子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中miR-143-3p和TET1表达及临床意义

目的 探讨子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中miR-143-3p和TET1的表达及临床意义。方法 前瞻性选取2021年5月至2022年6月入同济大学附属第一妇婴保健院行腹腔镜手术治疗的85例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜组织,并选取同期收治的85例子宫内膜异位症患者的在位子宫组织,同时选取85例同期卵巢囊肿手术治疗患者作为对照组。采用qRT-PCR法检测两组子宫内膜组织中miR-143-3p和TET1 mRNA表达量,分析miR-143-3p和TET1 mRNA表达量与子宫内膜异位症临床特征关系,Spearman秩相关分析miR-143-3p和TET1的相关性,应用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-143-3p和TET1以及miR-143-3p联合TET1对子宫内膜异位症功能的诊断价值。结果 异位内膜组织中miR-143-3p和TET1表达明显低于对照组和在位内膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组和在位内膜组织中miR-143-3p和TET1表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同分期子宫内膜异位症患者的miR-143-3p和TET1表达水平差异有统计学意义(P<0.05),而不同痛经情况和病灶分型miR-143-3p和TET1表达水平在子宫内膜异位症患者中比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-143-3p和TET1的表达水平呈正相关(r=0.367,P<0.001)。在miR-143-3p预测子宫内膜异位症的ROC曲线中:当截断值为0.316时,曲线下面积(AUC)为0.846,敏感度为81.18%,特异度为62.79%;在TET1预测子宫内膜异位症的ROC曲线中:当截断值为0.384时,AUC为0.942,敏感度为89.41%,特异度为78.82%;在miR-143-3p和TET1联合预测子宫内膜异位症的ROC曲线中:AUC为0.956,敏感度为91.76%,特异度为72.94%。miR-143-3p和TET1联合预测子宫内膜异位症的AUC明显大于miR-143-3p和TET1单独诊断。结论 子宫内膜组织中miR-143-3p和TET1低表达与子宫内膜异位症的发生、发展关系密切,并且在组织中随着子宫内膜异位症分期增加,miR-143-3p和TET1表达水平逐渐降低,miR-143-3p和TET1可作为临床诊断子宫内膜异位症的早期标志物。

TET1基因对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨TET1基因表达水平对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法采用RT-qPCR检测正常支气管上皮细胞及肺癌细胞株中TET1基因的表达水平;通过构建TET1基因过表达和敲低表达肺癌细胞模型,采用划痕愈合实验和Transwell实验分析TET1基因不同表达水平对肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响;通过RT-qPCR和蛋白印迹法对TET1下游调控基因β-catenin(CTNNB1)、MMP7的mRNA及蛋白表达水平进行检测并确定其可能的信号通路。结果多种肺癌细胞中TET1基因表达水平较之正常支气管上皮细胞(human bronchial epithelial,HBE)均呈现显著下降(P<0.01)。过表达TET1基因可明显抑制肺癌细胞迁移和侵袭能力,而敲低TET1基因表达水平后肺癌细胞侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01);mRNA及蛋白表达水平检测发现,过表达TET1基因后其下游基因CTNNB1、MMP7的表达水平明显下降(P<0.01),而敲低TET1基因表达后其下游基因CTNNB1、MMP7的表达水平显著上升(P<0.01)。β-catenin信号通路抑制剂处理可显著降低TET1对肺癌细胞迁移和侵袭的作用。结论 TET1基因表达在多种肺癌细胞株中显著下降。TET1基因可能通过Wnt/β-catenin信号通路及其关键基因CTNNB1、MMP7的表达水平抑制肺癌细胞的迁移及侵袭。

TET1基因敲除的宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力观察

目的观察TET1基因敲除的宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭能力。方法采用CRISPR/Cas9技术构建TET1敲除的Hela细胞株(观察组),同时选择野生Hela细胞作为对照组。采用实时无标记动态细胞分析技术观察两组细胞增殖能力,计算两组90 h时的细胞指数(CI)值;采用Transwell实验观察两组细胞的侵袭能力。结果观察组、对照组CI值分别为1.04±0.86、1.57±1.01,两组相比P<0.05。观察组、对照组24 h穿膜细胞数分别为(158±6)、(109±4)个,48 h穿膜细胞数分别为(206±12)、(142±7)个,两组相比P均<0.05。结论 TET1基因敲除的宫颈癌Hela细胞增殖能力、侵袭能力增强。

