EW-7197对TGF-β1诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及机制

目的:探讨ALK5抑制剂EW-7197对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:采用MTS法检测细胞增殖率,并摸索EW-7197最佳的作用浓度和作用时间。之后将细胞分为3个组,分别为正常对照组、TGF-β1诱导组和TGF-β1+EW-7197处理组,采用Transwell小室观察各组细胞迁移情况,采用Western blot检测各组细胞Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。结果:MTS结果显示,不同处理条件的EW-7197以6.0μmol/L作用24h的细胞增殖率最低(均P<0.01)。Transwell小室实验结果显示,TGF-β1诱导组的细胞迁移数量为228.0±17.0个/视野,明显高于正常对照组(149.0±15.0个/视野)和TGF-β1+EW-7197处理组(46.0±8.0个/视野)(均P<0.01)。Western blot检测结果显示,TGF-β1诱导组细胞中Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3相对表达量高于正常对照组和TGF-β1+EW-7197处理组(均P<0.001)。结论:EW-7197能够通过TGF-β/Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖和迁移。

拉坦前列素酸对人Tenon囊成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的通过观察拉坦前列素酸对人 Tenon 囊成纤维细胞(human Tenon fibroblast,HTF)Ⅰ型胶原mRNA 表达的影响,研究拉坦前列素对滤过道疤痕化的影响。方法体外培养的 HTF 细胞,分别以不同浓度和不同时间拉坦前列素酸作用后,采用 RT-PCR 方法检测Ⅰ型胶原前胶原α_2亚单位 mRNA 相对表达量的变化。结果拉坦前列素酸作用2d,Ⅰ型胶原 mRNA 10^(-5)M 组下降40.2±8.2%(P<0.01),10^(-6)M 组下降38.4±6.4%(P<0.01),10^(-7)M 组下降29.1±10.5%(P<0.01),10^(-8)M 组下降23.3±10.6%(P<0.01)。10^(-7)M 拉坦前列素酸处理组相对于对照组Ⅰ型胶原 mRNA 第1天下降24.4±9.9%,第2天下降49.0±8.3%,第3天下降94.8±7.1%,随时间延长下调作用增强(P<0.01)。结论拉坦前列素酸可下调 HTF 细胞Ⅰ型胶原α_2亚单位mRNA 的表达。

后Tenon囊下注射曲安奈德联合玻璃体切割术在脉络膜脱离型视网膜脱离中的应用

背景曲安奈德具有抗光作用，脉络膜脱离型视网膜脱离（RD/CD）术前玻璃体腔内注射TA可减轻炎症反应，改善手术效果，但由于术前眼压低，玻璃体腔注射易引起并发症。关于后Tenon囊下注射TA在RD/CD中的有效性和安全性尚未见报道。目的探讨后Tenon囊下注射TA治疗RD/CD的疗效及安全性。方法采用回顾性研究方法，收集于2010年5月至2014年6月在温州医科大学附属眼视光医院首诊为RD/CD且接受手术的患者22例22眼的病历资料，患眼均于玻璃体切割术前5 d行后Tenon囊下注射TA混悬液40 mg（0.4 ml），注药后观察葡萄膜的炎性反应。使用Goldmann眼压计和B型超声仪观察注药前及注药后5 d患眼眼压、脉络膜脱离高度及脱离范围的变化，同时监测血压及血糖的变化，并于注药5 d后行玻璃体切割术，所有患者术后随访3个月以上。结果行TA的后Tenon囊下注射的22眼葡萄膜炎症状均不同程度减轻；注药前患眼平均眼压为（5.4±2.9）mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），注射TA后5 d患眼平均眼压为（8.2±4.3） mmHg，眼压上升2.8 mmHg，差异有统计学意义（t＝3.430，P〈0.01）。注药前患眼平均脉络膜脱离高度为5.2（3.1，6.6）mm，注药后5 d平均脉络膜脱离高度为0.9（0，3.8）mm，脉络膜脱离高度显著降低，差异有统计学意义（Z＝－4.198，P〈0.01）。注药前患眼平均脉络膜脱离范围为12（10，12）个点位，注药后5 d平均脉络膜脱离范围为3（0，6）个点位，脱离范围显著下降，差异有统计学意义（Z＝－4.124，P〈0.01）。患者注药前后血糖、血压变化的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。术眼术前、术后1个月和3个月LogMAR视力分别为2.14±0.46、1.29±0.57和1.17±0.55，术后视力较术前明显好转，总体比较差异有统计学意义（F＝22.060，P〈0.001）。视网膜复位率为95.5%。7眼术后出现高眼压，其中5眼使用局部降眼压药物治疗后恢复，2眼药物取出后眼压恢复正常。结论RD/CD术前行TA后Tenon囊下注射能减轻术眼葡萄膜炎反应，升高眼压及降低脉络膜脱离，对血糖、血压影响小。

