TET2重塑CXCR4 DNA甲基化对急性心肌梗死小鼠心肌组织自噬、炎症反应及凋亡的影响

目的:探究急性心肌梗死(AMI)过程中内皮细胞tet甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对趋化因子受体4(CXCR4)DNA甲基化的影响以及对AMI小鼠心肌组织自噬、炎症反应及组织细胞凋亡的影响机制,为临床探究AMI发展的分子机制提供理论依据。方法:8周龄雄性C57/BL6小鼠50只,制备AMI模型,尾部注射TET2、CXCR4过表达质粒;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织TET2、CXCR4、微管相关蛋白3(LC3)、P62、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2表达;甲基化检测CXCR4 DNA甲基化水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织内炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组心肌组织细胞凋亡指数。结果:与假手术组比较,模型组心肌组织内TET2、CXCR4均表达上调,TET2、CXCR4均在心肌组织内过表达,TET2过表达促进CXCR4表达,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,TET2 mimic组CXCR4启动子区域DNA甲基化程度降低,CXCR4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组小鼠心肌组织自噬蛋白LC3、抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达下调,炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平、自噬蛋白P62、促细胞凋亡蛋白Bax、cleaved Caspase-3表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);TET2、CXCR4过表达进一步下调LC3、Bcl-2蛋白表达,上调炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平,P62、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达;TET2、CXCR4二者联合体现出最低LC3、Bcl-2蛋白表达,最高炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及P62、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AMI发展中,TET2通过降低CXCR4 DNA甲基化,促进CXCR4基因表达,进而抑制AMI小鼠心肌组织自噬,上调炎症反应及细胞凋亡程度,促进疾病发展。

ASXL1、TET2阳性急性髓系白血病免疫表型及预后研究

目的探讨ASXL1、TET2阳性急性髓系白血病(AML)患者的免疫表型及临床预后。方法纳入2019年1月1日-2022年5月31日期间于蚌埠医学院第一附属医院就诊的162例初诊AML(M3型除外)患者的临床资料,其中ASXL1和TET2双突变组(ASXL1^(+)TET2^(+)组)患者10例,ASXL1突变组(ASXL1^(+)组,包括双突变组)患者26例,TET2突变组(TET2^(+)组,包括双突变组)患者25例,无ASXL1或TET2突变组(双阴性组)患者121例。通过对4组患者免疫表型及预后进行回顾性分析,比较4组患者的完全缓解(CR)率、中位无进展生存时间(PFS)和中位总生存时间(OS)。结果4组患者在年龄、性别、WBC、RBC、Hb、PLT计数和FAB分型上差异无统计学意义(P>0.05);与双阴性组相比,ASXL1^(+)TET2^(+)组、ASXL1^(+)组和TET2^(+)组异常染色体核型的发生频率更高(P=0.046),且初诊时骨髓原始细胞数低(P=0.037)。ASXL1^(+)组患者CD7、CD33和CD38、CD34抗原表达率低于双阴性组(均P<0.05)。CASXL1^(+)TET2^(+)组、ASXL1^(+)组和TET2^(+)组首次CR率均低于双阴性组,且ASXL1^(+)TET2+组总CR率低于双阴性组(均P<0.05)。双阴性组中位PFS和OS均较ASXL1^(+)TET2^(+)组、ASXL1^(+)组和TET2^(+)组显著延长(均P<0.05),其中ASXL1^(+)TET2^(+)组中位OS较TET2^(+)组明显缩短(P=0.019),较ASXL1^(+)组存在缩短的趋势(P=0.055)。结论ASXL1是一个不良预后的指标,合并TET2突变可能缩短了AML患者的生存时间。

