应用双色间期FISH技术中宫颈脱落细胞取材及制片方法的探讨

目的在双色间期荧光原位杂交技术(FISH)中探讨采集宫颈脱落细胞样本及制片的最佳方法。方法采集在北京大学人民医院门诊就诊174例患者的宫颈脱落细胞,应用新鲜细胞直接涂片(60例)、生理盐水制片(31例),TCT剩余液体直接制片(37例)、TCT盐水制片(30例)和TCT低渗制片(16例)五种取材制片方法;并应用双色间期FISH法,检测宫颈脱落细胞的TERC基因表达率,对比取材制片的最佳方法。结果在直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、TCT盐水制片法和TCT低渗法五种制片过程中,TERC基因的杂交成功率分别是55.0%、61.3%、37.8%、53.3%和81.3%,其中TCT低渗法杂交成功率与TCT制片组比较,有显著差异(P<0.05),与其他方法比较,无明显差异(P>0.05);5种制片方法的玻片背景清晰比例分别为38.3%、54.8%、35.1%、60%和75%,各组之间有明显差异(P<0.05);5组的无/少信号比例分别为18.3%、16.1%、37.8%、23.3%和18.8%,其中新鲜制片的直接涂片法和盐水制片法与TCT直接制片法比较,有明显差异(P<0.05),与其他方法比较无差异(P>0.05)。结论在应用双色间期FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因时,以TCT低渗制片和新鲜细胞盐水制片操作方法简单快速,杂交成功率最高。

宫颈尖锐湿疣中hTERC基因扩增和CD105表达的意义

目的:探讨h TERC基因扩增和CD105在宫颈尖锐湿疣(candyloma acuminatum,CA)中的表达及其临床意义。方法:分别采用免疫荧光原位杂交(FISH)和免疫组化方法检测宫颈CA组织中h TERC基因扩增和CD105的表达。67例宫颈CA中单纯性CA 31例,CA-CINⅠ级19例,CA-CINⅡ级11例,CA-CINⅢ级6例;宫颈癌35例;正常宫颈黏膜24例作为对照。结果:宫颈正常黏膜、宫颈CA和宫颈癌中h TERC基因扩增率分别为0.0%、25.4%和80.0%,差异有统计学意义(P<0.01);CD105标记的微血管密度(MVD)亦存在明显差异(P<0.01)。宫颈CA中,h TERC基因扩增率和MVD呈显著正相关(P<0.05),均随CIN级别的升高而增加,其中CA-CINⅠ级与CA-CINⅡ级之间差异有统计学意义(P<0.01);两者表达在复发组均显著高于未复发组(P<0.05)。结论:h TERC基因扩增和CD105表达在宫颈CA复发并向高级别CIN转化过程中扮演着重要角色,对宫颈CA患者检测h TERC基因扩增和CD105表达有助于临床筛查高危CA患者。

FISH技术检测TERC基因在子宫颈上皮内瘤变1级与2级鉴别诊断中的实用价值

目的采用FISH技术检测TERC基因在子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)不能明确1级或2级(CIN1/2)病变组织中的扩增,探讨其在CIN分级中的临床病理实用意义。方法选取子宫颈组织标本42例,其中正常子宫颈鳞状上皮20例,CIN1/2级22例(其中初步诊断1级8例,2级14例)。采用FISH技术检测石蜡包埋组织中TERC基因的扩增情况。结果正常子宫颈鳞状上皮中TERC基因无扩增,CIN1/2级组织中TERC基因的扩增率为22.7%(5/22),77.3%(17/22)的TERC基因无扩增;其中初步诊断1级8例,1例TERC基因扩增;初步诊断2级14例,4例TERC基因扩增,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在石蜡包埋组织切片难以确定CIN1/2级时,应用FISH技术进行TERC基因检测,TERC基因扩增者可考虑为CIN2级,建议临床积极处理;无扩增者,考虑为CIN1级,可保守处理;FISH技术具有临床病理实用价值。

维、汉妇女宫颈癌患者感染HPV亚型和TERC基因扩增的关系

目的探讨新疆地区维吾尔族、汉族妇女宫颈癌感染人乳头瘤病毒(HPV)不同亚型及人染色体端粒酶基因(TERC)扩增差异。方法采用导流杂交基因芯片技术检测维吾尔族和汉族各200例宫颈癌患者的21种HPV亚型感染的分布情况。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测23例维吾尔族和22例汉族宫颈癌患者的TERC基因扩增的情况。结果①维、汉族宫颈癌的HPV感染谱不同。维吾尔族宫颈癌中HPV高危亚型感染排序由高到低主要是:HPV16、58、18、52和31等亚型;而汉族宫颈癌的排序是:HPV16、31、58、18和52等亚型。②维吾尔族宫颈癌中HPV亚型多重感染者为43例,占21.83%;汉族宫颈癌组织中多重感染者为27例,占13.78%(P<0.05)。③维、汉族宫颈癌TERC基因平均扩增倍数,在HPV各亚型感染组间差异无统计学意义,但在各族患者中HPV多重感染和单一感染其差异均有统计学意义(P<0.05)。结论维吾尔族宫颈癌患者HPV高危亚型多重感染较汉族高;在各族患者中多重HPV高危亚型感染较单一亚型感染者有更多TERC基因扩增。