抗青光眼术后滤过泡瘢痕化组织人Tenon囊成纤维细胞的生长特性

背景 抗青光眼滤过术后瘢痕组织中的主要细胞成分是人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）,探讨滤过泡瘢痕组织中HTFs的生长特性可为抗青光眼滤过术后预防瘢痕形成的研究提供实验基础. 目的 研究抗青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化组织中HTFs的体外生长特性. 方法 收集因抗青光眼小梁切除术后滤过泡瘢痕化行二次手术的患者8例8眼的Tenon囊组织（4 mm＆#215;5 mm）,同期以同样的取材方法收集行斜视矫正术患者8例8眼的正常Tenon囊组织.采用组织块贴壁法将Tenon囊组织进行原代培养,用鼠抗人波形蛋白细胞免疫荧光法鉴定培养的HTFs,并用巢式PCR法检测培养的HTFs中是否受到支原体的污染.分别于第0、4、7、11、14天以发光法细胞活力检测HTFs,并绘制各组细胞的生长曲线,计算细胞群体倍增时间（PDT）.比较瘢痕组和正常组HTFs形态学和PDT的差异;将瘢痕组第5代与第15代HTFs的形态及PDT进行比较,评价细胞传代生长特性的稳定性. 结果 HTFs原代培养1～2周达到融合,呈长梭形,形态符合HTFs,传代细胞4～6 d达到融合.瘢痕组与正常组HTFs的生长特性相近,对鼠抗人波形蛋白抗体呈阳性反应,PCR检测未见支原体反应条带.瘢痕组和正常组HTFs的PDT分别为（20.54±3.51）h和（18.86±2.91）h,差异无统计学意义（t=0.634,P=0.561）.细胞培养后第4、7、11和14天,瘢痕组HTFs的细胞数与正常组比较差异均无统计学意义（t=2.663,P=0.081;t=0.194,P=0.863;t=3.338,P=0.053;t=0.627,P=0.565）,2个组的HTFs随培养时间的延长显示出一致的增生曲线.瘢痕组第5代和第15代细胞PDT分别为（20.54±3.51）h及（22.84±4.15）h,差异无统计学意义（t=0.733,P=0.505）;第5代与第15代间细胞生长曲线可见其增生能力均稳定,两代间HTFs在各时间点的细胞数差异均无统计学意义（t=1.528,P=0.235;t=0.269,P=0.786;t=1.954,P=0.139;t=0.730,P=0.506）.结论 抗青光眼术后滤过泡瘢痕化患者的HTFs体外培养生长状态良好,增生能力稳定,是进行青光眼术后滤过区抗纤维化研究的良好靶细胞.

转化生长因子-β2诱导人Tenon囊成纤维细胞转化及其在瘢痕形成中的作用

背景研究表明转化生长因子-β2（TGF-β2）能够促进瘢痕形成，但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患者的Tenon囊组织，并用组织块培养法在含质量分数10％胎牛血清的DMEM中培养，培养的细胞贴壁后达到70％～80％亚融合状态时更换为无血清培养基饥饿培养24h，然后分别加入质量浓度1、2、5、10、20Ixg／LTGF-β2诱导HTFs24h，另用2tzg／L或5μg／LTGF-β2 诱导HTFs6、24、48、72h，阴性对照组培养基中不加TGF-β2 用Westernblot法检测HTFs中α-平滑肌肌动蛋白（n—SMA）和pSmad2蛋白的表达，采用细胞免疫荧光技术检测“-SMA及纤维状肌动蛋白（F—actin）表达的定位，采用凝胶收缩实验检测培养细胞收缩力的变化。结果不同质量浓度TGF—B，组HTFs中0I—SMA表达的强度均明显强于阴性对照组，2tzg／L、5μg／LTGF—B，作用24～48h后HTFs中d—SMA表达强度达峰值，10μg／L、20μg／LTGF-β2组较2μg／L、5μg／LTGF-β2组α—SMA蛋白表达强度减弱。对照组HTFs中有少量α—SMA及F—actin表达，1、2、5μg／LTGF-β2组d—SMA及F—actin荧光表达明显增强，阳性细胞数明显增加，10μg／LTGF-β2组α—SMA及F-actin荧光表达较低质量浓度组减弱。2μg／LTGF-β2作用后pSmad2表达强度明显强于PBS组和FBS组，在作用后30rain～2h表达较强，2h后开始出现下降。对照组HTFs收缩凝胶面积所占原面积的百分数为（78．00-3．13）％，1、2、5、10tzg／LTGF-β2组分别为（63．88±1．78）％、（20．69±O．65）％、（19．49±O．54）％、（16．24~0．84）％，HTFs收缩凝胶面积占原面积的百分数随着TGF-β2质量浓度的增加而明显增加（F组别=859．400，P=0．000）。结论TGF-β2可诱导成纤维细胞转分化，一定程度上其作用呈质量浓度依赖性和时间依赖性，且细胞收缩力随质量浓度的增加而增强，可能是青光眼滤过术后滤过通道建立失败的重要机制。

