TDL复合物提高人脐静脉内皮细胞基因转染效率的体外实验

目的研究HIV-1Tat蛋白转导域/质粒DNA/Liposome(TDL)复合物介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,pEGFP)在体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的转染效率。方法将质粒DNA与Tat肽以不同的电荷比混匀,再加入2μl Lipofectamine2000制成TDL复合物。琼脂糖凝胶电泳分析质粒DNA与Tat肽的结合力;荧光显微镜和流式细胞仪观察TDL复合物与lipofectamine2000介导基因在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果;MTT法检测TDL复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响。结果TDL复合物组琼脂糖凝胶电泳未发现明显DNA条带。TDL复合物的转染率优于单用Lipofectamine2000(P<0.05)。Tat/DNA电荷比为8∶1时,TDL复合物的转染效率最高。TDL复合物组对细胞活性均无明显影响。结论TDL复合物可明显提高基因在体外培养人脐静脉内皮细胞的转染效率,该方法可作为提高基因转染效率的有效手段之一。

Tat/DNA/Liposome复合物促基因转染的体外实验

目的:探讨HIV-1 Tat蛋白转导域/质粒DNA/Liposome(TDL)复合物提高增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)在体外培养肝癌细胞株HepG2中转染效率的可行性。方法2?l Lipofectamine 2000加入以不同电荷比混匀的Tat肽与质粒DNA溶液中制成TDL复合物。琼脂糖凝胶电泳法观察Tat肽与质粒DNA的结合力;荧光显微镜和流式细胞仪观察TDL复合物、HIV-1 Tat肽与Lipofectamine 2000介导质粒DNA体外转染HepG2的效果;MTT法分析质粒DNA转染对HepG2活性的影响。结果琼脂糖凝胶电泳显示,各TDL复合物组均未发现明显DNA条带。TDL复合物的转染率优于单用Lipofectamine 2000(P<0.05),HIV-1 Tat肽未发生基因转染。DNA/Tat电荷比为1 8时,TDL复合物的转染效率最高。与空白组比较,各TDL复合物组、HIV-1 Tat肽组对细胞活性无明显影响(P>0.05),Lipofectamine 2000组降低细胞活性(P<0.05)。结论:TDL复合物可明显提高体外基因转染HepG2效率,该方法为提高非病毒载体的转染效率提供一个新策略,可能成为肝癌基因治疗的有效手段之一。