血浆游离DNA IgH和TCRγ基因克隆性重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者检测外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体gamma基因(TCRγ)克隆性重排的意义。方法对235例NHL患者进行了254例次血浆游离DNA提取,通过globin基因确定血浆游离DNA存在,通过PCR方法检测IgH(FR3A/VLJ H)和TCRγ(TVG/TJX)基因克隆性重排。并与病理组织DNA及外周血单个核细胞DNA基因克隆性重排结果同时进行对比观察。结果初发及复发患者220例中219例均成功提取到血浆游离DNA。B-NHL患者140例中IgH重排阳性118例(84.3%),TCRγ重排阳性1例(0.7%);T-NHL患者80例中TCRγ重排阳性44例(55%),IgH重排阳性2例(2.5%),IgH和TCRγ重排同时阳性4例(5%);34例临床缓解病例中仅3例(8.8%)提取出血浆游离DNA,但IgH和TCRγ重排均阴性。56例NHL患者血浆游离DNAIgH或TCRγ基因重排结果与病理组织结果一致(P>0.05)。67例NHL患者血浆游离DNA与外周血单个核细胞DNAIgH和TCRγ基因重排结果显示,血浆游离DNA阳性率高于单个核细胞DNA(P<0.05)。结论采用血浆游离DNA检测NHL患者IgH和TCRγ基因克隆性重排具有较高的临床诊断价值,与病理标本高度一致;标本取材简单方便,对NHL的治疗反应监测也有重要参考价值。

非霍奇金淋巴瘤IgH和TCRγ基因重排临床分析

目的探讨骨髓IgH和TCRγ基因重排检测对NHL诊断及骨髓浸润的临床价值。方法收集确诊的NHL患者55例,对其骨髓IgH和TCRγ基因重排检测结果进行统计分析,并与骨髓活检进行对照分析。结果 B细胞淋巴瘤(B-NHL)IgH基因重排总阳性率42.86%,T细胞淋巴瘤(T-NHL)TCRγ基因重排总阳性率84.62%。骨髓IgH和TCRγ基因重排阳性往往提示骨髓浸润,提示更差的分期及预后。结论 IgH和TCRγ基因重排作为分子标志,对NHL的诊断和检测骨髓浸润及指导治疗、提示预后有重要的临床应用价值。

NK/T细胞淋巴瘤的病理、免疫组化表型及TCRγ基因重排的检测

目的 探讨NK/T细胞淋巴瘤 (NK/TCL)的临床病理学特征和免疫组化表型及TCRγ基因重排的检测 ,为诊断和鉴别诊断提供依据。方法 收集 30例NK/TCL及其临床资料 ,用免疫组化S P法标记LCA ,CD5 6 ,CD3,CD45RO ,CD2 0及CK抗体和聚合酶链式反应扩增方法检测 12例NK/TCL的TCRγ基因重排。结果 NK/TCL组织学特点为多形性淋巴细胞增生 ,大片的凝固性坏死和血管浸润 ;免疫组化表达LCA、CD3、CD45RO和CD5 6阳性 ,CD2 0、CK阴性 ;12例NK/T细胞淋巴瘤TCRγ基因重排的阳性率为 6 6 .7%(8/ 12 )。结论 NK/TCL是一组异质性肿瘤 ,结合其组织学特点和免疫组化表型可做出诊断 ;NK/TCL超过半数存在TCRγ基因重排 ,表明大部分为T细胞的单克隆性增生。

淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排的多重引物分析

目的探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义。方法引物分为两组扩增淋巴瘤DNA,PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析(SSCP)检测。结果两组多重引物PCR的阳性率高于通用引物阳性率;B细胞淋巴瘤组织中存在一定比例克隆性TCRγ基因生重排;部分淋巴瘤中存在两种TCRγ基因重排。结论多重引物和降落式PCR适于淋巴瘤TCRγ基因重排研究,可提高检出率、判断淋巴瘸组织中不同TCRγ基因重排情况;SSCP可排除假阳性。

Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析

目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排,比较多重引物与单对引物扩增效果。结果两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性条带,测序并比对证实为TCRγ基因重排;与胚系基因比对发现,重排后TCRγ基因存在删除和增加的碱基序列;多重引物扩增产物中出现阳性条带的组合,其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCRγ基因重排,重排序列体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式PCR扩增TCRγ基因重排,扩增效果与单对引物一致。

