氧化型低密度脂蛋白通过下调TET2抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移

目的探讨TET2在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移中的作用及其机制。方法分别以0、25、50、75 mg/L ox-LDL孵育HUVEC 24 h,Western blot检测ox-LDL对HUVEC TET2表达的影响。噻唑蓝法检测TET2对ox-LDL处理的HUVEC增殖的影响;Transwell实验和划痕实验检测TET2干预对HUVEC迁移的影响;免疫荧光法检测TET2干预对HUVEC细胞骨架的影响;Western blot检测HUVEC总Rac1及磷酸化Rac1的表达。结果 ox-LDL呈浓度依赖性地下调TET2的表达。过表达TET2改善ox-LDL对HUVEC增殖和迁移的抑制,低表达TET2进一步抑制HUVEC增殖和迁移。免疫荧光结果表明,ox-LDL促进HUVEC周边致密带的形成,过表达TET2抑制致密带的形成,低表达TET2进一步加强致密带的形成。Western blot结果表明,ox-LDL抑制HUVEC Rac1蛋白的表达,过表达TET2上调HUVEC总Rac1及磷酸化Rac1的水平,低表达TET2进一步降低总Rac1及磷酸化Rac1的水平。结论 ox-LDL通过下调TET2的表达影响细胞骨架,从而抑制HUVEC的增殖和迁移。

孕期运动调节高血压大鼠子代血管平滑肌表型的Ppargc1α去甲基化机制

目的:探讨孕期运动是否抑制高血压大鼠子代血管重构及其可能的表观遗传机制。方法:选用自发性高血压大鼠(SHR)及其正常血压对照大鼠(WKY),同品系进行配种,见栓且阴道涂片见精子确定为配种成功,记为妊娠第1天。孕鼠随机分为安静(p-WKY-SED和p-SHR-SED)组和运动(p-WKY-EX和p-SHR-EX)组,每组25只。运动组进行无负重游泳运动(每天60 min,每周6 d,至妊娠第19天)。每天监测孕鼠进食量和体重;妊娠第21天,一部分孕鼠剖腹取胎鼠监测胎鼠体重和胎盘效率,另一部分孕鼠待自然分娩;雄性子代3月龄时,进行尾动脉无创血压监测,采用HE染色观察肠系膜动脉形态,采用RT-qPCR和Western blot检测肠系膜动脉过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC1α)的mRNA和蛋白水平及TET2蛋白水平,亚硫酸氢盐测序和ELISA分别检测肠系膜动脉Ppargc1α基因(编码PGC1α)甲基化水平和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)水平。结果:孕期运动抑制SHR子代胎盘效率下降(P<0.05),显著降低SHR子代的舒张压和平均动脉压(P<0.05),显著减小SHR子代的血管中膜厚度/内径比值(P<0.01),抑制血管平滑肌收缩表型向合成表型转换(P<0.05),显著上调SHR子代肠系膜动脉减少的PGC1αmRNA和蛋白表达,抑制Ppargc1α基因甲基化(P<0.05);与去甲基化密切相关的TET2蛋白(P<0.05)和5hmC(P<0.01)在SHR子代肠系膜动脉中显著降低,孕期运动显著增加二者水平(P<0.05)。结论:孕期运动可通过增加TET2介导的Ppargc1α基因启动子区去甲基化,抑制高血压大鼠子代成年后血管平滑肌由收缩表型向合成表型转换,缓解其血管重构。

BAP1及TET2蛋白在慢性粒-单核细胞白血病患者骨髓中的表达及其意义

目的探讨BAP1与TET2蛋白在慢性粒-单核细胞白血病(CMML)患者骨髓中的表达及其与CMML预后的关系。方法收集2003年9月至2007年5月上海市中美联合白血病协作组确诊的41例成年CMML患者现存的骨髓石蜡标本,采取石蜡切片免疫组织化学法重新检测BAP1和TET2蛋白表达,同时收集同期确诊的40例成年急性粒-单核细胞白血病(AMML)患者和20例缺铁性贫血(IDA)患者现存的骨髓石蜡标本作为对照,采用相同方法检测TET2和BAP1蛋白表达情况。采用回顾性队列研究方法分析41例CMML患者的临床资料,计数资料的比较采用χ^2检验,采用Pearson相关分析法分析BAP1和TET2蛋白表达间的关系,应用Log-rank检验进行单因素分析,应用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果41例CMML患者中,BAP1阳性表达率为31.7%(13/41),其中CMML-1型患者为28.6%(8/28),CMML-2型为38.5%(5/13);TET2阳性表达率为41.5%(17/41),其中CMML-1型患者为39.3%(11/28),CMML-2型患者为46.2%(6/13)。40例AMML患者中,BAP1阳性表达率为32.5%(13/40),TET2阳性表达率为35.0%(14/40)。20例IDA患者中,BAP1阳性表达率为5.0%(1/20),TET2无阳性表达。CMML-1型和CMML-2型患者间BAP1和TET2阳性表达率差异均无统计学意义(χ^2=0.40,P=0.53;χ^2=0.17,P=0.68)。CMML与AMML患者间BAP1和TET2阳性表达率差异均无统计学意义(χ^2=0.01,P=0.94;χ^2=0.36,P=0.64)。血液系统肿瘤性疾病(CMML+AMML)和血液系统非肿瘤性疾病(IDA)间BAP1和TET2阳性表达率差异均有统计学意义(χ^2=6.01,P<0.05;χ^2=11.04,P<0.01)。Pearson相关分析显示,BAP1和TET2表达之间无相关性(r=0.35,P=0.27)。单因素分析显示,重度贫血(血红蛋白<60 g/L)、单核细胞计数≥2.0×10^9/L、中性粒细胞计数<1.5×10^9/L、染色体异常核型是CMML不良预后因素。BAP1和TET2表达均与CMML患者的预后无关(χ^2=0.28,P=0.600;χ^2=0.53,P=0.460)。结论BAP1及TET2蛋白在CMML患者中均有较高阳性表达率,但其表达均与患者预后无关。