人腺病毒41型(HAdV-41)在293TE细胞中的形态发生研究

为研究人腺病毒41型(Human adenovirus type 41,HAdV-41)的形态发生过程,将其接种于293TE细胞,收获细胞制作超薄切片并染色,通过透射电子显微镜进行观察。结果显示HAdV-41可以通过非网格蛋白陷窝、网格蛋白陷窝及直接穿入的方式进入细胞;细胞微绒毛可参与HAdV-41进入细胞的过程;进入细胞的HAdV-41包裹于囊泡内、溶酶体内或游离于细胞浆内;HAdV-41最终以游离状态靠近细胞核核孔,并释放核糖核蛋白(Ribonucleoprotein,RNP)进入细胞核;子代HAdV-41最先出现在细胞核内;在HAdV-41复制过程中出现纤维丝状包涵体、致密包涵体及条索状致密包涵体,包涵体结构与HAdV-41的形态发生过程有关;最终,HAdV-41以裂解细胞方式释放。本研究揭示了HAdV-41形态发生的部分过程,进一步丰富了HAdV-41的生物学信息。

自噬在顺铂诱导食管癌TE1细胞死亡中的作用

目的观察顺铂联合自噬特异性增强剂beclin1和特异性抑制剂3-MA对食管癌细胞增殖抑制的影响,探讨自噬在顺铂诱导的食管癌TE1细胞死亡中的作用。方法 MTT法检测空白对照组、顺铂组、顺铂分别联合beclin1和3-MA组对食管癌TE1细胞增殖抑制作用的影响;Western blot法检测顺铂对食管癌TE1各组细胞中bcelin1蛋白表达的影响;MDC荧光染色检测各组细胞内自噬囊泡数量的变化;流式细胞仪检测各组细胞中细胞周期和凋亡的改变。结果 MTT检测各组细胞的增殖抑制率分别为:1.06%,31.59%,18.93%,51.44%。DDP组能有效抑制TE1细胞的增殖。与单独使用DDP组相比,beclin1+DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显降低(P<0.01);3-MA+DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显增高(P<0.01);Western blot检测各组细胞中beclin1蛋白表达量分别为0.319±0.029,1.175±0.06,1.537±0.076,0.91±0.047(P<0.01);荧光显微镜观察beclin1+DDP组中MDC标记的自噬荧光强度最高,细胞质内出现了明显的绿色荧光;FCM检测细胞周期分布结果显示,各组细胞中G0/G1期细胞比例分别为(44.82±0.437)%,(56.25±0.624)%,(27.553±0.085)%,(66.48±0.638)%;各组细胞中S期细胞比例分别为(34.85±0.235)%,(24.417±0.607)%,(51.8±0.721)%,(19.167±0.666)%。各组细胞的凋亡率分别为(1.237±0.015)%,(4.813±0.025)%,(1.32±0.01)%,(6.117±0.035)%(P<0.01)。结论顺铂可以诱导食管癌TE1细胞自噬和凋亡;反应性的自噬活性增强可能与顺铂耐药的形成有关,自噬水平的下调可能增加了食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,提示监测及调控肿瘤细胞的自噬水平可能为逆转食管癌顺铂耐药提供新的思路。

小窝蛋白-1和E-钙黏蛋白在食管癌TE1细胞系中的表达及其意义

目的:检测小窝蛋白-1(Cav-1)和E-钙黏蛋白(E-cad)在食管癌TE1细胞系中的表达水平,探讨Cav-1在食管癌转移中可能的作用及机制。方法:化学合成针对Cav-1基因3个不同靶点的siRNA(Cav-1 siRNAl,Cav-1 siRNA2和对照siRNA),分别转染食管癌TE1细胞系,以未转染细胞为空白对照,转染对照siRNA细胞为阴性对照。采用Western blot法检测RNA干扰后TE1细胞中Cav-1和Ecad的表达情况;Transwell方法检测各组细胞的迁移和侵袭能力。结果:Western blot检测结果提示,与空白对照组比较,Cav-1siRNA使食管癌TE1细胞系中Cav-1表达水平降低(P<0.01),E-cad表达水平升高(P<0.01);Transwe迁移及侵袭试验结果提示转染Cav-1siRNA后细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组显著减弱(P<0.05)。结论:Cav-1可能通过调节E-cad的表达影响食管癌的转移。