PCR技术检测儿童急性淋巴细胞白血病TcRγ基因重排

应用ＰＣＲ技术检测２０例急性淋巴细胞白血病ＴｃＲγ基因（ＶγＩ，Ｊγ＿（１－２））重排，其扩增产物的长度为４００ｂｐ左右。初治和复发的１３例患儿中有７例检出ＴｃＲγ基因重排，其中复发的３例患儿均有ＴｃＲγ基因重排，完全缓解的７例患儿中有４例检出ＴｃＲγ基因重排，此４例患儿目前继续维持治疗，尚无复发之临床表现。ＴｃＲγ基因重排几乎存在于全部的Ｔ－ＡＬＬ和大部分Ｂ－ＡＬＬ中，其稳定性强。对ＴｃＲγ基因重排的检测可用于协助急淋患儿的诊断及长期监测。进一步研究对指导治疗，判断预后和发病机理的研究有重要意义。

TEL-AML1阳性儿童急性淋巴细胞白血病IgH及TCRγ基因重排的研究

t（12；21）是儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中最常见的染色体易位，占B-ALL的16％-36％^[1]；该易位导致12p13上的TEL基因与21q22上的AML1基因融合，形成TEL-AML1融合基因。已有研究证实单独TEL-AML1融合基因并不能导致白血病发生，提示还存在其他协同因素^[2]。

T—NHL TCRγ多重引物基因重排PCR参数优化

目的优化PCR多个参数分析福尔马林固定石蜡包埋标本中T细胞非霍奇金淋巴瘤（T—NHL）的TCRγ多重引物基因重排，以建立PCR扩增中不同变量性能改变的重要意义。方法优化PCR循环参数，采用优化的PCR方法检测53例T—NHL的TCRγ基因重排率。结果53例T—NHL中，采用优化的TCRγ多重引物克隆性TCRγ基因重排检测率为62．3％。结论实验性的调整PCR参数对FFPE组织的克隆分析，可能会有很大的价值。

应用半重叠TCR γ特异性引物的PCR方法检测淋巴细胞白血病

采用更加敏感的半重叠式TCRγ特异性引物的PCR方法，对28例ALL初治、CR及BMT患儿进行检测，并用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行DNA提取，将PCR结果进行比较。结果表明：消化煮沸法用于微量标本的DNA提取优于酚抽提法，28例ALL患儿中16例检出TCRγ特异性条带，MRD组18例，阳性检出12例，其中免疫分型标记为B细胞型的4例，占25％，免疫标记为T细胞型者全部出现TCRγ阳性条带。并对该引物的语系特异性及双克隆重排问题进行了理论探讨。

骨髓凋亡蛋白抑制因子survivin检测在非霍奇金淋巴瘤中的临床意义

目的探讨survivin mRNA在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓中的表达及临床意义。方法多聚酶链反应(PCR)方法检测21例NHL患者骨髓单个核细胞(MNCs)中克隆性免疫球蛋白重链(IgH)、T细胞受体γ(TCRγ)基因重排。逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测21例NHL患者骨髓及7例术后实体癌患者的外周血单个核细胞的survivin mRNA的表达,12例正常骨髓作为正常对照。骨髓常规检查21例NHL患者淋巴瘤细胞骨髓浸润情况。结果克隆性IgH和(或)TCRγ基因重排在21例NHL患者中检出率为71.4%(15/21),其中IgH为52.4%(11/21),TCRγ为47.6%(10/21)。21例NHL患者survivin mRNA的阳性率为81.0%(17/21),7例术后实体癌患者的外周血单个核细胞仅有1例为弱阳性,12例正常骨髓单个核细胞不表达survivin mRNA。21例NHL患者骨髓常规检查的阳性率为19.0%(4/21)。其中,1例survivin mRNA检测阴性患者,克隆性IgH和(或)TCRγ基因重排阳性,而3例克隆性IgH和(或)TCRγ基因重排阴性患者,survivin mRNA检测阳性,其余病例均同时阴性或阳性。IgH和(或)TCRγ基因重排阳性与survivin mRNA表达存在正相关性。结论survivin mRNA在恶性淋巴瘤患者骨髓中的表达检测也可作为诊断微小残留病变及骨髓侵犯的辅助指标。而survivin mRNA表达与淋巴瘤患者疗效及生存预后关系尚待进一步累积病例及随访。

