流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因TEM-1、ROB-1的检测

目的 探讨我国北京,上海,广州3地2000—2003年流感嗜血杆菌氨苄西林的耐药机制。方法 选取2000—2003上述3地上呼吸道感染患儿鼻咽部分离培养的899株流感嗜血杆菌,采用E test法检测氨苄西林耐药情况。用头孢硝噻酚片进行β内酰胺酶检测,PCR方法检测产酶菌株TEM -1、ROB -1耐药基因携带情况。结果 74株氨苄西林耐药菌株均产生内酰胺酶,PCR检测均为TEM- 1基因阳性,未发现ROB -1基因阳性菌株。结论 我们研究的儿童上呼吸道携带流感嗜血菌对氨苄西林耐药的机制主要是TEM- 1型β内酰胺酶的产生。

实时荧光聚合酶链反应检测呼吸道感染鲍曼不动杆菌TEM-1基因

目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测鳗曼不动杆菌TEM-1耐药基因灵敏度为102拷贝,279株鲍曼不动杆菌中检出47株携带TEM-1基因,检出率为16.8%。结论应用Taqman探针荧光聚合酶链反应能够快速、准确检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因。

用DNA杂交技术检测产β-内酰胺酶的临床分离菌株的TEM-1基因

为了探求院内感染革兰氏阴性杆菌产生超广谱β内酰胺酶的基因决定机制，我们采用ＤＮＡ斑点杂交技术对所选临床分离的产β内酰胺的大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌等进行了其质粒介导的β内酰胺酶基因类型分析。对２０株菌质粒用ＴＥＭ１探针检测的结果如下：１１株大肠埃希氏菌全与ＴＥＭ１探针杂交；６株肺炎克雷伯氏菌有３株与ＴＥＭ１探针杂交；１株已证明含有ＳＨＶ２超广谱β内酰胺酶的日勾维肠杆菌未与ＴＥＭ１探针杂交；２株不动杆菌有１株（溶血不动杆菌）与ＴＥＭ１探针杂交。

TEM-1型β-内酰胺酶编码基因的克隆表达

目的:构建TEM-l型β-内酰胺酶基因的表达载体。方法:通过PCR扩增TEM-l全编码基因,将其连接入pBK-CMV载体中,并在大肠杆菌JM109中表达。采用琼脂二倍稀释法对TEM-l克隆菌株进行MIC检测,双纸片法筛选及确证实验检测其表型,等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点(pIs)。结果:经酶切测序鉴定TEM-l基因的表达载体构建正确。重组菌产pI为5.4的TEM-l广谱酶,仅对青霉素类耐药。结论:TEM-l基因原核表达载体正确构建,为进一步研究打下了基础。

TEM1表达与胃癌患者新辅助化疗疗效相关性研究

目的:检测胃癌组织中P53、人表皮生长因子受体2(HER-2)、肿瘤内皮标记物1(TEM1)的表达情况,结合新辅助化疗后临床疗效进行相关性分析,探讨其作为新辅助化疗疗效生物学标志物的可能性。方法:选取2015年5月至2017年5月于兰州大学第一医院就诊以氟尿嘧啶为基础行新辅助化疗的63例胃癌患者,对新辅助化疗前的胃癌标本行免疫组织化学法检测P53、HER-2、TEM1的表达情况,通过影像学评估新辅助化疗疗效,分析各肿瘤指标与新辅助化疗疗效之间的关系。结果:63例进展期胃癌患者新辅助化疗后总有效率为69.8%,其中完全缓解(complete response,CR)2例,部分缓解(partial response,PR)7例,疾病稳定(stable disease,SD)35例,疾病进展(progressive disease,PD)19例;单因素分析结果显示TEM1阳性、T分期较高的患者新辅助化疗疗效较差(均P<0.05);病变部位、分化程度、病灶大小、P53(P=0.488)阳性及HER-2(P=0.106)阳性表达与胃癌新辅助化疗疗效无相关。多因素分析结果显示TEM1阳性、T分期高可能是进展期胃癌患者新辅助化疗疗效差的预测因素。结论:TEM1作为肿瘤基质的标志物,其阳性表达可能成为预测胃癌新辅助化疗疗效差的重要分子生物学指标。

TEM-1型β内酰胺酶的原核表达纯化及活性验证

目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、酶的纯化及活性验证。方法:利用PCR技术,以大肠杆菌全基因组为模板钓取TEM-1基因,构建p ET22b(+)-TEM-1表达质粒,经测序鉴定后,转入大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达、亲和纯化,并通过抗生素水解实验验证其酶活性。结果:构建了可溶性表达TEM-1的工程菌,通过亲和纯化最终获得纯度达90%以上的TEM-1型β内酰胺酶,该酶可水解氨苄西林。结论:获得了对氨苄西林具有水解活性的TEM-1型β内酰胺酶,并对其进行了酶动力学参数检测,验证其抗生素水解特性,有利于对临床抗生素的合理应用做出指导。