lncRNA DGCR5通过上调EGFR表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DiGeorge综合征临界区基因5(digeorge syndrome critical region gene 5,DGCR5)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)TE1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用qPCR检测ESCC细胞系TE1、Yes-2、KYSE150和Eca9706中DGCR5的表达水平。将siRNA-DGCR5(si-DGCR5)和阴性对照组(si-NC)质粒转染进TE1细胞,用CCK-8、划痕愈合、Transwell小室法分别检测TE1细胞增殖、迁移和侵袭能力。依据GEPIA数据库资料分析食管癌组织中DGCR5表达与细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的相关性,并用qPCR和Western blotting(WB)检测ESCC细胞系中EGFR mRNA和蛋白表达水平,进一步用WB实验检测转染si-DGCR5前后TE1细胞中EGFR蛋白的表达水平。结果:DGCR5在ESCC细胞系中均高表达(均P<0.01),转染siDGCR5组TE1细胞中DGCR5的表达水平明显低于si-NC组(P<0.01)。敲低DGCR5后,TE1细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著低于si-NC组细胞(均P<0.01)。GEPIA数据库的分析显示,食管癌组织中DGCR5表达水平与EGFR的表达呈正相关(P<0.01)。敲低DGCR5后TE1细胞中EGFR蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。结论:lncRNA DGCR5在ESCC细胞中呈高表达,可能通过上调EGFR表达来促进TE1细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为。

shRNA转染对食管癌细胞TE13中CHK1和CHK2表达以及照射后G_2/M期阻滞的影响

背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Coγ射线照射后细胞周期的影响。方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 shRNA,分别提取质粒DNA并采用脂质体转染TE13细胞并传代;采用Westernblot、RT-PCR和流式细胞仪分别检测CHK1和CHK2蛋白和mRNA表达、以及5Gy60Coγ射线照射后细胞周期变化,克隆形成实验检测5Gyγ射线照射后细胞存活率。结果:采用CHK1和CHK2shRNA转染TE13细胞后,其mRNA和蛋白表达均明显降低。单纯5Gyγ射线照射后24h,TE13细胞G2/M期比例由未照射组的32.17%增至61.47%;shRNA转染的TE13细胞在5Gyγ射线照射后24h,G2/M期比例由单纯照射组的61.47%降至28.13%(CHK1)和42.80%(CHK2),P<0.05。5Gyγ射线、CHK1shRNA加5Gyγ射线、以及CHK2shRNA加5Gyγ射线照射后,细胞存活率分别为27.0%、13.0%和21.0%。shRNA转染的子一代TE13细胞在转染后120h,对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制作用已基本消失;转染120h后以5Gyγ射线照射24h,CHK1或CHK2 shRNA转染组G2/M期比例高于单纯照射组,P<0.05;至转染后144h和5Gyγ射线照射后48h,转染组与单纯照射组比较G2/M期比例无明显差别,P>0.05。结论:采用质粒连接的人CHK1和CHK2 shRNA转染TE13细胞后,可以明显抑制其mRNA和蛋白表达并消除照射后G2/M期阻滞,增加放射敏感性;提示TE13细胞γ射线照射后G2/M期检测点可能受CHK1和CHK2激酶双重调节,但以CHK1为主。

