Ki-67、Bcl-6、Bcl-2及TEFM在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义

目的:探讨Ki-67、Bcl-6、Bcl-2及TEFM在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及其与患者临床特征和预后的关系。方法:选取DLBCL组织样本41例和反应性增生淋巴组织样本42例,比较不同组织中Ki-67、Bcl-6、Bcl-2及TEFM的表达情况;分析Ki-67、Bcl-6、Bcl-2和TEFM蛋白表达水平与DLBCL临床病理的相关性,筛选DLBCL患者预后影响因素。结果:DLBCL组织中Ki-67、Bcl-2和Bcl-6表达水平明显高于非生发中心部位反应性增生淋巴组织,差异有统计学意义(P<0.05);Ki-67及TEFM蛋白表达水平与原发部位相关(P<0.05);DLBCL患者3年生存率与患者年龄相关,年龄≥60岁的患者3年生存率仅为28.57%。结论:Ki-67、Bcl-6、Bcl-2在DLBCL组织中高表达,TEFM与Ki-67、Bcl-6、Bcl-2在DLBCL进展过程中可能具有协同作用,Ki-67、Bcl-6、Bcl-2可作为DLBCL预后不良的重要指标。

人TEFM基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果鉴定

本研究旨在构建人TEFM基因的shRNA真核表达载体,对其抑制效率进行鉴定,以筛选出抑制效率最优的shRNA干扰载体.根据人TEFM基因全长cDNA序列(NM_024683.3),利用Ambion公司在线软件设计出4条shRNA,分别克隆至psi-U6载体中,得到4个重组干扰质粒TEFM-shRNA-1~TEFM-shRNA-4.重组子转化感受态细胞后挑取阳性克隆子进行PCR鉴定和DNA测序验证.将4个shRNA真核表达载体分别转染人脑胶质瘤U87细胞,使用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株后,通过qPCR和Western blotting分别检测各组细胞中TEFM的mRNA和蛋白质表达水平.PCR鉴定和DNA测序鉴定证实重组质粒中已插入目的DNA序列.qRT-PCR和Western blotting结果表明,4个重组载体均可以显著降低TEFM的mRNA和蛋白质表达水平(P<0.01),其中以TEFM-shRNA-3和TEFM-shRNA-4的抑制效率最优,对TEFM mRNA表达的抑制率分别为76.5%和78.8%,TEFM蛋白表达的抑制率分别为69.5%和74.8%.成功构建TEFM基因shRNA真核表达载体,转染人脑胶质瘤U87细胞并成功筛选出稳定沉默细胞株,为进一步探索TEFM在脑胶质瘤中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.

基于生物信息数据库分析TEFM基因在DLBCL中表达研究

为了探讨线粒体延伸因子TEFM在弥漫性大B细胞淋巴瘤DLBCL中的表达,初步研究其表达与DLBCL患者的临床特征及预后的关系,从数据库中下载关于DLBCL患者TEFM mRNA二代测序数据及临床病理资料,分析TEFM转录水平与临床病理参数的相关性及其预后价值。结果显示TEFM在DLBCL组织中均较正常淋巴组织显著高表达,mRNA表达水平与预后无显著相关性(P>0.05),其表达水平在DLBCL患者不同病理分期中的表达无显著差异(P>0.05)。多因素分析结果显示,TEFM表达水平和种族是影响DLBCL患者预后的独立因素。TEFM基因表达水平与SUZ12P1、SNHG10、METTL17和BCS1L基因表达水平呈正相关(P<0.05)。数据库中荟萃了TEFM mRNA在DLBCL组织中表达的相关信息,证实TEFM mRNA在DLBCL组织中呈高表达,但其表达水平与DLBCL患者预后无明显关联。

线粒体转录延伸因子:调控线粒体DNA复制与转录转换的分子开关

线粒体转录延伸因子(TEFM)最早是基于其氨基酸序列与真核细胞核转录因子Spt6具有同源性而被鉴定,其包括两个串联重复的螺旋-发夹-螺旋结构域(Helix-Hairpin-Helix,(HhH)2)和一个RNase H折叠。TEFM二聚化对于TEFM与线粒体RNA聚合酶的结合至关重要。近年的研究发现,TEFM是调控线粒体DNA(mtDNA)复制与转录相互转换的关键分子开关,参与人类线粒体基因转录延伸过程及其表达调控。本文首先介绍了TEFM蛋白的序列同源性、蛋白质结构特征,为后续功能研究奠定结构基础。其次,阐明了TEFM在线粒体转录延伸过程中的作用和抗转录终止功能,以及线粒体转录延伸复合体的功能。TEFM避免了mtDNA转录和复制过程发生冲突,使线粒体转录延伸复合体具有更高的稳定性和持续合成能力,体内和体外都能增强mtDNA转录延伸活性,在mtDNA的复制和转录调控中发挥重要作用。最后,阐述了TEFM参与线粒体RNA加工,以及在线粒体能量代谢和线粒体相关疾病的发生发展中的作用。TEFM的缺失严重损害氧化呼吸链,证明mtDNA转录延伸对于维持线粒体氧化磷酸化功能是必需的。1型神经纤维瘤、胰腺癌、脑胶质瘤等疾病的发生机制可能与TEFM基因缺失或表达异常有关,因此,本文进一步探讨和展望了TEFM对人类线粒体相关疾病研究的应用前景。

数据挖掘分析线粒体转录延伸因子在胰腺癌中的表达及意义

线粒体转录延伸因子(mitochondrial transcription elongation factor, TEFM)在线粒体基因转录调控中发挥重要作用,但其在胰腺癌中的表达及意义未见系统研究。本研究利用各种肿瘤生物信息学数据库进行数据挖掘分析TEFM基因在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并进一步探讨TEFM基因对胰腺癌患者预后的影响。利用Oncomine数据库分析TEFM基因在正常胰腺组织和胰腺癌组织中m RNA水平的表达变化。通过基因表达谱动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis, GEPIA)人体正常组织和其相应的肿瘤组织中TEFM基因的表达差异。经MethHC分析胰腺癌和正常胰腺组织中TEFM基因DNA启动子区甲基化水平的差异。利用OncoLnc对TEFM基因的表达水平与胰腺癌患者生存率作Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验。在String-DB数据库中探索TEFM基因在线粒体基因转录调控中相互作用的基因。结果显示:与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中TEFM基因在m RNA水平呈高表达,且TEFM基因DNA启动子区甲基化水平升高。TEFM基因的表达水平与胰腺癌患者的总体生存时间无显著相关性。线粒体RNA聚合酶(mitochondrial RNA polymerase, POLRMT)与TEFM蛋白有明显的相互作用。大样本数据挖掘能迅速地获取胰腺癌组织中TEFM基因表达的相关信息,为深入研究TEFM基因在胰腺癌发生发展中的作用机制奠定理论基础。