淋病奈瑟菌临床分离株对抗菌药物敏感性及TEM-1基因质粒分型研究

目的检测2010～2011年度本地区临床分离的淋病奈瑟菌流行株对青霉素、四环素、大观霉素、头孢曲松和环丙沙星的敏感性,对质粒介导的产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)进行耐药质粒TEM-1基因分型。方法采用琼脂稀释法测定菌株对5种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),判断敏感性按WHO西太区淋病奈瑟菌耐药性监测统一标准。用纸片酸度法检测PPNG菌株,多重PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并进行TEM-1基因分型。结果 150株淋病奈瑟菌中检出105株对青霉素耐药(70%);四环素和环丙沙星耐药率分别为84%和98%;未发现对大观霉素和头孢曲松耐药菌株,但头孢曲松低敏率达到48%(72/150);青霉素﹑四环素和环丙沙星的MIC50及MIC90均已超过耐药标准,尤以青霉素和四环素为甚,其MIC50及MIC90均超过耐药标准的2倍和大于32倍。检出PPNG46株,阳性率为30.7%,耐药质粒TEM-1基因分型以亚洲型为主(91.3%,42/46),只有4株携带非洲型质粒。结论淋病奈瑟菌对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高,对大观霉素和头孢曲松的敏感性较高,可作为治疗的首选药物;TEM-1基因质粒分型以亚洲型为主。

TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究

目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。

抗人肿瘤内皮标志物1 ( TEM1)抗体的表达及活性鉴定

目的构建抗人肿瘤内皮标志物1(TEM1)全抗体IgG78的真核表达载体,进行表达纯化后鉴定其生物学活性。方法利用PCR分别从单链抗体ScFv78中扩增TEM1抗体的轻、重链可变区基因,并克隆入带有小鼠抗体恒定区的真核表达载体Bichim-L,瞬时转染HEK293F细胞,表达产物用蛋白G亲和层析柱进行纯化,所得蛋白用SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定,采用流式细胞术和活细胞ELISA检测该抗体与TEM1阳性细胞的结合特异性及亲和力。结果成功构建了TEM1全抗体IgG78的真核表达载体,并在HEK293F细胞中表达。SDS-PAGE和Western blot法证实目的蛋白符合预期大小,流式细胞术及细胞ELISA结果显示该抗体可特异性结合TEM1阳性肿瘤细胞,且有较高的亲和力。结论成功获得了一株具有良好结合特异性和较高亲和力的TEM1抗体。

靶向重组Aif-T18融合蛋白对TEM1阳性肿瘤细胞的杀伤作用的研究

验证Aif-T18融合蛋白对肿瘤内皮细胞标志分子1(TEM1)阳性肿瘤细胞的杀伤作用。采用基因工程技术方法构建重组质粒pIRES-TEM1-EGFP,转染TEM1阴性表达细胞MS1,经G418筛选得到TEM1阳性细胞株(MS1-TEM1);通过构建重组质粒pET302-Aif和pET302-Aif-T18,转化至表达宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导菌体得到所需的目的蛋白,采用流式细胞仪和MTT技术检测融合蛋白对MS1和MS1-TEM1细胞的亲和力和特异性杀伤的效果。本研究中,主要利用单链抗体scFvT18选择性携带凋亡诱导因子AIF,靶向抑杀TEM1阳性细胞,从而为Aif-T18融合蛋白在肿瘤治疗中的开发应用提供实验依据。

Ki-67、TEM1及ERCC1表达与胃癌新辅助化疗效果的相关性分析

目的分析Ki-67、TEM1及ERCC1表达与胃癌新辅助化疗效果的相关性。方法回顾性分析2018年1月至2022年12月就诊并行胃癌新辅助化疗的112例胃腺癌患者为研究对象,收集患者临床病历资料,采用免疫组化技术检测胃镜活检和手术病理中Ki-67、TEM1及ERCC1的表达,分析与胃癌新辅助化疗效果相关的影响因素。结果胃癌新辅助化疗病理完全缓解16例(14.29%),有效68例(60.71%),无效44例(39.29%)。单因素分析:新辅助化疗有效率分别与T分期、临床分期、Ki-67表达、Ki-67变化、TEM1表达、ERCC1表达明显相关(P<0.05),病理完全缓解率分别与T分期、Ki-67表达、ERCC1表达明显相关(P<0.05)。多元Logistic回归分析:Ki-67表达、Ki-67变化、TEM1表达、ERCC1表达均是新辅助化疗有效的独立影响因素(P<0.05),Ki-67表达、ERCC1表达均是病理完全缓解的独立影响因素(P<0.05)。结论Ki-67、TEM1及ERCC1表达均是胃癌新辅助化疗效果的独立分子生物学预测因子,对胃癌新辅助化疗长期预后的判断具有一定的指导价值。