FasL反义RNA在人食管癌TE11细胞中的表达及意义

目的采用反义RNA技术,构建人FasL反义RNA重组逆转录病毒载体。以FasL表达阳性的人食管癌细胞株TE11为模型,研究反义RNA重组逆转录病毒表达载体对细胞FasL的阻断作用。方法将人FasL全基因序列的DNA片段反向插入逆转录病毒pLXSN质粒上的XhoⅠ和BamHⅠ位点间,建立重组质粒pL(FasL-AS)SN。将pL(FasL-AS)SN导入包装细胞PA317中,经G418筛选后收获培养上清,转染TE11细胞,建立TE11-hFasL-AS细胞系。用PCR技术检测pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11细胞中的整合;用RT-PCR法检测TE11细胞经重组病毒感染前后FasL mRAN表达量的变化;采用流式细胞仪检测TE11和TE11-hFasL-AS细胞FasL的表达及其对U937细胞凋亡的诱导。结果将pL(FasL-AS)SN转染TE11细胞后,FasL反义RNA已整合至TE11细胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS细胞FasL mRAN及蛋白的表达水平均显著下降(P<0.01);与TE11-hFasL-AS细胞混合培养后,U937细胞凋亡率明显低于未转染组(P<0.01)。结论成功构建了人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体,用该载体转染的TE11细胞中FasL的表达水平明显受抑,为Fas/FasL参与的体内许多病理进程的机制研究及临床应用提供实验基础。

miRNA-25对人食管鳞状细胞癌细胞株TE1增殖的影响

目的:探讨过表达/沉默微小RNA-25(microRNA-25,miRNA-25)对人食管鳞状细胞癌细胞株TE1增殖能力的影响及其作用机制。方法:RT-PCR检测各临床样品组织中miRNA-25的表达水平。建立miRNA-25过表达/沉默的TE1细胞株,采用CCK-8法、Brd U实验和流式细胞术检测TE1细胞增殖能力的变化及细胞周期状态;Western blot法和RT-PCR法检测细胞周期调控因子细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的蛋白与mRNA表达水平。结果:miRNA-25在食管黏膜组织中具有特异性表达并在TE1细胞中呈高表达。CCK-8法和Brd U实验结果显示过表达miRNA-25的TE1细胞的增殖能力显著增加(P<0.05),而沉默miRNA-25抑制TE1细胞的增殖;流式细胞术检测结果显示过表达miRNA-25可明显促进TE1细胞从G0/G1期向S期转换,沉默miRNA-25则抑制其转换。同时Western blot和RT-PCR实验结果显示过表达miRNA-25后,cyclin E1和CDK2的蛋白和mRNA表达水平均显著增加(P<0.05),沉默miRNA-25后则显著减少(P<0.05)。结论:miRNA-25能够促进人食管鳞状细胞癌细胞株TE1的增殖,其作用机制可能与促进细胞周期转换及上调cyclin E1和CDK2的表达水平有关,提示miRNA-25可作为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在靶点。

β-catenin过表达对骨肉瘤细胞TE85迁移、侵袭及凋亡的影响

目的探讨β-catenin对骨肉瘤细胞TE85迁移、侵袭及凋亡的影响。方法 RT-PCR及Western blot检测β-catenin在不同骨肉瘤细胞中的表达情况,重组腺病毒Adβ-catenin感染TE85细胞,RT-PCR及荧光素酶报告基因检测感染Adβ-catenin后β-catenin mRNA的表达及活性,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力,DAPI染色和流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果 TE85细胞内源性β-catenin表达相对较低(P<0.05),Adβ-catenin能显著增加TE85细胞外源性β-catenin基因表达及活性,β-catenin组细胞迁移能力明显减慢(P<0.05),β-catenin组侵袭能力明显低于对照组(P<0.05)。结论β-catenin能抑制肿瘤细胞TE85的迁移及侵袭能力,对凋亡无影响。