汉防己甲素抑制人眼Tenon囊成纤维细胞的凋亡效应

目的研究汉防己甲素(Tet)抑制人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)的凋亡效应。方法用组织块混合消化液培养法体外培养人眼TCFs,并对培养的传代细胞进行形态学鉴定。通过透射电镜、TUNEL法和流式细胞仪观察Tet抑制人眼TCFs的凋亡作用。结果人眼TCFs体外生长良好。透射电镜下见Tet处理后的人眼TCFs细胞质固缩,呈现凋亡表现;TUNEL法可见Tet组出现大量的阳性凋亡细胞;流式细胞仪检测TCFs经Tet作用后G0/G1期细胞减少22.2%,S期细胞增加20.53%,G2/M期细胞增加1.6%,Tet抑制TCFs细胞周期于G1期,Tet组凋亡率明显高于对照组(P=0.000)。结论Tet可以诱导人眼TCFs发生凋亡,进而发挥其抑制增生的作用。

汉防己甲素对体外人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制效应

目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人眼Tenon囊成纤维细胞(Tenon’s capsule fibroblasts,TCFs)的抑制效应。方法:用组织块和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞,并对培养的传代细胞进行形态学的鉴定。采用MTT法检测不同浓度的汉防己甲素(10-4,10-5,10-6,10-7mol/L)及0.2g/L丝裂霉素(MMC)对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。结果:人眼Tenon成纤维细胞体外生长良好,经光镜和免疫组化观察证明该细胞为成纤维细胞。MTT法证实,随着Tet药物浓度的增大,TCFs增生活性降低,对应的TCFs抑制率升高。结论:Tet对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用。

后Tenon囊下注射曲安奈德辅助全视网膜光凝治疗糖尿病视网膜病变

目的评价全视网膜光凝前行后Tenon囊下注射曲安奈德在治疗糖尿病视网膜病变上的临床疗效及安全性。方法采用随机、双眼平行对照的研究方法。筛选于我院就诊的糖尿病视网膜病变患者,将双眼患有增生型糖尿病视网膜病变或严重非增生型糖尿病视网膜病变的24例(48眼)患者分为两组,对照组仅行全视网膜光凝,试验组在行全视网膜光凝前1周先行后Tenon囊下注射曲安奈德20mg。6个月后观察最佳矫正视力(logMAR)、视网膜厚度以及眼压的变化。结果治疗后6个月与治疗前视力相比较,对照组最佳矫正视力有所降低,而试验组有所提高,两组治疗后6个月最佳矫正视力相比差异有统计学意义(P=0.04)。治疗后6个月与治疗前视网膜厚度相比较,对照组黄斑中心凹厚度增加了32.8μm,试验组降低了9.7μm,两组相比差异有统计学意义(P=0.03);对照组旁中心凹厚度增加了23.2μm,试验组降低了5.1μm,两组相比差异有统计学意义(P=0.04);对照组中心凹周边厚度增加了18.3μm,试验组增加了0.5μm,两组相比差异无统计学意义(P=0.06)。随访期内,试验组和对照组眼压波动均在正常范围之内。结论全视网膜光凝前行后Tenon囊下注射20mg曲安奈德能有效降低糖尿病性黄斑水肿,是预防由视网膜激光引起的视力下降安全有效的方法。

