成人胶质母细胞瘤TERT启动子和ATRX突变预后价值

目的探究成人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子,α-地中海贫血伴智力低下综合征基因(alpha-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked,ATRX)突变对预后的影响。方法收集2020年至2022年在徐州医科大学附属医院神经外科行手术治疗的82例GBM患者病理及随访资料。TERT启动子区(C228T和C250T)及ATRX突变检测采用多重PCR扩增+二代测序(next generation sequencing,NGS)方法,根据患者HE染色切片的镜下结果将其分为低级别组织形态的GBM和高级别组织形态GBM两组,分析两组GBM患者TERT启动子和ATRX突变率的差异。GBM患者预后的影响因素采用多因素COX回归分析。结果两组GBM患者中TERT启动子突变率(25.0%vs.75.8%,χ^(2)=12.584,P<0.01)存在统计学差异。年龄≤60岁、术中肿瘤全切、术后放疗、化疗、TERT启动子非突变是影响GBM患者预后的独立保护性因素(P<0.05)。结论TERT启动子突变的GBM患者预后较差、临床中常规检测TERT启动子并结合其他分子标记物有助于正确评估GBM患者预后,有较高临床价值。

鼻咽癌易感TERT基因的多种靶microRNA在鼻咽癌患者血清中表达量变化及其临床诊断价值

目的探讨鼻咽癌易感TERT基因多种靶miRNA在鼻咽癌患者血清中含量对临床诊断的价值。方法收集在本医院就诊60例鼻咽癌者及60例健康者外周血,RT-PCR法检测外周血中mir-138、mir-491、mir-181、mir-1207、mir-346、mir-512-5P、mir-299、mir-1266、mir-1182相对表达量差异,分析mir-1182含量与鼻咽癌患者临床病理特征相关性。结果鼻咽癌患者血液中mir-346、mir-512-5P、mir-299、mir-1266、mir-1182含量低于健康对照组,mir-1182差异显著(P<0.01);Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径≥5 cm及癌转移者血清中mir-1182含量分别低于Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径≤5 cm及无转移患者(P<0.05);mir-1182诊断AUC为0.851(95%CI:0.782~0.919),灵敏度65%,特异度93.3%。结论鼻咽癌患者血清中mir-1182含量与肿瘤大小、有无淋巴结转移、TNM分期、病理分期负相关,可见mir-1182有较好诊断效能,具有鼻咽癌临床诊断运用价值。

pGL3-hTERT-tk／GCV对胃癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨重组质粒pGL3-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞的促凋亡作用。方法:以基因工程方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc^+;脂质体Lipofectamine^(TM)2000瞬时转染胃癌细胞系SGC-7901并用GCV干预,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,TUNEL标记和流式细胞术观察转染后胃癌细胞的凋亡;以上实验均以正常肝细胞L-02为对照。结果:经鉴定,重组质粒pGL3-hTERT-tk中tk片段的长度为1100 bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc^+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞SGC-7901,转染效率为(8.2±1.14)%。重组质粒转染胃癌细胞后与GCV共育4 d,细胞的凋亡率为(60.0±1.56)%;被pGL3-hTERT-tk转染的肿瘤细胞细胞周期发生了变化,处于细胞周期早期的细胞大量凋亡,早期凋亡率为(47.1±1.35)%。结论:pGIB-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞有强烈的杀伤作用,但不影响正常细胞的生长,有潜在临床应用前景。

针对c-myc基因的小干扰RNA对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的c-myc、h-tert表达的影响

本研究探讨针对c-myc的小干扰RNA对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞c-myc,h-tert基因和蛋白表达的影响,为白血病的基因治疗提供新方法和靶点。针对c-myc mRNA的第1545-1565靶位点用化学合成法合成siRNA,经转染剂转染入Jurkat细胞。应用RT-PCR及Western blot分别检测c-myc siRNA作用前后c-myc、h-tert基因的mRNA及蛋白表达的变化。结果表明:c-myc siRNA能明显抑制Jurkat细胞的增殖,作用48小时的半数抑制浓度(IC50)约为75nmol/L。c-myc siRNA可引起Jurkat细胞的c-myc、h-tert mRNA和C-MYC、hTERT蛋白表达水平降低。结论:c-myc siRNA明显降低Jurkat细胞c-myc、h-tert基因的mRNA及蛋白表达水平。c-myc siRNA可能是通过抑制c-myc mRNA表达而降低胞内C-MYC蛋白水平。

hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC靶向抗肝癌及旁观者效应机制的研究

目的观察人端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷(hTERT-TK/GCV)联合hTERT-胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)对肝癌细胞株HepG2生长及凋亡的靶向杀伤效应。方法细胞培养,构建pGL3-hTERT-CD质粒,hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC同时转染HepG2细胞和正常肝细胞L-02,用噻唑蓝(MTT)法观察药物浓度对肝癌细胞存活率的影响,用DNA缺口末端标记法(TUNEL)观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响,以及对旁观者效应的观察。结果MTT法显示hTERT启动子驱动下两自杀基因体系可以协同表达于肝癌细胞,当GCV为20μg/ml,5-FC为200μg/ml时,对HepG2细胞的杀伤作用达到最大。TUNEL法显示在肝癌细胞中,自杀基因一被启动子高效表达,产生凋亡小体和明显的细胞凋亡率,转染正常肝细胞无此现象。结论hTERT-TK/GCV联合hTERT-CD/5-FC基因体系能够靶向杀伤肝癌细胞,存在明显的旁观者效应,弥补了基因治疗转染效率不高的问题,便于指导今后的实验和研究。

hTERT-TK／GCV对肝癌细胞生长及凋亡的靶向性影响

背景与目的:自杀基因治疗肿瘤已初见成效,引起了许多研究者的关注,端粒酶有希望成为肝癌基因治疗的理想靶点。本研究探讨hTERT-TK/GCV在体外对肝癌细胞生长及凋亡的靶向杀伤作用及机制。方法:体外细胞培养,构建荧光报告质粒和治疗质粒,脂质体瞬时转染方法将质粒导入肝癌细胞,荧光显微镜,流式细胞仪,原位末端标记等方法观察转染质粒对肝癌细胞生长及凋亡的影响,用Westernblot检测hTERT-TK对肝癌细胞周期调控因子cyclinD1、Cdk2、p21蛋白表达的影响。结果:hTERT-TK可以高效、特异的转染表达端粒酶活性的肝癌细胞HepG2,并使其凋亡,总的凋亡率可达64%,而正常肝细胞L-02的凋亡率仅为15%,几乎不影响正常肝细胞的生长。结论:hTERT-TK/GCV自杀基因系统具有靶向抗肝癌作用,有潜在临床应用前景。

猫叫综合征患儿1例并文献复习

本文报道1例5号染色体短臂末端微缺失导致的猫叫综合征患儿的临床表现、辅助检查、实验室检测及基因检测结果,并进行文献复习为疾病诊疗提供参考依据。患儿,女,6月龄,因“猫样哭声、生长迟缓、喂养困难”入院,经全外显子高通量测序确认染色体5p15.31-5p15.33上存在约6.29 Mb的拷贝数缺失。文献复习提示新发突变为该病发生的主要原因,基因型与表型相关分析表明,TERT、IRX1基因的缺失与患儿生长发育迟缓和神经发育迟缓密切相关。

RAS、BRAF、TERT基因在甲状腺细针穿刺样本中的表达特点

目的明确KRAS、NRAS、HRAS、BRAF、TERT基因在甲状腺细针穿刺标本中的表达特点,并评价这些基因对细胞学辅助诊断方面的应用价值。方法回顾性研究中日友好医院病理科2019年3月至8月期间送检的甲状腺细针穿刺标本360例,每例标本均包含细胞涂片以及穿刺组织1管。涂片经95%乙醇固定后,行巴氏染色,细胞学结果依据Bethesda分级系统读片。另一瓶穿刺组织保存在生理盐水中,经核酸提取,并用实时定量PCR法进行基因检测。结果标本无法诊断或不满意43例(11.94%),良性病变67例(18.61%),意义不明确的细胞非典型病变或意义不明确的滤泡性病变37例(10.28%),滤泡性肿瘤或可疑滤泡性肿瘤17例(4.72%),可疑乳头状癌34例(9.44%),乳头状癌162例(45.00%)。BRAF V600E突变166例(46.11%),KRAS 2号外显子突变1例(0.28%),NRAS 3号外显子突变12例(3.33%),HRAS 3号外显子突变2例(0.56%),TERT启动子突变3例(0.83%)。其中NRAS突变伴有BRAF突变1例,TERT启动子突变3例均伴有BRAF突变。BRAF基因突变与患者细胞学诊断结果的相关性具有统计学意义(P<0.05);TERT基因与性别及淋巴结转移与否的相关性具有统计学意义(P<0.05);NRAS突变与细胞学诊断结果的相关性具有统计学意义(P<0.05)。结论几种基因突变中,以BRAF基因突变最为常见,且对于辅助诊断的应用价值较高;在RAS基因中又以NRAS突变居多;而TERT启动子突变一般与BRAF基因突变伴随。