宫颈脱落细胞不同制片方法对FISH检测TERC基因实验结果的影响

目的探讨利用双色间期荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）检测人宫颈脱落细胞端粒酶（TERC）基因不同制片的最佳方法。方法采集门诊就诊的114例患者的宫颈脱落细胞，分另q采用新鲜细胞直接涂片（45例）、液基薄层细胞学（TCT）剩余液体直接制片（37例）和TCT低渗制片（32例）三种取材制片方法，应用双色间期FISH法检测宫颈脱落细胞的TERC基因表达，对比取材刺片的最佳方法。结果在直接涂片法、TCT制片法和TCT低渗法三种制片过程中，TERC基因的杂交成功率分别是55．1％，34．7％，81．3％，其中TCT低渗组杂交成功率明显高于其他两组，差异有统计学显著性意义（P〈0．05）。直接涂片法、TCT制片法、TCT低渗制片法的平均裸核细胞比例分别为24％，15％，62％，TCT低渗法高于其他两种方法，与其他两组比较差异有统计学显著性意义（P〈0．05）。三种制片方法的玻片背景清晰度比例分别为33．3％，35．2％和68．8％。结论应用双色间期FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因，以TCT低渗制片法简便快速，杂交成功率最高。

用石蜡切片检测端粒酶RNA基因对诊断与鉴别子宫颈上皮内瘤变1级与2级的意义

目的探讨在石蜡切片上用FISH技术检测TERC基因对诊断鉴别诊断CIN 1级与CIN 2级的实用意义。方法选取手术切除及活检的子宫颈组织,有效样本137例,其中正常宫颈鳞状上皮组20例,CIN 1级组46例,CIN 2级组49例,HE染色难以确定CIN 1/CIN 2级组22例。采用FISH技术在石蜡包埋组织上检测TERC基因拷贝数增加的情况。结果正常宫颈鳞状上皮中无TERC基因拷贝数的增加,CIN 1级组中TERC基因扩增率15.2%(7/46),CIN 2级组中TERC基因扩增率47%(23/49),并且出现大量的三倍体、四倍体及非整倍体扩增,2组之间差异有统计学意义(P<0.05)。CIN 1/CIN 2级组中TERC基因扩增率27.8%(5/22)。组间两两比较:正常宫颈鳞状上皮组与CIN 1级组组间比较差异无统计学意义(P>0.05);正常宫颈鳞状上皮组与CIN 2级组组间比较差异有统计学意义(P<0.05);CIN 1级组与CIN 2级组组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。TERC基因扩增在鉴别CIN 1级与CIN 2级中的敏感度为46.9%,特异度为84.7%,准确度为65.0%,阳性预测值为76.6%,阴性预测值为60%。结论当组织学上鉴别CIN 1级与CIN 2级有困难时,在石蜡包埋组织切片上应用FISH技术检测TERC基因,发现拷贝数增加可有助于CIN 2级的确诊,也预测其有恶性进展的风险;反而无TERC基因异常,可确认为CIN1级,无恶性进展风险。TERC基因检测具有实用价值及应用前景。

人乳头瘤病毒生物状态和人端粒酶RNA组分基因扩增与宫颈病变的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)生物状态和人端粒酶RNA组分(hTERC)基因扩增与子宫颈病变之间的关系。方法:应用原位杂交(ISH)和荧光原位杂交(FISH)方法,分别检测114例宫颈石蜡包埋组织HPV生物状态及hTERC基因的异常扩增。结果:在非CIN、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌宫颈组织标本中hTERC基因表达率分别为2.78%、10.00%、50.00%、78.37%和86.67%,差异有统计学意义(χ2=55.56,P<0.001)。随着病变程度升高,HPV整合发生率逐渐升高(0.0%、10.00%、18.75%、72.97%、80.00%)。不同程度的宫颈病变HPV整合率有显著差异(χ2=52.49,P<0.001)。其中,非CIN组与CINⅢ、宫颈癌组之间差异有统计学意义,CINⅠ与CINⅢ、宫颈癌组之间差异有统计学意义,CINⅡ与CINⅢ、宫颈癌组之间差异有统计学意义。HPV DNA整合情况和hTERC基因扩增情况一致,用两种方法预测宫颈癌的效果一致。结论:HPV生物状态和TERC基因扩增与子宫颈病变的发生发展相关。HPV感染与HPV整合、端粒酶激活有时序性差异,但HPV整合和hTERC基因扩增的时序性和关联性有待进一步探讨。