Tet-On系统中多西环素对MBD1诱导表达的调控研究

【目的】构建甲基结合蛋白1(MBD1)的Tet-On可诱导表达质粒和293T细胞,探讨多西环素(Dox)对MBD1表达的影响,并通过分析细胞中质粒启动子CpG甲基化水平反映MBD1调控机制。【方法】使用MBD1引物扩增293T的MBD1表达序列,将其连接于Tet-On诱导表达质粒的多克隆位点;将构建成功的质粒用电转染的方法转入MBD1 KO 293T,使用荧光显微镜及Western blot验证获得的MBD1恢复的293T(MBD1 RE 293T);使用不同浓度Dox诱导MBD1表达,利用Western blot检测单克隆细胞中MBD1的表达情况;使用同一浓度Dox诱导MBD1表达,在12、24、48、96、144、192 h收集细胞,利用Western blot检测细胞中MBD1的表达情况;使用亚硫酸氢盐测序方法检测Dox诱导后细胞内可诱导质粒启动子CpG甲基化情况。【结果】成功构建Tet-On诱导表达MBD1质粒;与未诱导细胞相比,Dox诱导后转染细胞MBD1蛋白重新表达;随着Dox浓度的升高细胞中MBD1的表达逐渐增多;相同浓度Dox诱导后,从12-96 h细胞内MBD1的表达逐渐升高,但144 h后MBD1表达下降;细胞内质粒启动子CpG甲基化检测显示,与96 h相比,144和192 h质粒启动子甲基化水平逐渐升高;在诱导144 h加入甲基转移酶抑制剂地西他滨(decitabine)后,质粒启动子甲基化水平降低,MBD1表达升高。【结论】Tet-On可诱导细胞中重新表达MBD1蛋白,并且表达量与Dox浓度正相关,但长时间诱导后细胞内质粒CpG甲基化水平升高,影响细胞中MBD1的表达。

寻常型银屑病患者皮损组织中DNA去甲基化酶TET3过表达介导转录因子KLF4显著高表达

目的 探讨银屑病患者皮损组织中Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF)异常高表达的DNA甲基化分子机制。方法 以20例寻常型银屑病患者病理检查所取皮损组织为实验组,13例眼外伤手术患者所取眼睑皮肤组织为对照组。采用亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing, BSP)检测各组皮肤样本及转染十-十一转位3(ten-eleven translocation 3, TET3)过表达及干扰质粒的人永生化角质形成细胞HaCat中转录因子Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)启动子区DNA甲基化水平,RT-qPCR和Western blotting检测各组皮肤组织样本及转染HaCat细胞中KLF4、TET1(ten-eleven translocation1)、TET2、TET3的表达水平。结果 实验组KLF4启动子DNA甲基化水平显著低于对照组(P<0.01),实验组KLF4的mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01)。实验组KLF4启动子DNA甲基化水平与mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.649,P=0.002)。实验组TET3表达水平显著高于对照组(P<0.01), TET1及TET2表达水平差异无统计学意义。实验组TET3表达水平与KLF4启动子DNA甲基化水平呈显著负相关(r=-0.688,P=0.001)。HaCat细胞中过表达TET3后,KLF4启动子DNA甲基化水平明显下调(P<0.01),KLF4表达水平显著上调(P<0.01)。HaCat细胞中干扰TET3表达后,KLF4启动子DNA甲基化水平明显上调(P<0.01),KLF4表达水平显著下调(P<0.01)。结论 过度表达的TET3通过下调KLF4启动子DNA甲基化水平,介导银屑病患者皮损组织中KLF4过度表达。

高含S-腺苷甲硫氨酸饮食通过TET3介导的DNA去甲基抑制小鼠脑卒中后神经元细胞凋亡及活性氧蓄积

目的 明确高含S-腺苷甲硫氨酸(SAM)饮食是否通过激活10-11易位蛋白3(TET3)促进DNA去甲基化,抑制脑卒中后小鼠神经元细胞的凋亡及活性氧(ROS)产生。方法 将C57BL/6J小鼠分为Sham组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和SAM组。术后行Morris水迷宫实验评价小鼠神经功能状态,对小鼠脑组织进行取材、切片、苏木精-伊红染色、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色及免疫荧光染色。将PC-12细胞分为Control组、缺氧/复氧(H/R)组和SAM组。流式细胞仪检测细胞ROS水平及凋亡水平;Western blot检测细胞中TET3相对表达量;Dot blot检测细胞内5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)水平。结果 在动物实验中,与Sham组相比,MCAO组小鼠神经功能缺损加重,脑梗死区域明显,脑组织结构排列紊乱且存在大量空洞,神经细胞数量减少,脑切片中TET3蛋白表达减少,5hmC水平降低;而与MCAO组相比,SAM组小鼠神经功能缺损情况减轻,脑梗死区域体积减小,脑组织中的空洞减少,存活神经细胞增多,TET3蛋白表达增多,5hmC水平升高。在细胞实验中,与Control组相比,H/R组缺氧处理可促使细胞内产生大量ROS,诱导细胞发生凋亡,胞内TET3蛋白表达减少和5hmC水平下降;而与H/R组相比,SAM组细胞ROS产生减少,细胞凋亡减少,TET3表达增多和5hmC水平上升。给予TET3抑制剂可消除SAM减少细胞凋亡的作用。结论 高含SAM饮食通过促进TET3介导的DNA去甲基化减轻小鼠脑卒中后神经元损伤,从而发挥保护作用。