慢性尼古丁成瘾大鼠脑组织中Tet1蛋白水平及Npas4基因甲基化水平研究

目的探讨慢性大鼠尼古丁成瘾过程中Tet1蛋白表达水平及Npas4基因甲基化水平变化及意义。方法通过背部连续注射尼古丁酒石酸氢盐构建大鼠慢性尼古丁成瘾动物模型,应用Western blot对各组实验大鼠脑组织Tet1蛋白表达水平进行测定;应用选择性化学标记SMRT测序对大鼠海马区域及大脑皮质中5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)与5-甲基胞嘧啶(5mC)水平进行测定,获得5hmC与5mC在脑内的动态变化;应用甲基化特异性PCR(MSP)结合RT-PCR对大鼠海马区、大脑皮质中Npas4基因甲基化、mRNA和蛋白表达情况进行测定;应用荧光分光光度法对慢性尼古丁成瘾大鼠脑内神经递质多巴胺(DA)、乙酰胆碱(AC)、阿啡肽(EOPs)及五羟色胺(5-HT)含量进行测定。结果通过构建慢性尼古丁成瘾大鼠动物模型应用Western-blot对各组大鼠脑内Tet1蛋白表达水平测定结果发现,在大鼠海马区中尼古丁成瘾组大鼠Tet1蛋白表达水平明显低于非尼古丁成瘾大鼠(P<0.05),进一步对5hmC与5mC水平测定发现,大鼠海马区中尼古丁成瘾大鼠组出现5hmC显著下降而5mC明显升高(P<0.05);通过对Npas4基因甲基化及mRNA及蛋白表达水平进行测定发现,在大鼠海马区域中尼古丁成瘾大鼠脑内Npas4基因呈现高甲基化情况,而Npas4基因mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05);对各组大鼠脑内神经递质浓度检测发现,大鼠海马区中尼古丁成瘾组大鼠脑内神经递质浓度多巴胺(DA)、乙酰胆碱(AC)、内啡肽(EOPs)及五羟色胺(5-HT)均高于非尼古丁成瘾大鼠组(P<0.05)。结论在大鼠慢性尼古丁成瘾形成过程中大鼠脑组织海马区Tet1蛋白表达水平下降,且可以影响大鼠脑组织中5hmC与5mC水平,进而影响Npas4基因甲基化程度及神级递质变化从而参与尼古丁成瘾的形成。

DNA羟甲基化酶TET1对良性前列腺增生细胞的增殖调控作用及其机制

目的研究DNA羟甲基化酶TET1在前列腺增生细胞增殖调控中的作用及其机制。方法按前列腺体积将患者分成3组:A组<30 mL、30 mL≤B组≤70 mL、C组>70 mL,收集手术前列腺外周带和移行带标本,用酶联免疫吸附实验方法比较检测两者双氢睾酮(DHT)的含量差异,免疫组化检测比较两者TET1、Ⅱ型5α-还原酶和甲基化的表达差异。采用慢病毒转染方法过表达和敲减正常前列腺上皮细胞RWPE-1中TET1基因后,CCK-8检测基因过表达或敲减和对照组细胞的增殖情况,流式细胞术检侧各组细胞凋亡,实时聚合酶链反应和Western印迹法检测各组Ⅱ型5α-还原酶表达水平。结果 B和C组移行带中DHT含量高于外周带(P<0.05),移行带中TET1和Ⅱ型5α-还原酶表达高于外周带,甲基化水平低于外周带(P<0.05),A组中无明显差异(P>0.05)。与对照组TET1-Ctrl(0.98±0.22)相比,TET1-OE组Ⅱ型5α-还原酶蛋白表达量(1.52±0.34)增加(P<0.05),SRD5A2表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平下降(P<0.05),TET1-KD组结果则相反。结论在前列腺增生过程中,可能是DNA羟甲基化酶TET1发挥去甲基化作用而降低移行带中Ⅱ型5α-还原酶基因SRD5A2启动子的甲基化水平,Ⅱ型5α-还原酶表达增加促进睾酮转化为DHT,移行带细胞增殖凋亡平衡被打破而导致过度增殖。