老年人急性白血病T细胞受体VγI-Jγ基因重排分析

目的为研究老年人急性白血病分子生物学特点及临床意义。方法提取34例老年人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、9例老年人急性淋巴细胞白血病(ALL)及10名正常献血员DNA标本,应用PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排,对阳性的PCR产物进行SSCP分析。结果34例老年人ANLL中有16例(47.1%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,老年人ANLL TCRVγI-Jγ基因重排检测阳性率显著高于非老年人ANLL组(P<0.025)。9例老年人ALL中有7例(77.8%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,其中3例(33.3%)存在寡/亚克隆重排,老年人ALL寡/亚克隆重排阳性率显著高于非老年人ALL组(P<0.05)。10例正常献血员PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排均为阴性。TCRVγI-Jγ基因重排阳性老年人ANLL完全缓解率为25.0%(4/16),显著低于重排阴性老年人ANLL组(61.1%)(P<0.05)。结论应用PCR/SSCP方法分析老年人急性白血病TCRγ重排可作为疗效和预后判断的新指标。老年人急性白血病寡/亚克隆重排检测阳性率显著高于非老年人组可能是导致其疗效差的一个重要因素。

荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

目的 :构建荧光定量PCR检测TCRVγI Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线 ,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础。方法 :对TCRVγI Jγ基因进行序列分析 ,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针。提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA ,经PCR扩增 ,产物纯化后与pMD 18 TVector连接 ,转化到大肠杆菌DH5α ,筛选得到标准品的质粒。结果 :重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长 ,表明TCRVγI Jγ基因已成功克隆。以 10 0 ～ 10 -5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增 ,Ct值分别为 2 1 0 8、2 4 3 4、2 7 5 3、3 0 5 8和 3 3 2 5。统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系 ,回归系数为 0 998。结论 :所构建的TCRVγI Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好 ,准确可靠 。

T细胞受体基因VγⅠ—Jγ重排检测在血液病中的临床意义

目的本研究采用PCR联合单链构象多态性技术(single strand conformation polymorphism,SS-CP)分析检测TCRVγⅠ—Jγ基因重排在常见血液病的中的表达,结合临床资料初步探讨TCRVγⅠ—Jγ基因重排在常见血液病的中的表达差异和临床意义。方法应用PCR对115例血液病的骨髓进行TCRVγⅠ—Jγ基因重排检测,阳性者行SSCP分析。结果⑴TCRVγⅠ-Jγ基因重排在急性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、急性非淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、特发性血小板减小性紫癜、免疫相关性血细胞减少症和系统性红斑狼疮的阳性率分别为77.78%、71.43%、21.62%、33.33%、77.78%、66.67%、50.00%和100%。⑵急性淋巴细胞白血病部分缓解、完全缓解患者与初治患者积分有显著差异(P值分别为0.013、0.02)。在SSCP中,TCRVγⅠ-Jγ基因重排在不同血液病中表达不同,恶性肿瘤患者表现为单克隆带/有优势寡亚克隆带,非恶性肿瘤患者表现为无优势寡亚克隆带/多克隆带,两者差异显著(P<0.01)。结论(1)TCRVγⅠ-Jγ基因重排检测对淋巴系统恶性肿瘤的诊断有辅助作用。(2)急性非淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常综合征也存在TCRVγⅠ-Jγ基因重排。(3)PCR-SSCP检测TCRVγⅠ-Jγ基因重排对良、恶性血液病的鉴别有一定意义。

重度苯中毒患者T细胞受体Vβ亚家族TRECs的分析

目的检测重度苯中毒患者外周血23个TCRVβ-Dβ1TRECs的存在情况,进一步了解重度苯中毒患者胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法分别在5×104和1×104个外周血单个核细胞水平下,采用半巢式对12例重度苯中毒患者和10例正常人的23个TCRVβ-Dβ1TRECs进行扩增。结果在5×104和1×104细胞水平下,苯中毒组检出各TCRVβ-Dβ1TRECs数均显著低于对照组(P<0.05)。在5×104细胞水平时,对照组检测到23个TCRVβ-Dβ1TRECs,苯中毒组仅检测到17个TCRVβ-Dβ1TRECs,其中12个TCRVβ-Dβ1TRECs检出率与对照组相比明显降低(P<0.05)。结论本研究提供了苯中毒患者外周血中各TCRVβ-Dβ1TRECs存在情况。苯中毒患者TCRVβ-Dβ1TRECs检出数量和检出率低于正常人,提示重度苯中毒患者胸腺近期输出功能存在部分缺陷和低下的情况。