肿瘤睾丸抗原OY-TES-1氨基端截短蛋白及其多克隆抗体的制备

目的获得原核表达的OY-TES-1氨基端截短蛋白(OY-TES-1-N),并制备其多克隆抗体。方法扩增编码OY-TES-1-N 268个氨基酸(A6-R273)的cDNA序列;将PCR产物插入原核表达载体pMAL-C2,构建重组质粒,并转化DH5α菌;通过蓝白斑筛选、DNA测序筛出阳性菌;在优化条件下用IPTG对阳性菌进行诱导表达MBP/OY-TES-1-N融合蛋白;上Amyloseresin亲和层析柱纯化,行Western blot鉴定。以融合蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,经活化琼脂糖微球纯化后,采用ELISA法及Western blot法分别检测抗血清的效价和多克隆抗体的特异性。结果成功诱导表达出MBP/OY-TES-1-N融合蛋白。以该蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,抗体效价为1∶1 000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合。结论成功地表达并纯化了MBP/OY-TES-1-N融合蛋白,并制备了特异性多克隆抗体。

TE融合基因调控Wnt/β-catenin通路促进前列腺癌细胞转移

[目的]研究TE融合基因对前列腺癌DU145细胞转移的影响。[方法]将前列腺癌DU145细胞随机分为3个实验组:siRNA NC实验组、siRNA T2E实验组与KYA1797K实验组。采用MTT实验检测DU145细胞的增殖速度,Transwell实验检测DU145细胞的侵袭能力,流式细胞术检测DU145细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹方法分析DU145细胞中Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。[结果]与siRNA NC实验组比较,siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞增殖能力下降(1.73±0.35 vs 1.02±0.22 vs 0.91±0.27,P<0.05);siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞侵袭数量下降(167.28±12.89 vs 78.21±9.26 vs 82.33±10.33,P<0.05);siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞凋亡率增加(8.25%±0.89%vs 28.82%±2.56%vs 29.46%±1.83%,P<0.05);siRNA T2E以及KYA1797K实验组的DU145细胞Wnt 3α、β-catenin蛋白水平下调(P<0.05)。[结论]抑制TE融合基因表达后,DU145细胞的增殖速度与侵袭数量降低,凋亡率增加,该机制与TE融合基因调节Wnt/β-catenin途径相关。