TET2敲除对小鼠心肌纤维化、肥大及相关基因蛋白表达影响

目的研究野生型及TET2基因敲除小鼠心肌基因、蛋白表达变化,探讨TET2敲除影响心肌肥厚、纤维化可能的作用机制。方法使用Trizol试剂法提取心肌组织RNA,RT-qPCR法检测WT及TET2-/-小鼠TET2、CYGB、COL3a、POSTN、Nur77、PPARγ、RBP7、GSTA3、SNCA、TPPP3、ELN、LEMD2、Piezo-1的mRNA表达水平变化;使用RIPA裂解液提取心肌总蛋白,Western blot法进行检测TET2、Col3a、Col1a、SM22、Nur77、PPARγ、ELN、LEMD2、α-SMA、DNMT1的蛋白表达水平;使用HE染色检测心肌细胞肥厚;Masson染色检测心肌纤维化。结果核酸凝胶电泳检测到野生型和TET2敲除小鼠;TET2敲除小鼠心肌横截面积及细胞直径和纤维化程度明显增加。q-PCR和蛋白电泳显示TET2敲除导致DNMT1、Col1a、Col3a、α-SMA、POSTN、CYGB表达上调,LEMD2、SM22、Nur77、PPARγ、RBP7、GSTA3、SNCA、TPPP3、Piezo-1、ELN表达下调,而CLDN1的蛋白表达没有明显差异。结论TET2的敲除可能通过介导DNMT1表达影响DNA甲基化状态来影响心肌细胞的发育;TET2的敲除可能会影响LEMD2收缩舒张功能;TET2的敲除上调Col3a及Col1a表达增加胶原蛋白沉积、POSTN mRNA表达上调,下调SM22表达导致心肌纤维化,下调ELN的表达影响心肌顺应性;增加CYGB和下调GSTA3、SNCA、Piezo-1表达可能导致心肌氧化应激发生导致心肌纤维化的发生;下调Nur77、PPARγ、RBP7的表达可能致使TET2敲除小鼠心肌纤维化、心肌细胞肥大发生;TET2敲除小鼠α-SMA表达上调,心肌细胞发生肥大。

广东省某生猪屠宰场tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌的流行特征

为了探究广东省某生猪屠宰场中替加环素耐药基因tet(X4)和碳青霉烯耐药基因bla_(NDM)阳性菌的流行特征,本试验从广东省某生猪屠宰场采集94份不同来源样品(55份猪粪便、20份屠宰场环境和19份猪胴体),使用含替加环素和美罗培南的麦康凯琼脂培养基筛选替加环素和美罗培南不敏感菌株;采用PCR方法检测tet(X4)和bla_(NDM)基因阳性菌,并对阳性菌进行菌种鉴定;采用微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定阳性菌的药物敏感性。结果显示,所有样品的tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌检出率分别为93.62%(88/94)和51.06%(48/94),其中tet(X4)基因阳性菌的检出率在猪粪便样品中最高(98.18%,54/55),其次是胴体样品(89.47%,17/19)和环境样品(85.00%,17/20);bla_(NDM)因阳性菌的检出率在环境样品中最高(80.00%,16/20),其次是猪粪便样品(47.27%,26/55)和胴体样品(31.58%,6/19)。2种耐药基因的主要携带菌种均为大肠杆菌,分别占比95.65%(88/92)和74.07%(40/54),另外也检测到tet(X4)阳性的弗格森埃希菌、阴沟肠杆菌和摩氏摩根菌,bla_(NDM)阳性的肺炎克雷伯菌、雷氏普罗威登斯菌和瓜里科州假单胞菌等。药敏试验结果显示,tet(X4)和bla_(NDM)阳性大肠杆菌均为多重耐药菌,其中tet(X4)阳性菌对四环素和氟苯尼考的耐药率为100%;bla_(NDM)阳性菌对头孢噻肟和头孢他啶的耐药率为100%;2种基因阳性菌均对黏菌素较为敏感。结果表明,该屠宰场tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌污染严重,主要菌种为大肠杆菌。屠宰场tet(X4)和bla_(NDM)阳性菌的污染对食品安全和公共卫生构成威胁,提示应加强对生猪屠宰场中耐药菌污染情况调查和长期监测。

