鸦胆子油乳剂对食管鳞状细胞癌TE-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其可能的机制

目的:探讨鸦胆子油乳剂(BJOE)对食管鳞状细胞癌TE-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其可能的机制。方法:按干预措施的不同,将TE-1细胞分为对照组、RAPA(自噬激动剂)组、740Y-P(PI3K激活剂)组、BJOE组、BJOE+RAPA组和BJOE+740Y-P组。采用FCM、克隆形成、Transwell实验检测细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭能力,qPCR法检测细胞中PI3K、Akt、mTOR、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、Beclin 1、caspase-3的mRNA表达,WB法检测PI3K、Akt、mTOR及其磷酸化、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin 1、caspase-3的蛋白表达。结果:与对照组比较,RAPA组和BJOE组细胞凋亡率均显著升高(均P<0.01),细胞克隆形成率、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01),细胞中PI3K、Akt、mTOR的mRNA和蛋白磷酸化水平均显著降低(均P<0.05),p62的mRNA和蛋白水平显著降低(均P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1和caspase-3的mRNA和蛋白水平显著升高(均P<0.05),740Y-P组的结果则相反(均P<0.05);与RAPA组或740Y-P组比较,BJOE+RAPA组或BJOE+740Y-P组细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),克隆形成率、细胞侵袭和迁移能力显著降低(均P<0.01),PI3K、Akt、mTOR的mRNA和蛋白磷酸化水平均显著降低(均P<0.05),p62的mRNA和蛋白水平均显著降低(均P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1和caspase-3 mRNA和蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:BJOE显著抑制TE-1细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡与自噬,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活有关。

青藤碱通过MAPK/ERK/mTOR通路诱导自噬抑制人食管癌TE-1细胞增殖

目的:研究青藤碱对人食管癌TE-1细胞增殖、自噬的作用和机制。方法:将TE-1细胞分成对照组、青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组。对照组不做处理,青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组分别予以相应浓度的青藤碱干预。光学显微镜观察细胞形态改变,Hochest染色检测活细胞数,CCK8法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,透射电镜观察自噬小体情况,免疫荧光检测LC3表达情况,Western blotting检测LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、ERK1/2、p-ERK1/2、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量。结果:在200、400、800 mg/L青藤碱的作用下,TE-1细胞皱缩、变圆,漂浮在培养液中,活细胞数不断减少。青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组活细胞数比例显著低于对照组(P<0.01),细胞抑制率、细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组TE-1细胞内自噬小体多于对照组;青藤碱200 mg/L组、青藤碱400 mg/L组、青藤碱800 mg/L组TE-1细胞LC3表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达量均显著高于对照组(P<0.01),p-ERK1/2/ERK1/2及p-mTOR/mTOR比值均显著低于对照组(P<0.01)。结论:青藤碱能抑制人食管癌TE-1细胞增殖,其机制与抑制MAPK/ERK/mTOR通路和诱导自噬有关。

莪术醇β-环糊精包合物对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨莪术醇β-环糊精包合物对食管癌TE-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用饱和溶液法制备莪术醇与β-环糊精的包合物,红外光谱验证包合物的形成。不同浓度(25、50、100mg/L)莪术醇β-环糊精包合物处理食管癌TE-1细胞后,噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期与凋亡情况。实时荧光定量PCR及2-ΔΔCt法定量分析不同处理组Survivin mRNA的相对表达量。Western blot检测Survivin蛋白表达。结果 MTT法检测结果显示,与对照组比较,莪术醇β-环糊精包合物各剂量组生长抑制率均明显升高,且随着剂量升高而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,莪术醇β-环糊精包合物处理可使细胞阻滞在G0/G1期与G2/M期,并且促进细胞凋亡。此外,与对照组比较,处理组细胞中Survivin mRNA与蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论莪术醇β-环糊精包合物能够抑制食管癌细胞TE-1的增殖,促进凋亡,对Survivin的抑制与其抑制食管癌细胞的恶性表型的作用相关。