先天性角化不良研究进展

先天性角化不良是一种少见的先天遗传性皮肤病,其临床三联征包括:甲板营养不良,口腔或阴道等可出现白斑,皮肤异色症样的色素沉着。先天性角化不良是与编码角化不良蛋白基因、编码端粒酶的RNA组份基因、编码端粒酶的逆转录酶基因突变及其他未确认的致病基因突变引起的基因病,其遗传方式有:X-性联隐性遗传、常染色体显性遗传及常染色体隐性遗传。治疗上还缺乏有效的治疗方法。文中从先天性角化不良的发病机制、突变类型、临床表型以及治疗方面综述先天性角化不良的研究进展。

FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因

目的利用荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈病变患者宫颈脱落细胞中TERC基因,评价该技术诊断价值。方法选择2007年12月至2009年4月宫颈上皮内瘤变(CIN)患者91例和健康对照者20例,利用FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因,计数不平衡扩增细胞,比较其在各级宫颈病变中的表达差异。结果对照组、CINⅠ/湿疣、CINⅡ、CINⅢ及以上患者的宫颈脱落细胞中,每100个细胞中TERC基因不平衡扩增细胞分别为(0.1±0.3)个、(0.6±1.3)个、(1.7±2.1)个、(2.5±4.4)个。CINⅡ及以上病变组TERC基因不平衡扩增与对照组和CINⅠ/湿疣组有显著性差异(P=0.018,P=0.002)。结论随宫颈病变加重,TERC基因不平衡扩增细胞增加,FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因扩增可以辅助诊断宫颈癌前病变。

荧光原位杂交检测宫颈脱落细胞hTERC基因实验方法比较观察

目的:探讨荧光原位杂交技术检测端粒酶基因(hTERC)实验方法的最佳方案。方法:采集海医附院收治的140例患者的宫颈脱落细胞,分别应用液基取材刷、无菌棉签取材法;生理盐水低渗、TCT低渗、直接取液滴片、TCT直接低渗4种制片方法;水浴和直接消化法;甲酰胺法和共变性法,通过检测宫颈脱落细胞hTERC基因表达成功率,对比实验方法的最佳方案。结果:取材方法中液基取材刷与无菌棉签的细胞数量满意率分别为95.5%、14.3%,2种方法差异有统计学意义(P<0.05);生理盐水低渗、TCT低渗、直接取液滴片、TCT直接低渗4种方法杂交成功率分别是80.0%、84.8%、46.2%、82.1%,其中直接取液滴片与其他法差异有统计学意义(P<0.05),其他方法之间比较差异无统计学意义(P>0.05);2种消化法中水浴和直接法杂交成功率分别为88.9%、94.1%,差异无统计学意义(P>0.05),杂信号比例分别为16.7%、45.6%,差异有统计学意义(P<0.05);2种变性法中甲酰胺法和共变性法杂交成功率分别为72.3%、96.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:荧光原位杂交技术检测宫颈脱落细胞hTERC基因时,以液基取材刷取材细胞数量多,TCT低渗方法制片效果最好,水浴法和共变性杂交成功率最高。

TERC基因在肺鳞状细胞癌中的表达

目的:探讨端粒酶RNA(TERC)基因在肺鳞状细胞癌组织中的表达。方法:RT-PCR法检测TERC基因水平的表达情况。结果:肺鳞状细胞癌组织中TERC基因的表达高于癌旁正常组织。结论:TERC基因在肺鳞状细胞癌组织中表达上调,表明其可能参与了肺癌的发生发展,为恶性肿瘤的早期诊断和治疗提供理论支持。

FISH技术检测TERC基因在CIN等级诊断中的应用

目的:研究FISH技术检测TERC基因在子宫颈上皮内瘤变1级与2级鉴别诊断中的价值。方法:选取50例宫颈组织标本为研究对象,均采用FISH技术检测,分析TERC基因的扩增情况。结果:在正常的子宫颈鳞状上皮中,TERC基因没有扩增,20例初步诊断为2级的患者中,有8例TERC基因扩增,10例初步诊断为1级的患者中,有1例TERC基因扩增,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:采用石蜡包埋组织切片难以对CIN1/2级进行鉴别时,要采用FISH技术检测,如果TERC基因扩增,则判定为CIN2级;TERC基因不扩增,则判定为CIN1级。

