43%。结论Ig基因重排和TCR基因重排分别对B细胞性和T细胞性淋巴瘤的诊断具有重要价值。

非霍奇金淋巴瘤IgH和TCRγ基因重排临床分析

目的探讨骨髓IgH和TCRγ基因重排检测对NHL诊断及骨髓浸润的临床价值。方法收集确诊的NHL患者55例,对其骨髓IgH和TCRγ基因重排检测结果进行统计分析,并与骨髓活检进行对照分析。结果 B细胞淋巴瘤(B-NHL)IgH基因重排总阳性率42.86%,T细胞淋巴瘤(T-NHL)TCRγ基因重排总阳性率84.62%。骨髓IgH和TCRγ基因重排阳性往往提示骨髓浸润,提示更差的分期及预后。结论 IgH和TCRγ基因重排作为分子标志,对NHL的诊断和检测骨髓浸润及指导治疗、提示预后有重要的临床应用价值。

T细胞受体工程化T细胞的流式检测方法的建立

[目的]建立特异性识别乙肝病毒表面抗原的T细胞受体工程化T细胞(T cell receptor-engineered T cells, TCR-T)的流式检测方法。[方法]将3个检测抗体分别进行梯度稀释(死细胞指示剂FVS780:0.020~10.000μg/mL、鼠抗人的CD3抗体:0.039~20.000μg/mL和结合TCR的多肽-MHC复合物蛋白Dextramer-PE:1∶5至1∶2 560倍稀释)后,分别与同一TCR-T细胞共孵育,得出最佳使用浓度。两个不同分析人员采用此方法分别同时对3批TCR-T细胞样本进行3次检测,计算TCR阳性T细胞比例的CV值考察方法的中间精密度。同一分析人员分别检测2批TCR-T细胞的6个平行样本,计算TCR阳性T细胞比例的CV值考察方法的重复性。经组合染色后的TCR-T细胞采用荧光减一对照细胞样本进行梯度稀释得到12个不同TCR阳性T细胞比例的样本,检测后分析结果得到检测限和定量限。对同一工艺生产的3批TCR-T细胞的检测结果进行统计学分析。[结果]确定最佳抗体使用浓度分别为:FVS780:0.313μg/mL,CD3抗体:2.500μg/mL,PE-Dextramer:1∶20稀释。中间精密度考察3批TCR-T细胞检测结果的CV分别为3.2%、7.4%和2.2%。重复性考察2批TCR-T细胞检测结果的CV分别为2.1%、2.2%。3批产品批内差异统计的P值分别为0.706、0.706和0.09,均>0.05;批间差异统计的P值为0.171,>0.05。[结论]建立了特异性、精密度(CV<10%)和灵敏度(定量限为0.85%,检测限为0.45%)均良好的识别乙肝病毒表面抗原的T细胞受体工程化T细胞的流式检测方法。

乙型肝炎病毒抗原诱导T细胞受体Vβ基因亚家族特异性扩增与多样性

目的对乙型肝炎疫苗注射前后及ＨｅｐＧ２２２１５上清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ感染淋巴细胞，Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族表达特征与多样性，为研究识别机制提供依据。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹扫描。结果乙肝疫苗注射后Ｖβ６、１４增高，ＨｅｐＧ２２２１５上清感染后Ｖβ６、１５增高。结论Ｖβｂ为两种抗原共同识别亚家族。Ｖβ１４。