TERT对小鼠EL-4淋巴瘤细胞增殖调控的初步研究

为了研究端粒酶催化亚基TERT与细胞周期相关基因的调控关系及其在肿瘤细胞增殖中的调控作用,应用基因芯片及RT-PCR等技术,对靶向mTERT的RNA干涉后的小鼠EL-4淋巴瘤细胞进行细胞周期相关基因的表达谱分析,筛选到43个基因在TERT受抑制前后存在表达差异,并且全部为下调基因.表明在小鼠EL-4淋巴瘤细胞中内源性TERT的表达抑制,导致了调控G1期和S期进程的相关细胞周期相关基因的表达变化,并可能通过此途径影响肿瘤细胞的生长和增殖.

pcDNA3.1(+)/hTERT-tk真核表达质粒的构建及其在HepG-2细胞中的表达

目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对肝癌HepG-2细胞的体外杀伤作用。方法:构建hTERT基因启动子调控的tk基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/hTERT-tk,用脂质体法分别转染肝癌细胞(HepG-2)和正常肝细胞(L-02)后给予更昔洛韦(GCV),用TUNEL法观察自杀基因对肝癌细胞生长的影响。结果:HETRT启动子调控下的HSV-tk/GCV系统对肝癌HepG-2细胞有明显的杀伤作用,而对正常肝细胞则作用不明显。结论:hTERT-tk/GCV基因体系能够靶向杀伤肝癌细胞,有靶向治疗肝癌的潜力。

TERT和CLK3基因多态性与膀胱癌的易感性

目的：探讨TERT基因rs2736098和CLK3基因rs11543198单核苷酸多态性与膀胱癌的易感性关系。方法：选取201例经病理确诊的膀胱癌患者和200例健康人群作为研究对象，用PCR—RFLP方法检测TERTrs2736098和CLK3rs11543198位点的基因型．比较各基因型和膀胱癌发病风险的关系。结果：rs2736098位点基因型及等位基因在病例组和对照组中的分布差异均有统计学意义（χ^2=6．973，P=0．031;χ^2=7．412，P=0．006），AA基因型携带者发生膀胱癌的风险是cc基因型携带者的2．069倍（OR=2．069，95％CI：1．181～3．624，P=0．011）。而rs11543198位点基因型及等位基因在两组中未见明显差异（χ^2=0．202，P：0．904；χ^2=0．188，P=0．665）。rs2736098和rs11543198基因型在膀胱癌病理分期、分级中的分布差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：TERT基因rs2736098位点多态性与膀胱癌的易感性相关，而CLK3基因rs11543198位点多态性与膀胱癌的发生风险无明显关系。

甲状腺乳头状癌BRAFV600E及TERT启动子突变的预后意义

目的探讨BRAFV600E及TERT启动子突变与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系,评估两基因突变对患者的预后的影响。方法应用荧光PCR法检测248例甲状腺乳头状癌(PTC)组织BRAF V600E和TERT启动子(C228T位点和C250T位点)的突变情况,分析其与PTC患者临床病理特征之间的关系。结果 PTC患者中BRAF V600E突变率为78.6%;TERT启动子突变率为7.66%,包括C228T位点突变17例和C250T位点突变2例;TERT启动子突变的19例中有10例同时伴有BRAF V600E突变。BRAF V600E突变与PTC患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤单侧或双侧累及、肿瘤腺外侵犯、以及淋巴结转移等临床病理特征均无关;TERT启动子突变与PTC患者性别及肿瘤单侧或双侧累及无关,但与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤腺外侵犯以及淋巴结转移等临床病理特征均有关;BRAF及TERT同时突变与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤腺外侵犯以及淋巴结转移等临床病理特征均有关。结论 BRAF V600E在PTC患者中的突变率较高,对患者预后的评估指导价值不大;TERT启动子在PTC患者中的突变率较低,对PTC患者预后评估具有指导意义。

