TCRVβ8.4基因转染人PBMC对肝癌细胞杀伤活性的研究

目的 :探讨转染hTCRVβ 8 4基因后健康人PBMC的免疫学特性及其对起源于乙肝病毒的肝癌细胞株BEL 74 0 2杀伤活性的改变。方法 :将hTCRVβ 8 4基因克隆至真核表达载体pcDNA3 1( )上 ,并转染健康人PBMC ,流式细胞术检测转染后PBMC中TCRVβ8 4蛋白表达 ,乳酸脱氢酶释放活性法检测重组质粒转染后PBMC对癌细胞BEL 74 0 2的杀伤活性。 结果 :TCRVβ8 4在基因转染后淋巴细胞中表达显著增高 ;与BEL 74 0 2共培养后 ,基因转染组CD3+ TCRVβ8 4T细胞增殖明显高于对照组 ;BEL 74 0 2G刺激后免疫细胞活化 ,表达CD12 2的细胞数量增多 ,表达CD19(B细胞活化的标志 )的B细胞增加 ;重组质粒转染后 ,PBMC对肝癌细胞BEL 74 0 2杀伤活性增强 ;透射电镜观察发现 ,重组质粒转染的PBMC使BEL 74 0 2凋亡。结论 :hTCRVβ 8 4基因修饰可显著增强淋巴细胞在超抗原BEL 74 0 2刺激下的增殖及免疫细胞活化 ,基因修饰后T淋巴细胞杀伤活性明显增强。

TCRVβ7．1基因转染对肝癌细胞刺激的外周血单个核细胞ERK信号通路和IFN-γ表达的影响

目的:研究肝癌特异性识别基因TCRVβ7.1表达重组体转染外周血单个核细胞(PBMCs)后对T细胞细胞因子表达的影响和信号通路的激活作用。方法:以肝癌特异性T细胞受体Vβ7.1转染PBMCs,流式细胞仪检测TCRVβ7.1表达量;Western blotting检测ERK1/2表达量及磷酸化水平(p-ERK)的改变;用ELISA法检测白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)的表达量。结果:TCRVβ7.1基因转染健康人PBMCs并得到有效表达,转染TCRVβ7.1基因的PBMCs与肝癌细胞共培养后ERK蛋白磷酸化水平明显高于未转染组(P<0.01)。p-ERK1/2水平与T细胞激活有关。ELISA结果表明,转染PBMCs细胞与肝癌细胞共培养后,IFN-γ水平明显高于未转染组,而IL-4无明显改变。结论:TCRVβ7.1转染PBMCs与肝癌细胞共培养后,ERK信号通路被激活,IFN-γ表达增高。

TCR Vβ7基因转染PBLs的表达及抗肝癌的作用

目的 :将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后研究肝癌细胞的生物学作用。 方法 :用RT PCR的方法扩增出TCRVβ7基因 ,克隆到表达载体pLXSN上 ,用脂质体转染的方法 ,将重组载体导入淋巴细胞 ,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞 ,淋巴细胞用流式细胞仪测表型和用激光共聚焦检测TCRVβ7 1基因的表达 ,肝癌细胞作超微结构分析。 结果 :TCRVβ7基因表达的跨膜蛋白显著增多 ,而且淋巴细胞增多 (P <0 0 5 ) ,肝癌细胞出现凋亡。结论 :TCRVβ7亚家族具有识别肝癌抗原的作用并能激活T细胞的杀伤肝癌细胞的功能。

TCRVβ7.1基因修饰T细胞对乳腺癌细胞杀伤作用的研究

目的:观察TCRVβ-1基因转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性的影响。方法:脂质体包裹pcDNA3.1Vβ7.1后转染健康人PBMC,流式细胞仪检测pcDNA3.1Vβ7.1基因表达,改良MTT法检测TCRVβ-1基因转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性。结果:TCRVβ-1基因转染可显著增加正常人PBMC该基因表达,转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性有显著性差异。结论:用TCR基因修饰可明显提高正常人PBMC对乳腺癌细胞杀伤作用。