温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用

目的研究温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用。方法采用超临界CO2萃取法提取温郁金成分。将TE-1细胞贴壁后分成4组:1组加入100μL含0.1%DMSO的RMPI-1640培养基,作为对照组;另外3组分别加入浓度为25、50、100mg/L温郁金提取物完全培养液各100μL,分别作为温郁金低、中、高剂量组。培养48h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组TE-1细胞生长抑制率。应用基因芯片技术检测各组TE-1细胞基因表达谱的变化。对差异表达基因进行基因本体(gene ontology,GO)功能分类。结果与对照组比较,温郁金各剂量组生长抑制率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。温郁金各剂量组TE-1细胞生长抑制率随着剂量升高而增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过基因芯片筛选出温郁金提取物作用前后88个基因表达水平发生改变且有统计学意义,包括22个基因表达下调,66个基因表达上调。基因GO分类提示差异表达基因主要涉及信号传导(6个)、细胞周期(8个)、凋亡(14个)或分化调节(10个)等。结论温郁金提取物对人食管癌TE-1细胞生长有抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控多层次的基因表达改变有关。

多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌TE-1细胞系中的表达

目的:检测食管鳞癌TE-1细胞系中肿瘤干细胞标志物CD44、CD133、P75NTR、OCT-4的表达,探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标志物。方法:应用免疫荧光技术检测食管鳞癌TE-1细胞系中CD44、CD133、P75NTR、OCT-4的表达和定位。结果:在TE-1细胞中,CD44和CD133在所有细胞都表达且荧光定位在细胞的胞浆;P75NTR和OCT-4也在所有细胞表达,但在有些细胞荧光定位于胞核,在另外一些细胞荧光定位于胞浆。结论:在TE-1中可能存在肿瘤干细胞,但CD44、CD133、P75NTR、OCT-4不是特异的标志物。

食管癌TE-1细胞生物学性状的相关性研究

目的研究食管癌TE-1细胞生物学性状。方法①将购自上海生命科学院的食管癌TE-1细胞株进行HE染色;②用MTT法绘制细胞生长曲线;③免疫组织化学检测细胞特异性免疫标志;④流式细胞仪分析细胞周期。结果①用DMEM高糖培养基培养,生长良好。HE染色下,细胞大致分为3种:一种细胞呈椭圆形,核大,胞浆少,一种细胞呈三角形或多角形,大小,形态不等,一种细胞有双核或者多核,核大深染,染色质丰富,核分裂相多见;②细胞接种培养后其生长曲线呈近似S形。免疫组织化学检测3种抗体均表达阳性,其中CK7阳性表达定位于胞浆,Ki-67和p53定位于胞核;③TE-1细胞周期:半数细胞处于增生期,半数处于静止期。结论食管癌TE-1细胞符合食管鳞癌的特征。

沉默线粒体核糖体蛋白L35基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响

目的:探讨慢病毒介导沉默线粒体核糖体蛋白L35 (MRPL35)基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响,并阐明其机制。方法:选择3种人食管癌TE-1、ECA109和KYSE150细胞,采用实时定量PCR法检测3种细胞中MRPL35mRNA相对表达水平。食管癌TE-1细胞分为shMRPL35组和shCtrl组,分别加入沉默靶基因带有嘌呤霉素抗性的si-RNA慢病毒和带有嘌呤霉素抗性的阴性对照si-RNA慢病毒进行感染,建立稳定沉默MRPL35基因的食管癌细胞系,实时定量PCR及Western blotting法检测各组细胞中MRPL35基因沉默效率,采用CCK-8法检测各组细胞生长曲线,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:3种食管癌细胞均表达MRPL35基因,3种细胞中MRPL35mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。实时定量PCR法和Western blotting法检测,shMRPL35组TE-1细胞中MRPL35mRNA和蛋白表达水平明显低于shCtrl组(P<0.05)。与shCtrl组比较,shMRPL35组TE-1细胞生长速度明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:沉默MRPL35基因可抑制食管癌细胞TE-1增殖,并通过凋亡途径发挥作用。