慢病毒载体介导hTERT对肝细胞生物学特性的影响

目的:研究慢病毒介导人端粒酶逆转录酶(h-TERT)基因对人张氏肝细胞(chang liver)生物学特性的影响。方法:将表达h-TERT基因的重组慢病毒感染人张氏肝细胞,通过杀稻瘟筛选获得阳性克隆。分别采用实时荧光RT-PCR、TRAP-PCR及ELISA方法检测转染前后chang liver细胞的h-TERT-mRNA水平和端粒酶活性的变化。通过MTT法、流式细胞术(FCM)观察其形态变化及生长增殖情况。结果:转染后的chang liver细胞存在h-TERT基因过表达和端粒酶活性上调,体外培养条件下维持肝细胞原有形态,存活期显著延长,增殖能力较强。结论:外源性h-TERT基因的异位表达不仅上调chang liver细胞的端粒酶活性,而且促进其增殖。

基于ADC和增强MRI的影像组学模型预测低级别胶质瘤TERT启动子突变状态

目的:探讨基于ADC和增强MRI的影像组学模型对低级别胶质瘤端粒酶逆转录酶基因(TERT)启动子突变状态的预测价值。方法:回顾性搜集109例经病理证实的低级别胶质瘤患者,所有患者术前均行MRI检查,在ADC和对比增强T_(1)WI(T_(1)CE)图像上选取病灶最大层面,沿肿瘤边缘勾画ROI,提取影像组学特征。采用三联法(Fisher,POE+ACC,MI)和最小绝对收缩选择算子(LASSO)进行特征筛选,然后行多因素logistic回归分析,构建影像组学预测模型。采用ROC曲线评估预测模型的诊断效能。结果:在ADC和T_(1)CE图像上分别提取279个影像组学特征,最终筛选出11个影像组学特征,分别建立ADC模型、T_(1)CE模型和联合分析(ADC+T1CE)模型共3个影像组学模型。联合分析模型的预测效能最佳,训练集中曲线下面积(AUC)为0.928(95%CI:0.859~0.996),验证集中AUC为0.878(95%CI:0.758~0.997)。结论:基于ADC和增强MRI的影像组学模型能有效预测低级别胶质瘤TERT启动子突变状态,将不同序列的影像组学特征结合可提高预测效能。

AF-hTERT-TK/GCV靶向端粒酶抗肝癌实验研究(英文)

Objective:The aim of this study was to observe the affection of targeted therapy to plasmid AF-pGL3-hTERT-TK in HCC cell line HepG2.Methods:We constructed therapeutic plasmid pGL3-hTERT-TK(containing suicide gene TK that promoted by promoter of hTERT) and was conjugated with AF-liposome(a protein that can combine with the receptor ASPGR on HCC cell surface).Then we transfected HCC cell line HepG2 and hepatic cell L02 with AF-pGL3-hTERT-TK,observed the effects of therapeutic plasmid AF-pGL3-hTERT-TK for HCC cell line growth and apoptosis in vitro by Flow cytometry and Tunnel method.Results:Our results showed that TK gene was 1100 bp in plasmid pGL3-hTERT-TK.Plasmid pGL3-hTERT-TK can effectively transfect HCC cell HepG2 and the transfection rate was 8.91%.By recognizing and combining effects of receptor protein ASPGR on HCC cell surface the therapeutic plasmid AF-pGL3-hTERT-TK could easily enter into HCC cell HepG2 and induce its apoptosis.The apoptosis rate was 85.87% while only 8.65% in L02 cell.Four days after AF-pGL3-hTERT-TK transfected HepG2 was intervention by ganciclovir(GCV),a lot of apoptotic bodies were found by Tunnel analysis,while little apoptotic body was found in hepatic cell L02.Conclusion:AF-pGL3-hTERT-TK can target to HCC cell line and induce it to apoptosis,almost has no influence on hepatic cell L02.AF-pGL3-hTERT-TK has the potential therapeutic effects for HCC.