人眼Tenon囊成纤维细胞体外培养及生长特性的比较

目的观察在相同培养条件下不同组织来源的人眼Tenon囊成纤维细胞的生长特性,探讨不同组织来源对细胞培养的影响。方法分别取正常人、青光眼患者及翼状胬肉患者Tenon囊组织,均采用组织块贴壁法培养成纤维细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养基,于相同培养条件下进行离体培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况并拍照记录,分别取传代第3、4、5代的成纤维细胞,于接种后第3天行MTT试验检测细胞增殖活力。结果青光眼组、翼状胬肉组较正常人组Tenon囊成纤维细胞离体培养细胞生长无明显差异,培养细胞2 d至6 d处于对数生长期。结论青光眼、翼状胬肉患者Tenon囊组织离体培养成纤维细胞的生长及增殖特性较正常人无明显差异,提示对相关疾病的研究及药物治疗的评价应以体内实验为主要参考,才能准确进行评估。

HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究

目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是HSV-TK/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。

小檗胺抑制兔Tenon囊和滤过道内成纤维细胞增殖的实验研究

目的:研究钙调素拮抗剂小檗胺(berbamine,BER)对兔Tenon囊成纤维细胞和兔小梁切除术后滤过道内成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:体外培养兔Tenon囊成纤维细胞,经不同浓度BER处理不同时间后,细胞计数Kit8(CCK8)法检测BER对兔Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测其凋亡率及细胞周期的变化。HE染色检测BER对兔小梁切除术后滤过道内成纤维细胞增殖的抑制作用。结果:兔Tenon囊成纤维细胞经不同浓度BER处理不同时间后细胞增殖受到抑制,并呈时间剂量依赖性。流式细胞仪检测发现BER处理后兔Tenon囊成纤维细胞呈现G1期阻滞,细胞凋亡率明显增加,20mg/LBER处理9h,细胞凋亡率从0.64%增加到31.86%。HE染色显示BER显著抑制兔小梁切除术后滤过道内成纤维细胞的增殖。结论:小檗胺在体内外均能抑制成纤维细胞的增殖,其可能是通过诱导细胞凋亡方式抑制兔Tenon囊和滤过道内成纤维细胞的增殖。

MTT法检测干扰素-γ对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制效应

目的 :探讨重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法 :用组织块培养法和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞。采用MTT法检测不同浓度的重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。结果 :用上述两种方法成功培养出正常人眼Tenon囊成纤维细胞。重组人IFN γ对人眼Tenon囊成纤维细胞具有抑制作用 ,1× 10～ 1× 10 6IU/mlIFN γ浓度范围的抑制率为 2 0 2 %～43 5 % ,1× 10 6UI/mlIFN γ作用 48h后 ,与对照组相比 ,细胞数量明显减少 ,细胞皱缩 ,但未见细胞死亡或漂浮。结论 :IFN γ对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用。

汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞中bax、bcl-2、TGF-β2 mRNA表达的影响

目的观察汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(tenon's capsule fibroblasts,TCFS)中bax、bcl-2、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将体外培养的第3代TCFS分别置于浓度为10-5mol/LTet的培养液和1640培养液中培养48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞中bax、bcl-2和TGF-β2 mRNA的表达变化。结果同对照组比较,Tet实验组中bax mRNA的表达量明显升高,bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论一定浓度的汉防己甲素可以通过降低bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量,同时提高bax mRNA的表达量来抑制TCFS的增殖,并可诱导其凋亡,可能成为一种潜在的抗青光眼滤过瘢痕药物。

玻璃体腔注射康柏西普联合后Tenon囊注射曲安奈德治疗弥漫性糖尿病性黄斑水肿

目的探讨玻璃体腔注射康柏西普联合Tenon囊注射曲安奈德治疗弥漫性糖尿病性黄斑水肿的效果。方法选取了从2015年7月到2016年12月期间在南昌爱尔眼科医院及南昌大学第一附属医院进行弥漫性糖尿病性黄斑水肿治疗的36例(36眼)患者。患者全部行全视网膜光凝术并且经4次激光治疗结束后2周。患者随机分为两组:实验组(18眼)及对照组(18眼)。实验组给予玻璃体腔注射康柏西普联合Tenon囊注射曲安奈德的临床治疗。对照组给予单纯玻璃体腔注射康柏西普的临床治疗。对两组治疗效果以及治疗后出现的术后不良反应的进行对比评估。结果我们发现通过两组治疗后,患者黄斑中心凹厚度均明显降低,但是联合治疗的效果更好。在经过1个月的治疗后,实验组的患者获得了最佳矫正视力。而对照组的患者要经过3个月的治疗才能获得。两组在治疗后,眼压均明显升高,而联合治疗组的眼压升高更明显。结论玻璃体腔注射康柏西普联合Tenon囊注射曲安奈德是一种安全并且更为有效的治疗方式,副作用小,能够在较短时间内明显改善视力。