老年急性淋巴细胞白血病分子生物学改变的初步观察

目的 研究老年急性淋巴细胞白血病 (ALL)的分子生物学特征。 方法 应用多聚酶链反应技术(PCR)检测了 16例老年ALL患者的bcr/abl融合基因、TCRγ基因重排 (TCRγRA)以及IgH基因重排 (IgHRA)。 结果 16例患者中IgHRA 11例 ,TCRγRA 4例 ,两类基因重排均阴性 1例 ;bcr/abl融合基因阳性 9例 ,阳性率 5 6 2 5 %。 结论 老年ALL以B ALL为多 ,bcr/abl融合基因阳性率较高 ,可能是其治疗效果较差的原因之一。

皮下脂膜炎性T细胞性淋巴瘤的临床特征及分子生物学特点

目的 :对皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤 (SPTCL)的临床特征、病理、免疫表型及分子生物学特点进行研究。方法 :临床观察及实验室、病理检查研究SPTCL的临床、病理特点 ,免疫表型通过用LCA、CD3、UCHL、L2 6单抗进行石蜡免疫过氧化物酶染色、用αβTCR、γδTCR抗体进行冷冻切片免疫过氧化物酶的染色 ,用识别V1δ、V2δ 的抗体进行γδTCR亚型分析 ,PCR检测SPTCL患者TCR基因重排。结果 :7例SPTCL患者均有皮下结节、高热、体重下降 ,5例出现嗜血细胞综合征 ,7例SPTCL患者均有电介质、酸碱平衡失调及酶学检查的异常。 7例SPTCL患者的病理均在脂肪组织内见大量异型淋巴细胞浸润 ,均表达LCA、CD3、UCHL ,不表达L2 6。 4例SPTCL患者中有 3例表达γδTCR ,1例表达αβTCR ,3例γδTCR患者均表达V2 +δ ,4例有 3例出现TCRγ基因重排。结论 :SPTCL大多病情严重 ,肿瘤细胞来源于T细胞系的皮肤淋巴细胞组织相关的V2 +δ 细胞 ,可以出现TCRγ基因重排。

牛痘样水疱病样皮肤T细胞淋巴瘤

目的:根据3例种痘样皮肤T细胞淋巴瘤(hydroa vacciniforme-likeCTCL)患者的临床表现、治疗及转归,进一步探讨该病的诊断和治疗。方法:分析3例hydroa vacciniforme-like CTCL患者的临床资料、实验室检查、治疗及转归。结果:3例患者均为幼年发病,皮损开始出现在曝光部位,反复发作,数月或数年后进展性或逐渐蔓延至非曝光部位,且伴有发热等全身症状。皮损组织病理显示真皮内致密的淋巴样细胞浸润达真皮下层甚至脂肪层,常侵犯血管;免疫组化组织病理显示浸润细胞以CD8(+)细胞为主;T细胞受体γ基因(TCRγ基因)呈单克隆性重排;EB(Epstein-Barr)病毒原位杂交(+)。结论:该病与EB病毒感染有关。该病预后差,但干扰素治疗可改善症状。

非霍奇金淋巴瘤基因重排的检测及其临床意义

目的探讨免疫球蛋白重链(IgH)及T细胞受体γ(TCRγ)基因重排在非霍奇金淋巴瘤(nonHodgkin’slymphoma,NHL)临床诊断中的应用。方法用聚合酶链反应(PCR)技术对58例B细胞淋巴瘤(BNHL)、15例T细胞淋巴瘤(TNHL)、不能确诊为NHL的标本5例及10例良性淋巴组织增生标本进行IgH及TCRγ基因重排的检测。结果58例B细胞淋巴瘤标本中有IgH基因重排为47例,有3例TCRγ基因重排。15例T细胞淋巴瘤中TCRγ基因重排为11例,未见有IgH基因重排。5例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排。10例良性淋巴组织反应性增生病例中,IgH及TCRγ基因重排均为阴性。IgH及TCRγ基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义(P<0.05)。结论用PCR方法检测IgH及TCRγ基因重排对NHL及其疑难病例有重要的诊断价值。