FISH技术检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤样病变的TERC基因

目的:检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤样病变中的3号染色体和TERC基因的扩增情况。方法:采用双色荧光原位杂交技术(FISH)以hTERC/CSP3 DNA探针检测64例宫颈癌及36例宫颈上皮内瘤样病变脱落细胞中的TERC基因的表达率。结果:CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌TERC基因阳性表达率分别为16.67%(2/12)、50.00%(4/8)、81.25%(13/16)、95.31%(61/64),正常组、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌的TERC基因阳性量分别为2.3±1.4,3.8±2.9,7.4±2.4,17.8±16.9,47.6±26.2,阳性率随着病变程度的加重而增高。宫颈癌病理检查与荧光原位杂交法对TERC基因阳性情况表达比较,无统计学差异。正常组与CINⅠ、CINⅡ,CINⅠ与CINⅡ基因阳性表达量比较均无统计学意义(P>0.05);而正常组与CINⅢ,CIN I与CINⅢ比较有明显统计学差异(P<0.001),CINⅡ与CINⅢ比较有统计学差异(P<0.05)。结论:FISH技术能定量检测TERC基因并可鉴别细胞的癌变,可作为宫颈癌的诊断手段之一。检测TERC扩增可以帮助确定低分化病变的高风险和降低细胞学检查的假阴性。

h-TERC基因及c-MYC基因的表达及其与HPV感染宫颈病变的相关性

目的 研究h-TERC及c-MYC的表达及其与HPV感染、宫颈病变的相关性,借此寻找更为有效且实用的宫颈癌筛查方法。方法 选取2010年8月至2011年12月在上海交通大学医学院附属仁济医院妇科门诊就诊者共1000例,分别行TCT检测、HPV-DNA检测(SPR法)、h-TERC和c-MYC基因检测(FISH法),对任一结果阳性者行阴道镜及宫颈病理活检,以病理结果为诊断金标准。结果 1000例中TCT异常占10.6%;HPV异常占11.2%;h-TERC基因异常占6.4%;c-MYC基因异常占5.6%。213例按要求行阴道镜及宫颈活检,结果提示宫颈慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌发生率分别为:74.6%、14.6%、6.6%、3.3%和0.9%。相应的h-TERC阳性率分别为18.2%、58.1%、64.3%、85.7%、100.0%;c-MYC阳性率分别为20.1%、35.5%、50.0%、57.1%、100.0%;HPV阳性率分别为45.3%、67.7%、78.6%、85.7%、100.0%。随着病理学等级的上升,HPV感染者中h-TERC和c-MYC的阳性率也升高。结论 h-TERC、c-MYC基因扩增与宫颈细胞组织学异常及HPV感染密切相关,可能是较好的宫颈癌筛查指标。

TERC基因对宫颈高级别病变(≥CINⅡ)诊断价值的Meta分析

目的系统评价TERC基因对宫颈高级别病变(≥CINⅡ)的诊断价值。方法计算机检索PubMed、EMbase、e Cochrane Library等数据库,检索时间截至2012年3月31日。按照纳入和排除标准筛选文献、提取资料并根据诊断性试验准确性质量评价工具(QUADAS)评价质量后,采用Meta-Disc 1.4软件进行Meta分析。结果最终纳入12篇文献,共7 894例患者。Meta分析结果显示:TERC基因诊断宫颈高级别病变的合并灵敏度、特异度和诊断比值比分别为0.81[95%CI(0.80,0.82)]、0.83[95%CI(0.82,0.84)]和17.37[95%CI(8.77,34.41)]。结论 TERC基因单独检测宫颈高级别病变的诊断价值中等,可作为临床诊断的一种辅助方法。

阴道脱落细胞检查联合人类染色体末端酶基因、c-myc 检测在宫颈癌诊断中的价值

目的：探讨阴道脱落细胞检查（TCT）结合人类染色体末端酶基因（h-TERC）和 c-myc 检测在宫颈癌中的价值。方法运用免疫荧光原位杂交技术检测近三年来该院宫颈癌患者500例的宫颈脱落细胞中h-TERC 和 c-myc 的表达，将其检测结果与 TCT 检测结果比较，将上述三种结果的任一阳性检测再进行病理学诊断标准来确定，且以病理诊断为准进行分析。结果在所检测的500例患者中，TCT 异常者132例（26.4％），h-TECR 异常者90例（18．0％），c-myc 异常者80例（16．0％），将270例患者进行阴道宫颈活检技术，在这些病例中，宫颈慢性炎者120例，宫颈病变者150例，其中宫颈上皮瘤变 CINⅠ52例（38．2％），CINⅡ50例（36．4％），CIN Ⅲ30例（18．2％），宫颈癌18例（7．3％）。在所检测的病例中，用原位杂交检测了h-TERC 的含量，其检测结果依次为18．1％、45．4％、52．5％、65．9％、100．0％，同样的 c-myc 的结果依次为21.4％、48．9％、56．7％、59．9％、100．0％，随着 TCT 检测结果的病理程度越高，h-TERC 和 c-myc 的表达越高。结论h-TERC 和 c-myc 检测联合 TCT 更能有效地检测宫颈癌患者的病理程度。