CCK-8检测法研究槲皮素对人Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的观察槲皮素(quercetin,QU)对体外培养的(human Tenon’s capsule fibro-blasts,HTCF)增殖的抑制作用。方法体外培养HTCF。配制QU溶液,其浓度依次为20μmol·L-1、40μmol·L-1、60μmol.L-1、80μmol·L-1、100μmol·L-1,采用活细胞计数试剂盒CCK-8检测不同浓度QU作用下HTCF的增殖,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果不同药物浓度HTCF形态学检测显示:50μmol·L-1QU作用48h后,细胞收缩,胞核固缩,聚集在核膜边缘;100μmol·L-1QU作用48h后,细胞未见增殖,出现凋亡小体,细胞的增殖几乎完全被抑制。细胞生长抑制实验的结果显示:QU在各浓度组对体外培养的HTCF均有抑制作用,抑制效应呈剂量时间依赖关系。结论QU能抑制体外培养的HTCF的增殖,且该作用呈剂量和时间依赖性。

TGF-β_2刺激人Tenon囊成纤维细胞增殖,表达CTGF和合成Fn

目的:研究转化生长因子(TGF-β2)和结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化中的作用。方法:用不同浓度的TGF-β2刺激HTF,然后用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测CTGF和Fn的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:TGF-β22μg/L到5μg/L范围有剂量依赖性地促进HTF的细胞增殖,CTGF的表达和Fn的合成的趋势(P<0.01),但0.5μg/L,1μg/L与正常对照组对细胞的增殖作用差别无显著性,5μg/L与10μg/L增强细胞的增殖作用也无显著性差异(P>0.05)。结论:TGF-β2能够明显地促进HTF细胞增殖,并增强其下游介质(CTGF)的表达和合成细胞外基质-纤维连接蛋白(fibronetin,Fn)。

人Tenon囊成纤维细胞的体外培养及增殖能力研究

目的:离体培养人Tenon囊成纤维细胞(HTF)并观察细胞增殖能力。方法:取斜视患者手术切除Tenon囊组织进行成纤维细胞原代培养,培养的细胞通过免疫荧光染色法进行鉴定。CCK-8法描述细胞生长曲线,测定细胞活力。流式细胞术分析细胞周期,计算增殖指数。结果:通过组织块法成功培养出HTF。不同代次原代培养的HTF之间增殖能力无明显统计学差异(P>0.05)。结论:HTF在体外易于培养,经过数次传代,增殖能力稳定,是进行Tenon囊抗纤维化研究的良好靶细胞。

结缔组织生长因子对人Tenon囊成纤维细胞中E-cadherin蛋白表达的促进作用

背景 青光眼滤过手术后滤过通道的瘢痕化是手术失败的主要原因,其主要病理机制是成纤维细胞的异常增生、间质-上皮转分化及细胞外基质的重塑.结缔组织生长因子（CTGF）是促进瘢痕形成的关键因子,而CTGF是否能促进人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的间质-上皮转分化尚不清楚.目的 观察CTGF对HTFs间质-上皮转分化的影响.方法 用体积分数10％胎牛血清的DMEM高糖型培养液进行HTFs体外常规培养和传代,取3～6代细胞用于实验.将培养的HTFs分为空白对照组和CTGF处理组,空白对照组用DMEM完全培养液培养细胞,CTGF处理组在培养液中加入CTGF,使终质量浓度为50 ng/ml.细胞培养后48 h,采用细胞免疫荧光染色技术鉴定HTFs中上皮钙黏素（E-cadherin）蛋白的表达,采用Western blot法对HTFs中E-cadherin蛋白的表达量进行检测.结果 空白对照组及CTGF处理组HTFs均生长良好,呈长梭形,漩涡状排列.细胞免疫荧光染色显示,CTGF处理组HTFs细胞质呈红色荧光,细胞核呈蓝色荧光;空白对照组HTFs仅见DAPI蓝染的细胞核,无E-cadherin表达的红色荧光.Western blot法检测结果显示,空白对照组HTFs中E-cadherin蛋白无表达,而CTGF处理组HTFs中E-cadherin蛋白的相对表达量为0.63±0.08.结论 间叶组织来源的成纤维细胞本身不表达E-cadherin,在CTGF的刺激下成纤维细胞能够表达E-cadherin,CTGF促进HTFs的间质-上皮转分化.