RNAi抑制食管癌TE-1细胞株血管生长素表达的实验研究

目的构建介导血管生长素(Angiogenin,ANG)短发夹RNA(ShorthairpinRNA,shRNA)表达的真核质粒载体,研究RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术对食管癌细胞株TE-1中ANG表达的抑制作用。方法依据Tuschl等设计原则,以ANG为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA片段序列,经退火成互补双链,再克隆到载体pRNA-H1.1/Neo中构建重组质粒pRNA-H1.1/Neo-ANGshRNA。脂质体法转染重组质粒至食管癌TE-1细胞,以空质粒(pRNA-H1.1/Neo)转染为对照;半定量RT-PCR法及蛋白质印迹法分别观察TE-1细胞中ANG在核酸和蛋白水平表达量改变。结果①成功构建带ANG靶向的shRNA真核表达载体(pRNA-H1.1/Neo-ANGshRNA);②pRNA-H1.1/Neo-ANGshRNA转染TE-1细胞后,ANG在核酸和蛋白水平表达均较空载体pRNA-H1.1/Neo转染的对照组显著下降。结论成功构建真核表达质粒介导的ANG靶向RNA干扰重组质粒,转染TE-1细胞后能有效抑制ANG表达,为下一步利用RNAi技术抑制肿瘤血管形成以及局部侵袭和远处转移提供研究基础。

紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其可能的机制

目的:观察紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探究其作用机制。方法:采用不同浓度的紫草素(0、1、5、10µmol/L)处理TE-1细胞,MTT法检测24、48、72 h后各组细胞增殖水平;紫草素处理各组TE-1细胞48 h后,采用Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况,流式细胞术检测细胞的凋亡水平及周期变化,Western blotting检测TRAP1/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果:紫草素呈时间和浓度依赖性抑制TE-1细胞增殖(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,紫草素能显著促进TE-1细胞凋亡(P<0.01),使TE-1细胞周期发生G0/G1期阻滞(P<0.05或P<0.01),同时降低TRAP1、p-Akt以及p-mTOR表达水平(P<0.05或P<0.01),以上作用具有剂量依赖性。结论:紫草素能显著抑制TE-1细胞的增殖,诱导细胞发生G0/G1期阻滞并促进其凋亡,这可能与其抑制TRAP1/Akt/mTOR信号通路有关。

没食子酸对人食管癌TE-1细胞的体外抑制作用及其机制

目的探究没食子酸(GA)对人食管癌TE-1细胞的体外抑制作用及潜在机制。方法MTT法检测GA作用24 h和48 h后对TE-1细胞增殖的影响,细胞荧光计数(CCK-F)法和倒置荧光显微镜观察GA作用后TE-1细胞的数量变化和形态变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,平板集落形成实验检测GA对TE-1细胞集落形成能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光探针(DCFH-DA)法观察活性氧(ROS)产生情况;Western blot法检测胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin D3的表达水平。结果GA能够明显降低TE-1细胞的增殖能力,且有时间和浓度依赖趋势,其对细胞的半数抑制浓度分别为(281.22±26.81)μmol/L(24 h)和(220.90±31.15)μmol/L(48 h)。与对照组比较,给药组细胞出现皱缩、排列稀疏、细胞核固缩等现象,且细胞数量明显减少。与对照组比较,给药组细胞的细胞迁移能力和集落形成能力均显著降低(P<0.01或P<0.05)。经100、300、500μmol/L的GA作用24 h后,细胞凋亡率分别为(6.21±0.32)%、(12.59±0.58)%和(15.41±0.41)%,均显著高于对照组的(5.29±0.28)%(P<0.01或P<0.05);除100μmol/L GA组外,其余给药组细胞ROS的产生水平均显著提高(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,各给药组细胞中Bcl-2(仅GA 200μmol/L组)、Bax(GA 100μmol/L组除外)、caspase-3、caspase-9(GA 100μmol/L组除外)的表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05),Bcl-2(GA 100、200μmol/L组除外)、cyclin D1、cyclin D3蛋白的表达水平均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论GA能够抑制人食管癌TE-1细胞的增殖,限制其迁移能力及集落形成能力,促进其凋亡;上述作用可能与该成分可提高ROS水平并上调促凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin D3的表达有关。