TLR9的激活对食管鳞癌细胞的增殖侵袭能力及NF-κB表达的影响

目的探索Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的激活对食管鳞癌细胞的增殖侵袭能力及NF-κB表达的影响。方法流式细胞术检测TLR9在食管鳞癌细胞TE-3、TE-13、TE-15、TE-30中的表达;免疫荧光法检测TLR9在TE-13细胞中的表达;用CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)激活TE-13,实验分为阴性对照组(control)、低剂量CpG-ODN组(1μg/mL)、中剂量CpG-ODN组(3μg/mL)和高剂量CpG-ODN组(12μg/mL)。RT-qPCR检测食管鳞癌细胞TE13中TLR9和NF-κB mRNA相对表达量的变化;采用CCK-8和Transwell法分别检测TLR9的激活对TE-13细胞增殖和侵袭能力的影响。结果①TLR9在TE-13表达量高于其他3种食管鳞癌细胞系。②3、12μg/mL CpGODN作用后TE-13细胞中TLR9被充分激活并且上调NF-κB的表达,TLR9和NF-κB的表达显著均高于阴性对照组(P<0.05);低剂量CpG-ODN组与阴性组相比差异无统计学意义(P>0.05)。③CCK-8和Transwell法检测发现CpGODN浓度在3、12μg/mL时TLR9的激活可显著增加TE-13细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05),激活作用具有浓度依赖性。低剂量CpG-ODN组与阴性组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论CpG-ODN可通过TLR9/NF-κB促进食管鳞癌细胞的增殖和侵袭,提示TLR9可能是治疗食管鳞癌的重要靶点。

结合电生孔技术的抗体-纳米TiO_2靶向光敏杀癌细胞

报道了用免疫、电生孔和纳米TiO2光催化组合技术进行杀伤结肠癌LoVo细胞的研究.先把结合LoVo细胞表面CEA抗原的单克隆抗CEA抗体吸附在纳米TiO2微粒表面,抗体-纳米TiO2复合微粒就会自动吸附到LoVo细胞的表面,然后用电脉冲法使LoVo癌细胞的细胞膜上产生小孔,促使纳米TiO2微粒进入癌细胞内部.最后在紫外光照射下使TiO2纳米粒子在癌细胞内部发生光催化氧化作用,杀伤癌细胞.结果表明,这种组合技术具有很高的杀癌细胞能力.在仅含3.12μg/mL抗体-纳米TiO2的细胞培养液内和强度为4mW/cm2的紫外光照射下,可在30min内将所有LoVo癌细胞杀死.这种技术对LoVo癌细胞的杀伤力远高于对不表达CEA抗原的人正常TE353.sk细胞的杀伤力,显示了组合技术杀癌细胞的高选择性.因此,这种组合技术有望成为治疗癌症的新方法,值得进一步探索.

蟾蜍灵抑制食管癌细胞增殖、迁移和趋化运动的机制研究

目的通过培养人食管癌TE13细胞株,观察蟾蜍灵对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、趋化运动及Raf-1、磷酸化Raf-1(p-Raf-1)表达的影响,阐明蟾蜍灵抑制食管癌转移的作用机制,为临床治疗提供实验依据。方法培养TE13细胞,通过MTT方法检测细胞药物毒性及对细胞增殖的影响,通过细胞划痕试验检测蟾蜍灵对迁移的抑制作用。通过Boyden小室实验检测蟾蜍灵处理后的食管癌细胞株TE13的趋化运动。采用免疫组织化学和Western blot检测蟾蜍灵处理后Raf-1、p-Raf-1蛋白的表达。结果 MTT结果显示,TE13细胞的增值抑制率随着蟾蜍灵浓度的增加(10、25、50、100和200 nmol/L)而升高(P<0.05)。划痕实验结果显示,不同溶度的蟾蜍灵处理TE13细胞后,TE13细胞的迁移能力随着蟾蜍灵浓度的增加而降低。Boyden小室实验结果显示,10、25、50和100 nmol/L蟾蜍灵处理后的食管癌细胞穿过滤膜细胞数量与对照组比较明显减少(P<0.05)。Western blot结果显示,各组Raf-1蛋白的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。25、50和100 nmol/L蟾蜍组p-Raf-1的表达量与对照组比较明显减少(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,各组Raf-1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。25、50和100 nmol/L蟾蜍灵组的p-Raf-1阳性细胞数及棕黄色颗粒数与对照组比较明显减少(P<0.05)。结论当蟾蜍灵的药物浓度<200 nmol/L时,食管癌TE13细胞增殖的抑制作用不能通过其细胞毒性实现。蟾蜍灵对食管鳞状细胞癌TE13细胞株的迁移、趋化运动能力有明显的抑制作用。蟾蜍灵不抑制Raf-1蛋白表达,但可以降低p-Raf-1在食管鳞状细胞癌TE13细胞株的表达,提示可能通过抑制Raf-1的激活抑制ERK通路,从而抑制食管鳞状细胞癌TE13细胞株的转移。