克隆造血DNMT3A基因突变、Tet2基因缺失对慢性阻塞性肺疾病炎症反应调控作用的研究进展

克隆造血是指造血系统体细胞基因突变的非恶性增殖性现象,可驱动基因突变后的突变白细胞比例升高。新近研究指出,由白血病驱动基因突变引起的克隆造血可通过促炎反应影响慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生发展。越来越多的研究显示,克隆造血是COPD的非传统、独立的危险因素,同时也是导致COPD发生的一种新机制。甲基化DNA转移酶3a(DNMT3A)基因突变及Tet2基因缺失是体细胞突变最常见的两种类型,二者可诱导炎症反应的发生,引起肺功能下降,从而导致COPD的发生发展。深入研究DNMT3A基因突变及Tet2基因缺失与COPD炎症反应的关系,可为研究COPD发生发展的相关机制提供新思路。

TET甲基胞嘧啶双加氧酶2在心血管疾病发病机制中的研究进展

心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)是中国人最主要的死亡原因。动脉粥样硬化、心肌细胞凋亡、心肌肥厚和纤维化是CVD主要的病理过程。基因的表观遗传修饰特别是DNA甲基化在CVD中起重要作用。研究表明,TET甲基胞嘧啶双加氧酶2(Ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 2,TET2)参与基因表观遗传调控,TET2在CVD的发病机制中起重要作用。TET2可以调节心脏发育、改善动脉粥样硬化过程中内皮细胞功能障碍、调节血管平滑肌细胞表型转换、抑制免疫炎症反应和心肌细胞凋亡、心肌肥厚和纤维化。本文就TET2在CVD发病机制中的研究进展进行综述。

miR-589-5p靶向调控TET2对人脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-589-5p靶向调控甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对人脑微血管内皮细胞(hBMVECs)增殖和凋亡的影响。方法体外培养hBMVECs,进行细胞转染和双萤光素酶检测;将细胞分为对照组、LPS组、miR-NC+LPS组和miR-589-5p inhibitor+LPS组,处理24 h后检测细胞增殖率和细胞凋亡率,同时检测细胞中miR-589-5p和TET2相关mRNA和蛋白表达水平。结果检索TargetScan数据库显示,miR-589-5p对TET2有潜在的结合位点。与对照组相比,其余各组细胞凋亡率及miR-589-5p mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)蛋白、半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-1蛋白、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白、Caspase-3蛋白水平均增加(P<0.05),细胞增殖率及TET2 mRNA、TET2蛋白水平均降低(P<0.05);与LPS组和miR-NC+LPS组相比,miR-589-5p inhibitor+LPS组细胞凋亡率及miR-589-5p mRNA、NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白、IL-1β蛋白、Caspase-3蛋白水平均降低(P<0.05),细胞增殖率及TET2 mRNA、TET2蛋白水平均增加(P<0.05);LPS组和miR-NC+LPS组细胞增殖率、细胞凋亡率及miR-589-5p mRNA、TET2 mRNA、TET2蛋白、NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白、IL-1β蛋白、Caspase-3蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在LPS环境下,hBMVECs中的miR-589-5p表达增加,通过转染miR-589-5p inhibitor可以增加TET2表达,促进hBMVECs增殖,并抑制hBMVECs凋亡。

四环素抗性基因tet(A)荧光RAA检测方法的建立及应用

为了实现快捷、准确检测抗生素抗性基因,提高环境监测与治理能力,建立了一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)的四环素抗性基因tet(A)的快速检测方法.该检测方法以tet(A)基因序列保守区为靶序列,设计其RAA引物,筛选并优化RAA引物探针,建立荧光tet(A)-RAA快速检测方法.结果表明,该tet(A)-RAA法在39℃恒温条件下30 min内即可特异性实现对tet(A)基因片段的有效扩增,与无抗性细菌均无交叉反应.且采用该方法对18个环境样品进行检测,阳性率为100%,与qPCR方法检测结果一致.该四环素抗性基因tet(A)的检测方法灵敏度高、特异性强、反应时间短、操作简便,可用于对抗性基因tet(A)的快速检测,也为开发其他抗生素抗性基因快速检测方法提供了参考.