肺炎克雷伯氏菌K99-1029中的ESBLs基因型分析

目的 了解华山医院临床分离的肺炎克雷伯氏菌K99 10 2 9菌株产生的超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)的基因型。方法 编码框以外设计引物、PCR扩增K99 10 2 9转移接合子中的ESBLs全编码基因 ,克隆入pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序分析其基因型。结果 K99 10 2 9转移接合子所产生的三种酶编码基因序列分别与GenBank中TEM 1、SHV 12、CTX M 3编码基因序列的同源性为 10 0 % ;产SHV 12或CTX M 3克隆菌株对多数 β 内酰胺类抗生素耐药 ,SHV 12和CTX M 3对多数 β 内酰胺类抗生素具有水解作用 ,CTX M 3对头孢噻肟的水解能力明显强于头孢他啶 ;产TEM 1克隆菌株仅对青霉素类耐药 ,TEM 1对青霉素类有明显的水解作用。结论 临床分离的肺炎克雷伯氏菌K 99 10 2 9菌株同时产生TEM 1、SHV 12、CTX M 3型酶 ,可导致对大多数的 β 内酰胺类抗生素产生耐药性。

麝香保心丸对心力衰竭大鼠内皮素1和肾上腺髓质素水平的影响

目的探讨麝香保心丸对心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠血浆内皮素1(ET-1)和肾上腺髓质素(ADM)水平的影响。方法 80只Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组,10只)、假手术组(B组,10只)、其余60只制作心力衰竭模型,将制模成功35只大鼠又分对照组(C组,9只)、麝香保心丸小剂量组(D组,9只)、麝香保心丸大剂量组(E组,9只)和阳性药物对照组(F组,8只),采用灌胃法给药。超声心动图检测用药前后大鼠心脏功能,放射免疫法检测ET-1、ADM水平。结果 A组与B组用药前LVEF、左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)无显著差异。与B组用药前比较,C组、D组、E组、F组大鼠LVEF明显降低,LVEDD、LVESD明显增加(P<0.01);与C组用药后比较,E组大鼠LVEF明显升高,LVEDD、LVESD明显减小(P<0.05),D组、F组LVESD明显减小(P<0.05);与B组比较,C组大鼠ET-1、ADM水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与C组比较,D组、E组、F组大鼠ET-1水平明显降低(P<0.05,P<0.01),E组ADM水平明显降低(P<0.01)。结论麝香保心丸可能通过改善心肌血供,进而抑制慢性心力衰竭时神经内分泌系统的激活,并起到了有效治疗作用。

2011-2012年海南地区淋球菌β-内酰胺酶的检测及其基因分型

目的了解质粒介导的产青霉素酶淋球菌(PPNG)在海南地区的分子流行病学情况。方法采用纸片酸度法测定产β-内酰胺酶菌株(PPNG),PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并进行TEM-1基因质粒分型。结果 2011-2012年共检测了214株淋球菌,检出PPNG65株(31.31%),其中55株(84.62%)携带TEM-1基因亚洲型质粒,10株(15.38%)携带TEM-1基因非洲型质粒;未见多伦多型和里约型。结论海南地区流行的PPNG以亚洲型TEM-1基因为主(84.62%),非洲型其次(15.38%)。

CXCR4嗜性SHIVKU-1病毒静脉感染中国恒河猴初步研究

目的了解SHIVKU-1静脉途径感染中国恒河猴的感染特点及进展规律。方法两只健康中国恒河猴,静脉感染SHIVKU-1病毒,定期采样检测血浆病毒载量、CD4+/CD8+比值、CD4+T细胞绝对数变化和血清中抗SHIVKU-1特异性IgG抗体水平。多色流式技术分析外周血、腹股沟淋巴结和十二指肠粘膜固有层CD4+T淋巴细胞记忆细胞亚群变化。结果两只实验猴成功感染SHIVKU-1病毒,一直到感染后3个月均保持稳定水平的病毒载量。外周血CD4+T淋巴细胞下降明显,CD4+/CD8+T细胞比值严重倒置。CD4+Tcm细胞比例在经历了感染早期的下降后,大幅升高,尤其是外周血和淋巴结。CD4+Tem则在粘膜固有层中增加明显。结论 SHIVKU-1静脉途径成功感染了中国恒河猴,为SHIV/中国恒河猴疾病及评价模型的建立奠定了良好的基础,为今后使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了条件。