食管鳞状细胞癌中Beclin1表达及其对增殖的影响

目的探讨Beclin1在食管鳞状细胞癌(esophagus squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及意义,分析其过表达对人ESCC细胞株TE1体外生长活性的影响。方法分别采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测57例ESCC及癌旁正常食管黏膜组织中Beclin1蛋白及mRNA的表达;利用基因转染、RT-PCR及Western blot法观察外源性Beclin1过表达对ESCC细胞株TE1的影响;MTT法分析外源性Beclin1过表达对TE1细胞增殖的影响;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡;在荧光显微镜下观察转染后肿瘤细胞的自噬。结果免疫组化染色结果示,在ESCC中Beclin1蛋白的阳性率为29.82%(17/57),明显低于癌旁正常食管黏膜组织100%(57/57)(P<0.00),Beclin1蛋白的表达与ESCC患者的分化程度(χ2=6.158,P=0.046)、淋巴结转移(χ2=5.664,P=0.017)有关;与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度无关;RT-PCR检测结果示,在ESCC中Beclin1 mRNA的表达量(0.168±0.038)明显低于癌旁正常食管黏膜组织(0.280±0.052)(P<0.00)。pCMV6-Entry-Beclin1脂质体法转染TE1细胞后,在mRNA和蛋白水平Beclin1的表达均高于TE1PE组及TE1组。在TE1细胞中过表达Beclin1后可抑制肿瘤细胞的体外生长,抑制率为57.21%。FCM检测pCMV6-Entry-Beclin1转染后G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制;凋亡率为5.91%,高于TE1PE组和TE1组(P<0.05)。在荧光显微镜下见TE1Beclin1组中MDC标记的自噬囊泡数量明显增加。结论自噬相关基因Beclin1 mRNA及蛋白在ESCC中表达下调,自噬活性的降低可能与ESCC的发生、发展及侵袭转移有关;Beclin1过表达可抑制人ESCC细胞株TE1的增殖,并诱导其自噬和凋亡,利用自噬基因Beclin1对ESCC基因治疗也许具有可行性。

降低聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活性对外源癌基因诱导的NIH3T3转化的逆转作用研究

用ＰＡＲＰ酶抑制剂苯甲酰胺（ＢＡ）处理经ｃ－Ｈａ－Ｔ２４－ｒａｓ活化癌基因转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞得到转化细胞系，结果表明：经苯甲酸胺处理的细胞系，其细胞凝集、血清依赖性、形态特征等均发生了改变，呈现出正常细胞的特征．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，已整合到细胞基因组中的外源Ｔ２４～ｒａｓ基因发生了丢失．

沙利度胺对食管癌TE1细胞DNA合成抑制作用和辐射敏感性的影响

目的 探讨不同浓度沙利度胺联合X线照射对食管癌TE1细胞放射敏感性的影响.方法 采用细胞划痕实验检测沙利度胺对细胞浸润转移能力的影响,H3-TdR掺入法研究沙利度胺单用及联合X射线对TE1细胞DNA合成抑制作用,用克隆形成法研究对TE1细胞辐射敏感性的影响.结果 沙利度胺对食管癌TE1细胞的浸润转移能力、DNA合成、克隆形成均有明显的抑制作用,并随药物浓度的升高而增强.TE1细胞的D0、Dq、SF2值随着沙利度胺浓度的增加而减小：沙利度胺100 μg/ml时放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.4±0.2和1.5±0.1;150μg/ml时的放射增敏比分别为1.4±0.2和1.8±0.2.结论 沙利度胺能够抑制TE1细胞的浸润转移、DNA合成能力,显著提高TE1细胞的辐射敏感性.

