鸡大肠杆菌TEM和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

【目的】检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型和基因亚型,了解河南省产酶鸡大肠杆菌ESBLs基因型分布。【方法】对河南省7个地区不同鸡场临床分离28株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增及测序分析,确定其基因型和基因亚型。【结果】21株鸡大肠杆菌检出TEM型基因,2株检出CTX-M型基因,5株检出TEM型和CTX-M型两种基因,未检出SHV型。TEM基因亚型以TEM-1变异型为主,与AY293072(TEM-1)相比同源性为98%—99%,核苷酸序列除发生18T→C沉默突变外,尚有3株分别有另一处碱基发生变化:783G→A(C3菌,序列号为FJ405207)、21T→A(X2菌,序列号为FJ405208)和269G→A(F4菌,序列号为FJ405211),其中前两处为沉默突变,F4菌的碱基突变引起92甘氨酸变为天冬氨酸,为TEM-57型。CTX-M基因亚型包括两种:CTX-M-65亚型4株(C2、C3、C4和K1,序列号分别为FJ405191,FJ405192,FJ405212和FJ405214)和CTX-M-14亚型3株(F2、X3和B5,其中F2菌的相关序列已上传至GenBank,获序列号为FJ405213)。【结论】目前河南省产ESBL鸡大肠杆菌基因亚型以TEM-1变异型为主,CTX-M-65和CTX-M-14型次之。

流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因TEM-1、ROB-1的检测

目的 探讨我国北京,上海,广州3地2000—2003年流感嗜血杆菌氨苄西林的耐药机制。方法 选取2000—2003上述3地上呼吸道感染患儿鼻咽部分离培养的899株流感嗜血杆菌,采用E test法检测氨苄西林耐药情况。用头孢硝噻酚片进行β内酰胺酶检测,PCR方法检测产酶菌株TEM -1、ROB -1耐药基因携带情况。结果 74株氨苄西林耐药菌株均产生内酰胺酶,PCR检测均为TEM- 1基因阳性,未发现ROB -1基因阳性菌株。结论 我们研究的儿童上呼吸道携带流感嗜血菌对氨苄西林耐药的机制主要是TEM- 1型β内酰胺酶的产生。

肺炎链球菌耐药性和TEM基因的研究

目的 :分析肺炎链球菌感染的耐药及其机制 ,以有效的指导临床进行合理的治疗与用药。方法 :对 2 0 0 3年 7月 1日至 2 0 0 3年 12月 31日就诊于儿童医院的上呼吸道感染儿童 ,进行的咽拭子培养 ,对分离出的肺炎链球菌 ,再进行耐药性方面的检测 ,用套式 PCR对 TEM基因进行检测。结果 :32例标本中对青霉素敏感的为 16 6 % ,安灭菌31% ,头孢呋肟 91% ,头孢噻肟 88% ,菌必治 94 % ,红霉素 34% ,复方新诺明 4 4 % ,氯霉素 97% ,万古霉素 10 0 % ,环丙沙星 91% ,克林霉素 2 5 % ,阿奇霉素 31% ,同时对其中 2 0例标本的 TEM基因进行检测 ,其阳性率为 5 0 %。含有 TEM基因的肺炎链球菌 ,其对β-内酰胺类药物中的青霉素耐药性较强 ,耐药率达到 90 % (9/ 10 ) ;TEM基因阴性的标本 ,其对β-内酰胺类药物的青霉素耐药性就比较弱 ,敏感率为 90 % (9/ 10 ) ,中介率 10 % (1/ 10 )

实时荧光聚合酶链反应检测呼吸道感染鲍曼不动杆菌TEM-1基因

目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测鳗曼不动杆菌TEM-1耐药基因灵敏度为102拷贝,279株鲍曼不动杆菌中检出47株携带TEM-1基因,检出率为16.8%。结论应用Taqman探针荧光聚合酶链反应能够快速、准确检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因。

TEM-1型β-内酰胺酶编码基因的克隆表达

目的:构建TEM-l型β-内酰胺酶基因的表达载体。方法:通过PCR扩增TEM-l全编码基因,将其连接入pBK-CMV载体中,并在大肠杆菌JM109中表达。采用琼脂二倍稀释法对TEM-l克隆菌株进行MIC检测,双纸片法筛选及确证实验检测其表型,等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点(pIs)。结果:经酶切测序鉴定TEM-l基因的表达载体构建正确。重组菌产pI为5.4的TEM-l广谱酶,仅对青霉素类耐药。结论:TEM-l基因原核表达载体正确构建,为进一步研究打下了基础。

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的TEM基因测序

目的 对产超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)的肺炎克雷伯菌 (Kpn)和大肠埃希菌 (Eco)的TEM基因进行序列测定。 方法 分A、B、C 3段扩增TEM基因 ,并对A、B、C 3段扩增产物进行四色荧光标记全自动测序。 结果 来源于呼吸道 (痰 )的 3株Kpn和分别来源于呼吸道 (痰 )、泌尿道 (尿 )、胆道 (胆汁 )和分泌物中的 1 1株Eco测得的TEM序列完全一致。 结论 被检测的来源于不同病灶、不同菌种(Kpn与Eco)的超广谱β -内酰胺酶 (ESBLs)含同种TEM的质粒。