基于CRISPR-Cas9技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系

为研究甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet methylcytosine dioxygenase 2,TET2)及其介导的羟甲基化修饰在调控天然免疫反应中的作用,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系。针对鸡TET2 mRNA的2种剪接变体的共有CDS序列设计4组sgRNA,构建sgRNA表达质粒,连同Cas9-T2A-GFP质粒共转染DF-1细胞,筛选高切割效率的sgRNA;将转染该sgRNA的DF-1细胞,进行流式细胞分选,获取表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的细胞,再通过有限稀释法筛选单克隆细胞,并用DNA测序进行鉴定。单克隆敲除细胞扩大培养后,Western blot和Dot blot检测TET2蛋白的表达水平和羟甲基化(5hmC)水平。DNA测序结果表明,TET2-gRNA-2靶位点附近分别发生2和28 bp的缺失突变,引起TET2蛋白移码突变,将该细胞株命名为DT-6。DT-6细胞传代15次以上,细胞形态稳定。Western blot结果显示,与DF-1细胞相比,DT-6细胞几乎不表达TET2蛋白。Dot blot结果显示,与DF-1细胞相比,DT-6细胞全基因组羟甲基化水平显著降低。利用CRISPR-Cas9技术成功构建了敲除TET2基因的鸡胚成纤维细胞系,为研究鸡TET2及其介导羟甲基化修饰参与调控天然免疫反应的途径和分子机制奠定基础。

TET1基因对小鼠uNK细胞增殖及IFN-γ、VEGF-C和TGF-β1转录水平的影响

本研究旨在了解去甲基化酶1(ten eleven translocation,TET1)对小鼠子宫内自然杀伤细胞(uterine natural killer,uNK)的增殖及其细胞因子分泌表达的影响。采集妊娠9~12 d小鼠子宫内膜,分离淋巴细胞,使用链霉亲和素磁珠法进一步分选uNK细胞进行培养;针对TET1基因合成RNA干扰序列,并将其连接入RNA干扰载体GM-19167,构建干扰表达质粒,包装成慢病毒(lentivirus)并进行病毒滴度的测定;按照慢病毒与细胞数(10~200)∶1的比例转染uNK细胞,168 h后荧光显微镜检测转染效果,收集uNK细胞,以β-actin为内参进行荧光定量PCR检测以验证TET1基因的干扰效果,利用Cell Counting Kit-8(CCK8)对uNK细胞的增殖情况进行检测,分别合成γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)和β1转化因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)3种细胞因子的检测引物,通过荧光定量PCR方法进行检测。结果发现,慢病毒感染168 h后uNK细胞中TET1的表达量显著下降(P<0.05);CCK8试验结果显示,与空载体病毒感染和空白对照组相比较,TET1干扰后其细胞增殖不受影响(P>0.05);荧光定量PCR检测结果显示,细胞因子TGF-β1的表达水平显著上升(P<0.01),而IFN-γ和VEGF-C两种细胞因子均显著下降(P<0.05)。下调TET1基因的表达不影响uNK细胞的正常增殖,但会影响其细胞因子的转录,进而对动物子宫内的天然免疫发挥重要作用。

TET 2基因单核苷酸多态性与急性心肌梗死易感性和临床特征及预后的相关性分析

目的探讨TET 2基因单核苷酸多态性(SNP)与急性心肌梗死(AMI)易感性、临床特征及预后的相关性,为临床探究AMI发病的分子遗传学提供理论基础及实验依据。方法选取2022年1-10月在承德医学院附属医院确诊的AMI患者及同期相匹配的健康体检人群各100例为研究对象,分为AMI组和对照组。统计TET 2基因2个SNP位点rs7670522、rs6839705基因型(AA、AG、GG)、等位基因(A、G)在AMI不同分类易感性(对照组、AMI组)、临床特征(有无临床典型症状、严重并发症)、预后(死亡、存活)中的分布规律。采用多因素Logistic回归方法分析AMI患者预后的影响因素。结果AMI组rs7670522、rs6839705位点AA基因型、A等位基因频率均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AMI患者中有典型症状组rs7670522、rs6839705位点AA基因型、A等位基因频率均明显高于无典型症状组,有严重并发症组rs7670522、rs6839705位点AA基因型、A等位基因频率均明显高于无严重并发症组(均P<0.05)。AMI患者中死亡组rs7670522、rs6839705位点AA基因型、A等位基因频率均明显高于存活组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,TET2 rs7670522、TET2 rs6839705均与AMI患者预后密切相关(比值比=3.244、3.095,P=0.004、0.006)。结论TET 2基因2个SNP位点rs7670522、rs6839705多态性与AMI易感性、临床特征及预后存在相关性,基因型AA、等位基因A均是导致患者预后不良的关键因素。