特异性转化生长因子-β_2 shRNA对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)特异性短发夹RNA(shRNA)对人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人TCFs。MTT比色法检测细胞的增生情况;ELISA法检测shRNA对TGF-β2蛋白表达的抑制作用。结果 TGF-β2shRNA转染组的细胞增生及TGF-β2蛋白的表达均受到抑制。转染24、48、72h后MTT比色法检测显示,TGF-β2shRNA转染组培养的Tenon囊的成纤维细胞的增生值分别为0.5426±0.05、0.5210±0.03、0.4055±0.04,明显低于阴性对照组的0.5655±0.03、0.5378±0.03、0.5268±0.04,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=54.691,P=0.000;Ftime=66.888,P=0.000)。ELISA法检测显示,TGF-β2shRNA转染组TGF-β2蛋白的表达水平下降,24、48、72hTGF-β2蛋白的表达量分别为(543.58±25.32)、(400.26±30.74)、(202.72±23.24)ng/L,明显低于阴性对照组的(659.78±20.95)、(547.45±24.65)、(442.87±17.43)ng/L及空白组的(721.75±30.19)、(756.61±30.19)、(787.60±18.37)ng/L,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=163.082,P=0.000;F时间=31.498,P=0.000)。结论 TGF-β2特异性shRNA能显著抑制人TCFsTGF-β2的表达,载体介导的TGF-β2特异性shRNA对眼前节术后的抗瘢痕化治疗具有潜在的可能性。

转化生长因子β2对人眼Tenon囊成纤维细胞中赖氨酰氧化酶家族表达的诱导作用

背景研究表明，转化生长因子β2（TGF-β2）促进Tenon囊成纤维细胞（TFs）的活化，在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用，但其作用机制尚未完全明了。赖氨酰氧化酶家族（LOXs）与细胞外基质重塑有关，了解青光眼术后滤过泡的纤维化过程中TGF-β2与LOXs活化的关系对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的防治具有重要意义。目的观察TGF-β2对体外培养的人眼TFs中LOXs蛋白表达变化的影响。方法将培养的第4～8代人TFs分为正常对照组和不同质量浓度TGF-β2培养组，分别在细胞培养液中添加终质量浓度为2、4、8和16ng／ml TGF-β2继续培养24h，采用Western blot法测定不同质量浓度TGF-β2培养组细胞中LOXs蛋白表达的变化，确定最适TGF-β2刺激质量浓度。用4ng／ml TGF-β2分别处理培养的TFs6、12、24和48h，采用Western blot法测定各时间点细胞中LOXs蛋白表达的变化。采用细胞免疫荧光法分别检测正常对照组和4ng／ml TGF-β2培养组TFs中LOX蛋白的表达及其在细胞中的分布。结果Western blot法检测显示，正常对照组及2、4、8和16ng／ml TGF-β2培养组人TFs中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白的表达强度均随TGF-β2质量浓度的升高而增加，各组间细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3和LOXL4蛋白相对表达量的总体比较，差异均有统计学意义（F=37．338、13．438、31．067、11．767、15．167，均P〈0．01）。细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白相对表达量的升高呈TGF-β2剂量依赖性。正常对照组及4ng／ml TGF-β2刺激人TFs后6、12、24和48h组，细胞中LOXL2蛋白的相对表达量分别为0．68±0．07、1．09±0．10、1．32±0．07、1．50±0．06和1．89±0．12，其表达强度呈时间依赖性，总体比较差异有统计学意义（F=82．832，P=0．000）。正常对照组人TFs中LOX蛋白表达强度较弱，主要位于细胞质中，TGF-β2培养组细胞中LOX蛋白的表达强度明显强于正常对照组，且表达LOX蛋白的细胞增多。结论正常人TFs中可见LOXs呈低表达，TGF-β2以剂量和时间依赖的方式上调人TFs中LOXs蛋白的表达。这个结果为青光眼术后滤过泡纤维化的相关防治研究提供了实验依据。