蟾蜍灵抑制食管癌细胞增殖、迁移和趋化运动的机制研究

目的通过培养人食管癌TE13细胞株,观察蟾蜍灵对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、趋化运动及Raf-1、磷酸化Raf-1(p-Raf-1)表达的影响,阐明蟾蜍灵抑制食管癌转移的作用机制,为临床治疗提供实验依据。方法培养TE13细胞,通过MTT方法检测细胞药物毒性及对细胞增殖的影响,通过细胞划痕试验检测蟾蜍灵对迁移的抑制作用。通过Boyden小室实验检测蟾蜍灵处理后的食管癌细胞株TE13的趋化运动。采用免疫组织化学和Western blot检测蟾蜍灵处理后Raf-1、p-Raf-1蛋白的表达。结果 MTT结果显示,TE13细胞的增值抑制率随着蟾蜍灵浓度的增加(10、25、50、100和200 nmol/L)而升高(P<0.05)。划痕实验结果显示,不同溶度的蟾蜍灵处理TE13细胞后,TE13细胞的迁移能力随着蟾蜍灵浓度的增加而降低。Boyden小室实验结果显示,10、25、50和100 nmol/L蟾蜍灵处理后的食管癌细胞穿过滤膜细胞数量与对照组比较明显减少(P<0.05)。Western blot结果显示,各组Raf-1蛋白的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。25、50和100 nmol/L蟾蜍组p-Raf-1的表达量与对照组比较明显减少(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,各组Raf-1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。25、50和100 nmol/L蟾蜍灵组的p-Raf-1阳性细胞数及棕黄色颗粒数与对照组比较明显减少(P<0.05)。结论当蟾蜍灵的药物浓度<200 nmol/L时,食管癌TE13细胞增殖的抑制作用不能通过其细胞毒性实现。蟾蜍灵对食管鳞状细胞癌TE13细胞株的迁移、趋化运动能力有明显的抑制作用。蟾蜍灵不抑制Raf-1蛋白表达,但可以降低p-Raf-1在食管鳞状细胞癌TE13细胞株的表达,提示可能通过抑制Raf-1的激活抑制ERK通路,从而抑制食管鳞状细胞癌TE13细胞株的转移。