载体介导RNAi技术对HL-60细胞hTERT基因和细胞生长影响

目的探究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的核糖核酸干扰(RNAi)对白血病HL-60细胞生长及hTERT基因的作用。方法用已经构建好的表达针对pSilencer1.0-U6/hTERT siRNA质粒载体,经RNAi-Mate转染试剂转染HL-60细胞。将转染细胞分为对照组(3亚组)和实验组(3亚组),即pSilencer1.0-U6空质粒组、RNAi-Mate转染试剂组及生理盐水空白对照组为3个对照组,pSilencer1.0-U6/hTERT质粒转染后24 h组、pSilencer1.0-U6/hTERT质粒转染后72 h组、pSilencer1.0-U6/hTERT质粒转染后120 h组为3个实验组。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot法检测细胞hTERT蛋白的表达,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪双染法检测细胞凋亡情况,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率。结果实验组(3亚组)HL-60细胞hTERT蛋白表达水平(0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08)、mRNA(0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06)低于对照组(3亚组)(0.73±0.14、0.76±0.15、0.75±0.11,0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19);实验组(3亚组)细胞增殖抑制率[(23.7±4.0)%、(35.1±5.9)%、(29.6±3.8)%]及凋亡率[(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%]均高于对照组(3亚组)(P<0.05),但实验组各亚组间、对照组各亚组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术在体外能抑制HL-60细胞hTERT蛋白和基因的表达,能抑制细胞增殖,增加细胞凋亡。

A preliminary study on the enhancement of gene expression of SeGSHPx in mouse peritoneal macrophage by polysaccharide Krestin

ＡｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳｅＧＳＨＰｘｉｎｍｏｕｓｅｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅｂｙｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＫｒｅｓｔｉｎＬｉｕＳｈａｎｇｘｉ（刘尚喜）；Ｃ...

端粒酶逆转录酶基因多态性与非综合征型唇腭裂的相关性研究

目的采用病例—对照研究,探讨端粒酶逆转录酶(TERT)基因单核苷酸多态性与宁夏人群非综合征型唇裂伴或不伴腭裂(NSCL/P)之间的相关性。方法收集唇腭裂患者共计504人,同期产科的正常新生儿455名为对照组,收集病例组个体外周静脉全血5 mL。留取对照组新生儿个体脐带血5 mL。选取TERT基因11个tagSNP位点,利用AgriSeqTM靶向测序技术进行基因分型,对符合哈温平衡的SNPs位点进行连锁分析和单倍型分析,探讨上述位点是否与NSCLP存在相关性。结果对照组样本rs33954691、rs11133715、rs2736115、rs4246742、rs56345976、rs33963617、rs10069690、rs4975538、rs2736100、rs2853677、rs273610911个SNPs位点符合率平衡。其中rs33963617SNP位点的等位基因率数和基因型频数在病例组及对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),OR=1.493,95%CI(1.078~2.068)。11个SNPs位点间无明显连锁关系,各单倍型分析差异无统计学意义。结论TERT基因的rs33963617 SNP位点与宁夏地区人群NSCLP有相关性。

云芝多糖增强小鼠腹腔巨噬细胞SeGSHPx基因表达的初步研究

本研究观察了云芝多糖(PSK)腹腔注射对小鼠腹腔巨噬细胞硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHPx)mRNA含量的影响以及小剂量叔丁基氢过氧化物(tert-butyl hydroperoxide,tbOOH)体外对PSK处理小鼠腹腔巨噬细胞SeGSHPx mRNA 含量的影响。结果显示PSK可以增强巨噬细胞SeGSHPx基因表达,与我们先前工作揭示的它能增强SeGSHPx活性的结果相一致。小剂量tbOOH体外对PSK处理小鼠巨噬细胞SeGSHPx mRNA 含量没有明显影响,但能诱导未经PSK处理的正常小鼠腹腔巨噬细胞SeGSHPx mRNA含量增加。