TW37对食管癌TE-1细胞迁移的影响

目的:观察TW37对食管癌TE-1细胞迁移的影响。方法:用0. 25、0. 50、1. 00、2. 00、4. 00、8. 00、16. 00、32. 00和64. 00μmol/L的TW37处理TE-1细胞24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖。倒置显微镜下观察2、4μmol/L的TW37作用24 h对TE-1细胞形态的影响。划痕实验检测2、4μmol/L的TW37作用24、48 h对TE-1细胞迁移的影响。Western blot实验测定2、4μmol/L TW37作用24 h对TE-1细胞E-Cadherin、Vimentin以及N-Cadherin蛋白表达的影响。均设空白对照。结果:TW37抑制TE-1细胞增殖,呈时间和浓度依赖性。TW37作用后TE-1细胞由原来的梭形变成了卵圆形。TW37能够在较低浓度(2μmol/L)抑制TE-1细胞迁移,4μmol/L的TW37抑制迁移的作用更强(P <0. 05)。TW37能降低TE-1细胞中Vimentin、N-Cadherin的表达,上调E-Cadherin的表达(P <0. 05)。结论:TW37可能通过抑制EMT进程进而抑制TE-1细胞的迁移。

人食管癌细胞株KYSE-150、TE-1中肿瘤干细胞的培养分化及增殖侵袭能力分析

背景:研究发现,食管癌组织中存在一类细胞亚群,具有一定的侵袭和转移性能,与治疗效果之间存在十分密切的联系。目的:从人食管癌细胞株KYSE-150、TE-1中分离富含肿瘤干细胞的细胞球,并对其增殖和侵袭能力进行分析。方法:运用无血清培养基培养KYSE-150、TE-1细胞,观察细胞球的生成情况,采用MTT法以及Transwell小室实验检测细胞的增殖情况和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达。结果与结论:①KYSE-150、TE-1细胞在无血清培养条件下可以获得稳定传代的细胞球。②细胞球的增殖能力和侵袭能力均显著高于亲本细胞(P<0.05)。③TE-1细胞球和KYSE-150细胞球的CD44^+、CD271^+、CD44^+CD271^+细胞比例均显著高于TE-1亲本细胞和KYSE-150亲本细胞(P<0.05)。④实验结果提示,从人食管癌细胞株KYSE-150、TE-1中分离出具有肿瘤干细胞特性的细胞球,具有很强的增殖和侵袭转移能力,且CD44和CD271可以作为重要的食管癌干细胞表面标志物。

MicroRNA-21对食管鳞状上皮癌细胞TE-1生物学特性的影响

目的:食管鳞状上皮癌TE-1细胞中microRNA-21(miR-21)高表达,本研究探讨miR-21对TE-1细胞生物学特性的影响。方法:转染miRZip-21慢病毒,持久抑制TE-1细胞中高表达的miR-21,将由此获得的稳定细胞系命名为anti-miR-21细胞系,实时定量PCR方法验证,以TE-1细胞作为对照。细胞增殖实验检测anti-miR-21细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,Transwell迁移实验及划痕实验观察细胞迁移能力,克隆形成实验及细胞毒性实验分别观察放射线及药物敏感性变化。结果:Anti-miR-21细胞的相对增殖率较对照组TE-1细胞低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验及迁移实验显示穿过小室的anti-miR-21细胞较TE-1细胞分别减少51.97%及64.31%,差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示anti-miR-21细胞较TE-1细胞的迁移率降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。克隆形成实验分析显示anti-miR-21细胞的D0值(2.73Gy vs 3.60Gy)和Dq值(1.25Gy vs 2.75Gy)均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞毒性实验显示anti-miR-21细胞在顺铂及氟尿嘧啶各个梯度浓度下细胞存活率均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-21影响食管鳞状上皮癌TE-1细胞的生物学特性。抑制miR-21表达后,降低了TE-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力,同时增加了其对放射及化学药物的敏感性。MiR-21可能成为食管鳞癌治疗的潜在靶点。