HIV-1 Tat通过抑制启动子活性调控MCAK基因表达

目的验证HIV-1Tat对有丝分裂着丝点关联驱动蛋白MCAK基因表达的调节作用并探讨其分子机制。方法利用表达Tat的人横纹肌肉瘤细胞(TE671)模型及原核表达纯化的Tat蛋白,通过Northern印迹法和蛋白印迹技术验证HIV-1 Tat对MCAK基因表达的抑制作用。PCR扩增MCAK基因各启动区片段,与荧光素酶报告质粒相连接,并转染到TE671细胞,通过荧光素活性分析法检测DNA片段启动活性,确定MCAK基因的活性启动区域。进一步通过HIV-1Tat与MCAK启动区作用,分析Tat对启动子活性的调控作用。结果Northern印迹和蛋白印迹结果证实Tat蛋白对MCAK转录、翻译水平的表达都有强烈的抑制作用;荧光报告质粒检测系统分析表明MCAK的核心启动区存在于-399～+1bp区域,且其启动子活性在Tat存在的情况下受到明显的抑制。结论HIV-1 Tat能作用于MCAK基因启动区-399～+1bp区域,导致MCAK启动子活性降低,从而抑制MCAK基因的表达。

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的:探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用q PCR法检测食管癌组织和细胞中miR-515-5p的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,q PCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果:miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低(均P<0.01)。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01),而敲低miR-515-5p表达则可增强食管癌TE1细胞的增殖、侵袭和迁移能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因分析证明,HDAC2是miR-515-5p的靶基因。q PCR和WB实验结果显示,miR-515-5p对HDAC2 m RNA和蛋白表达具有负调控作用。挽救实验证实miR-515-5P通过靶向HDAC2抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

BMP信号通路抑制剂影响猪胚胎细胞分化的研究

为了明确骨形态发生蛋白(BMP)信号通路抑制剂影响猪胚胎细胞分化,了解BMP信号通路是以BMP蛋白作为配体释放蛋白激酶调解钙离子的浓度,并在其他转录因子的协同作用下,最终形成转录复合物结合至靶基因的调控区域,从而调控靶基因的表达以发挥生物学效应。卵泡抑素在细胞外颉颃BMP信号通路,试验采用卵泡抑素作为BMP信号通路抑制剂研究胚胎细胞分化与信号通路的相关性。结果表明:添加10 ng/mL、100 ng/mL卵泡抑素组的滋养层细胞(TE细胞)数和总细胞数显著高于未添加组、1 ng/mL组(P<0.05)。内细胞团(ICM)细胞以及TE细胞对于未来胚胎的发育至关重要,因为添加卵泡抑素并不会影响ICM细胞的发育,因此不会对此有太大影响,然而TE细胞却与胚胎着床有密切关系,增加TE细胞数意味着会加快胚胎的发育速度,也会增加着床的概率。

沙利度胺联合RNAi沉默VEGF基因对食管癌细胞增殖的影响

目的研究沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi沉默VEGF-C基因的方法对食管癌细胞体外增殖的影响。方法以VEGF为靶点,利用siRNA设计原则,设计VEGF-siRNA,构建慢病毒载体pCDH-VEGF-shRNA,并包装好病毒稳定转染到食管癌细胞株TE1中,RT-PCR及Western Blot检测VEGF的表达情况,采用四甲摹偶氮唑蓝(MTT)法检测沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi沉默VEGF基因对TE1细胞的增殖抑制作用。结果慢病毒载体pCDH-VEGF-shRNA构建成功并包装出高滴度的慢病毒颗粒,转染TE1细胞后,RNAi组的VEGF的表达明显下降,MTT结果显示沙利度胺及RNAi都可抑制TE1细胞的增殖,但沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi抑制TE1增殖的效果更明显。结论沙利度胺联合慢病毒介导的RNAi可明显抑制食管癌细胞株TE1中VEGF的表达,在抑制TE1细胞的增殖中起重要作用。