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中TEM基因型特征研究

目的分析临床分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中TEM亚型的分布及药敏情况。方法采用PCR对ESBLs大肠埃希菌进行TEM基因及TEM-1、TEM-2基因亚型检测研究。结果在临床分离的351例大肠埃希茵中共检出产ESBLs茵198例(56.4%),198例产ESBLs大肠埃希菌TEM基因型阳性率分为85.4%(169例),其中TEM-1、TEM-2阳性率分别为63.1%(125例)与22.2%(44例),产ESBLs大肠埃希菌TEM-1基因型与TEM-2基因型阳性率比较,有显著性差异。结论产ESBLs大肠埃希菌耐药情况日趋严重,临床主要流行耐药基因型是TEM-1型,耐药性基因型监测对临床合理使用抗菌药物具有很重要的指导意义。

35株临床分离的大肠埃希菌耐药性与tem基因的鉴别

目的:对临床分离的大肠埃希菌的耐药性与编码TEM型β-内酰胺酶基因(简称tem基因)的研究情况进行分析探讨,为今后的临床治疗工作提供有价值的参考依据。方法:选择2017年6月—2018年6月间送检的临床标本作为研究对象,对其采用全自动微生物鉴定药敏分析仪进行分离鉴定及药敏分析,并对其中的35株耐药大肠埃希菌展开tem基因及tem-1、tem-2基因亚型检测。结果:药敏试验发现,35株大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率为100.0%、对头孢唑林的耐药率为74.3%、对头孢呋辛的耐药率为71.4%。经PCR扩增检测发现,它们均为tem基因阳性。结论:目前临床上分离的大肠埃希菌存在严重的耐药性,tem基因携带率高,在今后的临床用药过程中,应对其给予足够的重视。

TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究

目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。

产ESBLs大肠埃希菌的耐药性与TEM型耐药基因的关系探讨

目的了解西南医科大学附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药情况及TEM耐药基因的流行类型。方法收集2014年7月-2014年11月西南医科大学附属医院分离到的93株非重复致病性大肠埃希菌菌株,1.采用K-B法进行药敏实验。2.双纸片法进行ESBLs确证实验。3.聚合酶链反应(PCR)法检测TEM基因阳性菌株,测序比对确定基因型。结果 1.大肠埃希菌对哌拉西林、第二代头孢菌素、头孢噻肟、喹诺酮类(莫西沙星除外)、氨基糖苷类(阿米卡星除外)的耐药率高(46.24%-78.49%),对β-内酰胺酶类/酶抑制剂复方制剂、头霉素类、阿米卡星、头孢他啶耐药率低(1.08%-17.2%)。全敏、单耐、双耐、多耐菌株分别占4.3%、5.38%、19.35%、70.97%,未检出全耐药菌株。2.ESBLs阳性菌株55株(59.14%),其中多重耐药菌株53株(96.37%),双重耐药菌株2株(3.63%);ESBLs阳性菌株中检出TEM阳性32株(58.18%),主要分布于多重耐药菌株30株(93.75%)。3.经基因测序比对分析,所有的TEM阳性菌株均为TEM-1型β-内酰胺酶。结论 TEM型ESBLs在多重耐药菌株中检出率高,ESBLs阳性且携带TEM耐药基因是本地区大肠埃希菌多重耐药的主要机制。

深圳地区产超广谱β-内酰胺酶菌株的TEM基因分析

目的 了解本地区临床分离的产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)株携带TEM基因的情况。 方法 应用表型确证试验筛选产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。碱裂解法提取产酶株的质粒 ,应用PCR方法分析TEM基因。结果 2 15株产ESBLs菌株中TEM基因阳性 87株 ,阳性率为 4 0 .5 % ,其中产酶大肠埃希菌TEM阳性率为4 9 7% ,肺炎克雷伯菌阳性率为 18.8%。TEM型产酶株主要来源于痰和尿标本 (37.9%和 2 2 .0 % ) ,在肝胆外科、重症监护室和老年病科分布较多。结论 TEM型为本地区产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌常见的基因型 ,广泛分布于各临床科室 ,需引起重视。

Occurrence of Extended Spectrum Beta Lactamase Encoding Genes among Urinary Pathogenic <i>Escherichia coli</i>and <i>Klebsiella pneumoniae</i>Isolates Obtained from a Tertiary Hospital in Gombe Nigeria