lncRNA01296在食管癌组织中的表达及其对食管癌TE-2细胞增殖和迁移的影响

目的:探究lncRNA01296在食管癌组织中的表达及其对食管癌TE-2细胞增殖和迁移的影响。方法:收集2017年1月至2018年9月承德医学院附属医院肿瘤科收治的36例食管癌组织及相应的癌旁组织,并培养人正常食管上皮细胞(HEEC)及人食管癌细胞系EC A109、TE-1及TE-2。用qPCR检测癌组织及EC A109、TE-1及TE-2细胞中lncRN A01296、小核核糖核蛋白A(SNRPA)及神经生长因子(NGF)mRNA的表达水平。重组慢病毒干扰载体转染食管癌细胞系及相应对照细胞系,分别分为干扰1组、干扰2组及对照组,WB实验检测转染后细胞SNRPA及NGF蛋白的表达水平,MTS实验检测转染后TE-2细胞的增殖能力,Transwell实验检测TE-2细胞侵袭和迁移能力。结果:lncRNA01296、SNRPA及NGF mRNA在食管癌组织及细胞系中呈高表达(均P<0.01),且lncRNA01296、SNRPA及NGF mRNA在低分化的TE-2细胞中表达高于其他癌细胞(均P<0.05)。干扰1组和干扰2组lncRNA01296、NGF mRNA表达水平明显低于对照组(均P<0.01),而SNRPA mRNA表达水平与对照组无明显差异(P>0.05);干扰1组和干扰2组SNRPA及NGF蛋白表达水平明显低于对照组(均P<0.01)。敲减48、72h后,干扰1组及干扰2组TE-2细胞相对增殖能力明显低于对照组(P<0.05或P<0.01);对照组、干扰1组及干扰2组侵袭细胞数分别为(72.0±6.3)、(36.6±4.3)及(33.9±3.7)个,迁移细胞数分别为(85.2±9.9)、(47.5±8.1)及(43.8±6.5)个,干扰1组及干扰2组侵袭及迁移细胞数显著低于对照组(均P<0.01);结论:lncRNA01296可通过上调SNRPA表达促进NGF介导的食管癌细胞的增殖和迁移,为临床食管癌诊断和治疗提供新的靶点。

辐射抗性食管癌细胞亚系TE-1R的建立及其辐射抗拒机制的研究

目的建立辐射抗性食管癌细胞亚系TE-1R，并探讨其辐射诱导的凋亡性及辐射抗性机制。方法采用分次、间歇照射的方法（2Gy，5次）诱导人食管癌细胞系TE-1产生具有稳定辐射抗性的细胞亚系TE-1R，显微镜下观察细胞形态学差异。以TE-1和TE-1R细胞为实验对象，给予6MVX射线单次照射（2Gy），流式细胞仪分析细胞照射后的凋亡情况，RT—PCR法和Western Blot法分别检测食管癌TE-1、TE-1R细胞中复制蛋白AI（RPA1）mRNA和蛋白的表达情况。结果筛选出辐射抗性食管癌细胞亚系TE—1R。2Gy射线照射后12、24和48hTE-1R细胞的凋亡率低于TE—1细胞（P〈0．05）。RPA1 mRNA和蛋白在TE—1R细胞中的表达高于TE-1细胞（P〈0．05）。结论成功建立了辐射抗性的食管癌细胞亚系TE-1R，新的细胞亚系TE-1R比其亲本细胞系TE-1对射线更加抗拒，RPA1可能在食管癌细胞辐射抗性的修复中起着重要作用。

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响。方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化。结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P<0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P<0.01),而S期细胞比例减少(P<0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化。结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡。