DNA双加氧酶TET家族蛋白1抑制上皮性卵巢癌转移的作用机制研究

目的探讨TET家族蛋白1(TET1)在调控上皮性卵巢癌(EOC)转移中的作用机制。方法在EOC细胞系中瞬时转染TET1过表达质粒,通过Transwell实验检测EOC细胞迁移能力变化。通过蛋白质免疫印迹检测上皮细胞黏附分子(EpCAM)的表达。通过蛋白质免疫荧光实验检测EpCAM上游转录因子β-连环蛋白的亚细胞定位变化。检测β-连环蛋白的上游抑制因子叉头框基因O4(FOXO4)基因启动子区5hmC和5mC含量变化。通过染色质免疫共沉淀实验检测TET1与FOXO4基因启动子区域结合情况。利用EOC组织芯片对TET1与β-连环蛋白进行免疫组织化学染色,探讨二者表达的相关性。结果过表达TET1明显抑制EOC细胞系OVSAHO和JHOS4的细胞迁移能力,且明显抑制EpCAM的表达。TET1过表达后促进β-连环蛋白的亚细胞定位发生变化,其核内聚集明显减少,β-连环蛋白与EpCAM基因启动子区域结合亦明显减少。TET1过表达可以促进FOXO4的表达,进而抑制β-连环蛋白进入细胞核发挥转录因子作用。当FOXO4表达被敲低后,β-连环蛋白的细胞核内分布明显增加。在浆液性卵巢腺癌组织样本中,71.8%(28/39)TET1表达呈阳性,15.4%(6/39)β-连环蛋白表达呈阳性,TET1与β-连环蛋白的表达呈负相关(χ^(2)=4.745,P=0.030)。结论TET1通过调控FOXO4/β-连环蛋白/EpCAM轴抑制EOC转移。

TET去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响

【目的】研究TET(ten-eleven translocation)去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响。【方法】将收集的猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)置于不同浓度(0(对照组)、100、200和400μmol/L)Bobcat339抑制剂的体外成熟培养液中培养42 h,测量卵丘扩展直径,统计成熟率,确定最小有效浓度。在体外成熟培养液中培养27 h后,利用免疫荧光(IF)检测5-甲基胞嘧啶(5mC)与5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)信号强度以及纺锤体组装情况;利用DCFH-DA染料检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用JC-1染色法检测线粒体膜电位水平(MMP);利用ATP检测试剂检测卵母细胞ATP水平;利用实时荧光定量PCR检测42 h时COCs卵丘扩展相关基因表达水平和27 h时卵母细胞抗氧化相关基因表达水平。【结果】与对照组相比,100、200和400μmol/L组卵丘细胞扩展水平均极显著降低(P<0.01),100、200和400μmol/L组成熟率显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),确定最小有效浓度为100μmol/L,后续试验均用该浓度。IF检测结果显示,与对照组相比,27 h时100μmol/L组卵母细胞中5mC信号强度显著升高(P<0.05),而5hmC信号强度没有显著降低(P>0.05)。与对照组相比,27 h时100μmol/L组卵母细胞纺锤体排列紊乱,组装异常。与对照组相比,ROS水平极显著升高(P<0.01),MMP和ATP水平极显著降低(P<0.01)。与对照组相比,42 h时100μmol/L组COCs中卵丘扩展相关基因透明质酸合成酶2(Has2)表达水平显著降低(P<0.05),穿透素3(Ptx3)基因表达量极显著降低(P<0.01),27 h时100μmol/L组卵母细胞中抗氧化相关基因超氧化物歧化酶1(Sod1)与Sod 2表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】TET去甲基化酶通过清除猪卵母细胞中的5mC,降低ROS水平,提高MMP水平来指导纺锤体正常组装排列,维持COCs的正常扩展,保证猪卵母细胞正常成熟。