5-[4′-正庚基-氧-联苯基-4-氧-羰基]基-1-正戊炔的晶体结构研究

The crystal structure of 5-{[(4′-heptoxy-biphenylyl-4-yl)oxy]carbonyl}-1-pentyne({A3E′O7}) was investigated by wide angle X-ray diffraction(WAXD), transmission electron microscope(TEM) and atom force microscope(AFM). The structures of A3E′O7 solution-crystal and melt-crystal are the same. The crystals belong to the monoclinic P112/m space group, the cell parameters are {a0.589 nm}, b0^771 nm, c4.75 nm, αβ90° and γ93.8°, the calculated cell density is {1.167 g/cm+3}.

电子设备使用与1~3岁婴幼儿气质的关系——基于中国家庭追踪调查的实证分析

在数字化和“互联网+”的时代背景下,各类电子设备深度融入家庭,成为生活中不可缺少的必需品,在一定程度上影响幼儿教育的发展。本研究选取2020年中国家庭追踪调查数据,研究电子设备使用与1~3岁婴幼儿气质之间的关系。结果表明,电子设备使用可以显著正向预测1~3岁婴幼儿气质的活动性、反应性和情绪性,与社会抑制性和专注性无显著关系。据此,建议家长了解婴幼儿气质特点,尊重个体差异;寻求婴幼儿使用电子设备的平衡点,实施科学早教。

利用交叉组装噬菌体示踪水环境中人源粪便来源的耐药细菌

人类粪便中的耐药细菌(antibiotic resistant bacteria,ARB)及其携带的耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)可以通过城市污水处理系统排放进入当地水环境,因此,快速准确地探明水环境中粪便污染及ARB情况对于保护生态系统和居民健康具有重要意义。本研究借助噬菌体crAssphage作为新型人类粪便污染特异性指示标记,采集太原市健康人群粪便、晋阳湖、汾河水库、自来水和污水处理厂的样品,首先采用实时荧光定量PCR技术检测样品中人类粪便污染指示标记crAssphage、细菌核糖体16S rRNA基因与耐药基因bla TEM-1的存在情况;其次针对各类样品进行细菌分离培养与鉴定,完成样品中bla TEM-1耐药菌株及多重耐药细菌的筛选;最后通过构建系统发育树分析菌株的进化关系,探究不同环境介质中细菌之间的相互影响。结果显示crAssphage在晋阳湖、汾河水库和污水处理厂样品中被检出,证明太原市区水环境存在人类粪便污染。本研究共分离鉴定出254株细菌,氨苄青霉素耐药细菌占比最高(74.41%),环丙沙星耐药细菌占比最低(1.97%);耐药基因bla TEM-1在各类样品的菌株中都有检出(22.83%),多重耐药细菌共有79株(31.10%)。进化关系分析表明人体肠道与水环境中的耐药细菌具有亲缘关系。上述结果表明太原市水环境受到人类粪便污染的影响,并且可能促进了ARGs和ARB的传播扩散,对人体健康产生威胁。该研究为评估太原市水环境粪便污染情况及ARB分布提供基础数据,为水环境监测保护给出科学依据。

流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因研究

目的明确我院分离的流感嗜血杆菌(HI)氨苄西林耐药的基因。方法用 E 试验测定我院上呼吸道感染患儿鼻咽部分离300株 HI 对氨苄西林耐药情况;以 Nitrocefin 纸片检测β内酰胺酶;PCR 扩增及序列分析确定产酶株的基因型。结果31株氨苄西林耐药株均产β内酰胺酶,占总菌株数11%(32/300),PCR 检测出 TEM-1 31株,ROB-1 1株。结论产β内酰胺酶是 HI 对氨苄西林耐药的重要机制,TEM-1型是β内酰胺酶主要基因型,ROB-1型β内酰胺酶也首次被检出,值得关注和长期监测。

肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析

目的分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型,为指导临床合理用药提供依据。方法用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC,分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果83株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,产TEM型75株,SHV型41株,CTX-M型25株,OXA型9株。其中,同时产3种酶有13株,占15．7%；同时产2种酶有59株,占71．1%；仅11株产单1种酶,占13．2%。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型,测序结果为CTX-M-3,TEM-1及多种SHV型(SHV-12、SHV-28)。药敏结果表明,同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论所分离产ESBLs肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型,且同时存在产2～3种酶,应引起临床高度重视。