HSP90在胆管癌组织与细胞中的表达及17-AAG对胆管癌细胞株的影响

目的 :探讨HSP90在胆管癌组织与细胞中的表达情况及17-AAG对胆管癌TE-1细胞株的影响。方法:选择我院2015年7月—2016年7月收治的40例胆管癌患者作为研究对象,分别检测患者胆管癌组织、癌旁组织及正常组织的HSP90α表达情况,应用不同浓度的17-AAG对胆管癌TE-1细胞株进行处理并检测HSP90及其效应蛋白HIF-1α的表达情况。结果:胆管癌组织的总阳性率为82.5%,高于癌旁组织的35.0%与正常组织的20.0%(均P<0.05)。胆管癌组织的强阳性表达率为37.5%,高于癌旁组织的10.0%与正常组织的5.0%(均P<0.05)。患者胆管癌组织的HSP90α表达与浸润深度、淋巴结转移无关(P>0.05),但与TNM分期及肿瘤直径有明显相关性(P<0.05)。随着17-AAG处理浓度的升高,HSP90α/β-actin、HIF-1α/β-actin降低,不同处理浓度下胆管癌TE-1细胞株HSP90α及其效应蛋白HIF-1α表达均有统计学意义(P<0.05)。结论:HSP90在胆管癌组织及细胞中高表达,且表达情况与临床分期及肿瘤直径有关。17-AAG可下调胆管癌TE-1细胞株中HSP90α及HIF-1α表达,对于临床治疗有一定指导作用。

干细胞Nanog蛋白在食管癌组织中的表达及意义

目的:通过分析干细胞Nanog蛋白在食管癌组织中的表达,进一步探讨其和食管癌病理特征存在的关系。方法:回顾性分析2012年1月-2014年1月在本院接受治疗的70例食管癌患者,收集其临床资料、癌组织及癌周围正常组织的标本等资料,采用免疫组化法检测其癌组织和癌组织周围正常细胞的干细胞Nanog蛋白,并用免疫荧光技术检测食管癌细胞系Eca-109及TE-1的Nanog蛋白表达。结果:经检测,食管癌组织中的Nanog蛋白表达水平显著高于癌周围正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),且食管癌组织中的Nanog蛋白表达水平和食管癌病理分期、分化程度及淋巴结转移有明显关系(P<0.05)。结论:干细胞Nanog蛋白在食管癌组织中的表达水平,和食管癌病变的发生、发展及转移情况有密切关系。

干细胞Nanog蛋白在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨食管癌组织中干细胞Nanog蛋白表达,分析其与食管癌临床病理特征的关系。方法收集87例食管癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本,采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中的Nanog蛋白表达,同时用免疫荧光技术检测食管癌细胞系TE-1、Eca-109中的Nanog蛋白表达。结果 Nanog蛋白在食管癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),Nanog蛋白在食管癌组织中的表达与其病理分期、分化程度和淋巴结转移有关(P均<0.05)。食管癌细胞系TE-1、Eca-109中的Nanog阳性蛋白呈高表达,且表达存在异质性;多数细胞以细胞质表达为主,少数以细胞核表达为主,细胞核表达阳性率为10%。结论 Nanog蛋白在食管癌组织中的表达与食管癌的发生、发展及转移密切相关。

黄芪皂苷Ⅳ对食管癌细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响

目的探讨黄芪皂苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对食管癌TE-1细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响。方法将TE-1细胞分为四组:空白对照组、黄芪皂苷Ⅳ20μg/ml组、黄芪皂苷Ⅳ40μg/ml组和黄芪皂苷Ⅳ80μg/ml组。给予各组细胞不同的黄芪皂苷Ⅳ药物浓度处理48 h后采用CCK-8法检测细胞存活率,成球实验检测干细胞成球情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测凋亡相关蛋白、干细胞标志蛋白和PI3K/AKT通路蛋白,以及免疫荧光检测AKT膜定位情况。结果与空白对照组比较,黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著增加细胞凋亡率,显著上调caspase-3和caspase-9蛋白表达(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著减小干细胞成球球体直径及球体数量(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著下调干细胞标志蛋白SOX2、OCT4和CD44的表达(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著下调通路蛋白PI3K和AKT磷酸化水平,显著抑制AKT膜定位(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ可诱导TE-1细胞凋亡,抑制干细胞样特性,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路活化有关。