TET蛋白在配子形成和早期胚胎中的作用研究进展

在哺乳动物配子形成和胚胎发育过程中,DNA甲基化水平一直处于动态变化,DNA甲基化水平的规律变化决定了配子的生成、分裂和成熟,尤其是在早期胚胎发育过程中DNA去甲基化与DNA甲基化共同决定了1枚胚胎能否发育为完整的个体。TET蛋白家族的各成员可以通过不同作用机制发挥去甲基化作用,并且不同种类TET蛋白的缺失会对胚胎发育产生不同程度的阻碍。大量研究表明TET蛋白在配子形成和早期胚胎发育不同阶段动态调控甲基化水平,目前关于TET蛋白生物功能还存在很大的研究空间。本文综述了TET蛋白家族成员的结构、作用机制以及在配子形成和胚胎发育过程中的生物功能,为深入研究TET蛋白功能提供参考。

TET2基因单核苷酸多态性与急性心肌梗死易感性的关系

目的探讨TET2基因单核苷酸多态性(rs2454206、rs12498609)与急性心肌梗死易感性的相关性。方法前瞻性选取2022年1月-2022年9月承德医学院附属医院收治的急性心肌梗死患者作为病例组,另选取同期该院健康人群作为对照组,每组150例。比较两组一般资料及血脂相关指标,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TET2基因rs2454206、rs12498609位点基因型,采用多因素Logistic逐步回归分析影响急性心肌梗死发生的危险因素。结果两组TET2基因rs2454206位点、rs12498609位点基因型频率、等位基因频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析显示,高血压[OR=2.022(95%CI:1.202,3.401)]、TC[OR=3.045(95%CI:2.146,4.320)]、TG[OR=4.052(95%CI:2.405,6.826)]、LDL-C[OR=3.022(95%CI:1.889,4.834)]、rs2454206位点AA基因型[OR=4.697(95%CI:2.675,8.249)]、rs12498609位点CC基因型[OR=2.147(95%CI:1.215,3.795)]是影响急性心肌梗死发生的危险因素(P<0.05),HDL-C[OR=0.057(95%CI:0.015,0.216)]是影响急性心肌梗死发生的保护因素(P<0.05)。结论急性心肌梗死的发生受多种因素影响,其中TET2基因rs2454206位点AA基因型、rs12498609位点CC基因型可能与急性心肌梗死易感性增加有关。

新型四环素灭活酶tet(X)致替加环素耐药的机制研究进展

细菌的抗生素耐药性已成为全球公共健康的巨大威胁。替加环素是新一代的四环素类药物,是目前治疗耐碳青霉烯类革兰氏阴性菌感染的最后一道防线。然而可移动新型四环素灭活酶tet(X)直系同源物的出现,导致了高水平替加环素耐药。目前,已经发现tet(X)的同系物主要有tet(X1)、tet(X2)、tet(X3)、tet(X3.2)、tet(X4)、tet(X5)、tet(X6)和tet(X7)。该耐药基因已经传播到世界多个地区医院中相关的患者和环境中,涉及多种不同种类的细菌,其中携带tet(X3)和tet(X4)基因的耐药细菌表现出最高的耐药水平。耐药机制中,插入序列ISCR2与tet(X3)、tet(X4)、tet(X5)的水平传播密切相关,位于多种型别质粒上tet(X4)的基因遗传结构较为复杂,可位于各式各样的可移动原件上,加速了该耐药基因的播散。质粒介导的替加环素耐药性可能会进一步扩散到各种生态位和临床高危病原体中。迫切需要临床及科研工作者共同努力,来阻止该耐药基因的传播。

肠镜TET管置入洗涤菌群移植术治疗儿童孤独症

由麻醉师给孤独症儿童静脉麻醉后,无痛肠镜探查到达回盲部无特殊病变,遂通过内镜钳道将一次性使用内窥镜给药管[经内镜肠道植管术(transendoscopic enteral tubing,TET)管]送入肠道,退镜同时将TET管送入肠腔,直至回盲部,使TET管远端在回盲部保持相对固定并将肠镜远端缓慢退出肛门。第二次再行肠镜到达回盲部,并且经内镜钳道使用1~2枚钛夹将TET管远端线圈固定在回盲部肠壁皱褶处,缓慢退出肠镜后拔除导丝,敷料固定TET管,观察24 h无异常反应,次日进行洗涤菌群移植。