This study was conducted to assess the occurrence and nature of extended-spectrum beta lactamase (ESBL) producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae isolates from patients who presented with urinary tract infection at Federal Teaching Hospital Gombe. Isolates collected were recovered on MacConkey agar at 35°C and were identified as members of Enterobacteriaceae, and further screened for antimicrobial susceptibility and resistance by disc diffusion method. Isolates resistant to oxyimino-cephalosporins were confirmed as ESBL producers using Double Disks Synergy Test (DDST). The study shows 66% resistance to ceftriaxone (30 μg) in K. pneumoniae, which was the highest value recorded and a 51% resistance to cefpodoxime (10 μg) in E. coli. The sensitivity of E. coli and K. pneumoniae isolates to cefpodoxime (10 μg) were 49% and 33.9% respectively. ESBLs were detected among 40% (40/100) of E. coli and 54.13% (59/109) of K. pneumoniae isolates. Molecular characterization of ESBL encoding genes among E. coli isolates using multiplex-PCR showed 10% prevalence of SHV gene and 5% prevalence for CTX-M gene while TEM gene was not detected. In K. pneumoniae isolates, 5% prevalence was recorded for each of the three genes screened. The study revealed a co-occurrence of SHV and CTX-M in 75% of the E. coli and 70% of the K. pneumoniae isolates;the occurrence of all the three genes was seen in 10% and 5% of K. pneumoniae and E. coli respectively. Multiplex-PCR method provided an efficient and rapid detection of ESBL related genes, hence could be used in epidemiological studies among ESBL isolates. Monitoring dissemination and transmissions of ESBL producers are highly recommended for optimum patient care and preventing the spread of multidrug resistant (MDR) pathogens.

30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型。结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%。PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%)。药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性。以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一。

流感嗜血杆菌氨苄西林耐药基因研究

目的明确我院分离的流感嗜血杆菌(HI)氨苄西林耐药的基因。方法用 E 试验测定我院上呼吸道感染患儿鼻咽部分离300株 HI 对氨苄西林耐药情况;以 Nitrocefin 纸片检测β内酰胺酶;PCR 扩增及序列分析确定产酶株的基因型。结果31株氨苄西林耐药株均产β内酰胺酶,占总菌株数11%(32/300),PCR 检测出 TEM-1 31株,ROB-1 1株。结论产β内酰胺酶是 HI 对氨苄西林耐药的重要机制,TEM-1型是β内酰胺酶主要基因型,ROB-1型β内酰胺酶也首次被检出,值得关注和长期监测。

鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测30株鸡源大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药性,根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药。结果表明,24株大肠杆菌为产ESBLs株。扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因。有5株同时检测出TEM和CTX-M基因。产酶大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星的耐药率100%。其多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重。

鹤源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测40株鹤源大肠杆菌对17种抗菌药物的耐药性。根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药。结果表明:15株大肠杆菌为产ESBLs株。扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因。产酶大肠杆菌耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重。

拟南芥网状突变体E-210基因精细定位

通过甲基磺酸乙酯(EMS)诱变与遗传分析,从拟南芥(Arabidopsis thaliana)中筛选到一株隐性单基因控制的网状突变体E-210。该突变体植株生长缓慢,叶脉呈绿色,叶肉呈黄色。通过透射电镜观察,发现野生型植株和突变植株在叶绿体结构上差异不大,猜测该突变体E-210基因与叶绿体的发育可能没有直接关系,而很可能同叶绿素或叶绿体的生物合成有关。通过图位克隆的方法,将该突变体的突变基因定位在第5条染色体上的MRB17和MBG8-5的分子标记之间,精确到87.130kb。对MRB17和MBG8-5的分子标记之间的22个基因进行了分析,预测突变体E-210基因可能是At5g54770,编码THI1,即噻唑合成酶。

糖杯芳烃基因载体GGC[4]的合成及性能研究

设计并制备了一种新的具有分子探针功能的主体分子型非病毒载体双子糖杯芳烃主体分子(GGC[4]),应用透射电子显微镜(TEM)观测到主体分子GGC[4]与DNA分子相互作用形成超分子纳米复合物的微观结构形态.体外细胞转染实验表明其具有较高的转染效率.本研究为设计制备新的非病毒基因载体提供了一种新途径.

2011-2012年海南地区淋球菌β-内酰胺酶的检测及其基因分型

目的了解质粒介导的产青霉素酶淋球菌(PPNG)在海南地区的分子流行病学情况。方法采用纸片酸度法测定产β-内酰胺酶菌株(PPNG),PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并进行TEM-1基因质粒分型。结果 2011-2012年共检测了214株淋球菌,检出PPNG65株(31.31%),其中55株(84.62%)携带TEM-1基因亚洲型质粒,10株(15.38%)携带TEM-1基因非洲型质粒;未见多伦多型和里约型。结论海南地区流行的PPNG以亚洲型TEM-1基因为主(84.62%),非洲型其次(15.38%)。

鹿源大肠杆菌ESBLs基因型检测与分析

采用K-B法检测150株黑龙江、吉林、辽宁的鹿源大肠杆菌对20种抗菌药物的耐药性,了解耐药表型和基因型研究超广谱β-内酰胺酶(ESBLa)的流行情况,以指导临床合理用药。结果表明:以鹿源大肠杆菌的ESBLs耐药质粒为模板均扩增出了与预期片段大小相符的,IEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因。84株大肠杆菌为产ESBLs株,占56%。PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV、OXA阳性率分别为23.33%、3.33%、25.33%、8%。有9株同时检测出TEM和SHV基因(占6%)。药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重。