TFⅢA型锌指蛋白及在提高植物耐逆性中的作用

TFⅢA型锌指蛋白属于典型的C2H2型锌指蛋白,锌指区具有CX2-4CX3FX5LX2HX3-5H的保守结构。已有研究表明不同植物的TFⅢA型锌指蛋白在非生物胁迫应答反应中发挥了关键的作用。利用TFⅢA家族锌指蛋白基因进行植物耐逆性的遗传改良,可能是今后植物耐逆基因工程改良的又一个重要方向。

植物TFⅢA类型锌指蛋白的研究进展

锌指蛋白作为一种转录调控因子,在植物的生长发育中起着重要作用.近年来,在克隆植物锌指蛋白基因方面取得了很大进展,特别是对于植物TFⅢA类型锌指蛋白的研究.目前已经获得了近30个TFⅢA类型锌指蛋白的基因克隆.已发现的TFⅢA锌指蛋白参与了一些重要过程的调控,如:形态建成、雄配子产生、胚的发育、胁迫反应等.

水稻TFⅢA型锌指蛋白基因ZFP207的克隆和表达分析

锌指蛋白是一类重要的转录因子,广泛参与植物的生长发育和胁迫应答过程。文章使用生物信息学方法从水稻中预测并克隆了一个TFⅢA型锌指蛋白基因ZFP207(GenBank登陆号:AK063147.1),该基因包含一个567bp的开放阅读框,编码一条188个氨基酸组成的多肽,其编码产物的预测分子量为20.72kDa,等电点为9.67。锌指蛋白ZFP207含有一个典型的TFⅢA型锌指结构,并且在C端含有一个可能具有转录抑制功能的EAR-motif,但不具有任何已知的核定位信号。系统发生分析结果表明,ZFP207与植物中已经发现的单锌指蛋白亲缘关系较近。通过RT-PCR方法分析了ZFP207基因在成株期水稻不同组织中的表达,发现ZFP207在茎和叶中表达量较高,而在穗和根中表达量较低。在酵母中的转录激活实验结果显示,ZFP207在酵母中不具有转录激活功能。

甘蓝型油菜TFⅢA型锌指蛋白基因鉴别和表达模式

植物TFⅢA型锌指蛋白的锌指区含有保守的QALGGH区,属于C2H2型转录因子,参与调控植物生长发育和逆境胁迫应答.参照拟南芥AtZFP基因的C2H2结构域氨基酸序列,采用生物信息学方法鉴定了46个甘蓝型油菜TFⅢA型锌指蛋白基因,分析了基因结构、生化特性、进化关系和基因表达模式.结果表明：42个基因为单锌指蛋白基因,4个为多锌指蛋白基因;40个基因不含内含子,6个基因含内含子;46个基因的氨基酸序列同源性变幅为9.0% ～99.2%,氨基酸序列保守性差异明显,亚类成员间包含相同的保守基序,亚类间的保守基序不同;PlantCARE分析发现其启动子区富含激素、非生物胁迫及特定生理过程响应的顺式作用元件;RNA-seq分析表明,部分基因在甘蓝型油菜品种中双11号的根、初花期雌蕊和角果中特异表达.

TFⅢB亚单位Bdp1在甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中作用的研究

目的探讨TFⅢB亚单位Bdp1在5-甲基硫代腺苷(methylthioadenosine,MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的抑制过程中的作用。方法采用Realtime PCR方法分析TFⅢB亚单位Bdp1基因mRNA水平的变化的转录水平;采用Western Blot方法分析TFⅢB亚单位Bdp1蛋白水平的变化;采用转染及荧光素酶报告基因的检测方法检测Bdp1基因荧光素酶活性。结果 MTA对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中,TFⅢB亚单位Bdp1在mRNA水平(0.441±0.03,P=0.001)和蛋白水平出现了明显的下调,同时报告基因Bdp1基因荧光素酶活性也出现了明显的下调(0.460±0.08,P=0.001)。结论 MTA对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中,TFⅢB亚单位Bdp1蛋白的下调可能起到重要作用。

我国东北地区两家系原发性开角型青光眼的OPTN基因新突变研究

目的研究我国东北地区两家系原发性开角型青光眼（POAG）的致病基因并确定其基因突变位点。方法病例对照实验。对两家系POAG患者进行临床研究和系谱分析。采集L家系6例患者和6例健康成员与C家系4例患者和4例健康成员的静脉血，提取基因组DNA。通过连锁分析，确定致病基因的染色体位点后，应用聚合酶链反应（PCR）扩增OPTN基因外显子，直接测序确定致病的基因突变位点。结果L家系POAG患者的OPTN基因第10外显子发生错义突变，1274位点AAA变为GAA，对应的赖氨酸替换为谷氨酸（Lys322Glu）。L家系中健康成员、C家系全部成员及87名正常人均未发现该位点突变。结论OPTN基因新突变（Lys322Glu）是L家系POAG的致病基因。

乳腺癌中KiSS-1与核因子-κBp50和基质金属蛋白酶9的表达之相互关系及其临床病理意义

目的探讨KiSS-1、核因子（NF）-κBp50和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在乳腺癌组织中的表达和相互关系及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EliVision法检测152例标本（乳腺癌92例，乳腺增生30例，癌旁乳腺30例）和伴有癌转移的腋窝淋巴结54枚中KiSS-1、NF—κBp50及MMP-9蛋白表达情况。应用原位杂交方法检测50例乳腺癌组织、20例癌旁乳腺组织中KiSS-1 mRNA的表达。应用CMIAS真彩图像分析仪对免疫组织化学和原位杂交结果进行积分吸光度（IA）值测定，并计算其平均IA值。结果（1）与癌旁乳腺组织表达比较，KiSS-1基因在乳腺癌组织学分级Ⅰ～Ⅱ级中（13．59±6．24）明显高于Ⅲ级（9．53±4．57）、TNM分期高（Ⅰ～Ⅱ期12．35±6．15，Ⅲ～Ⅳ期7．53±4．93）、在淋巴结转移率高的乳腺癌中的表达减弱（9．61±5．25，无转移组为13．06±5．89）甚至缺失；其在淋巴结转移灶（3．47±1．59）中的表达（IA值）明显低于其相应的原发灶（10．02±3．80）。乳腺癌组织中KiSS-1mRNA表达（10．84±4．90）与KiSS-1蛋白表达（11．67±6．22）有较好的一致性。（2）NF-κBp50、MMP-9在乳腺癌组织中表达上调，其上调程度随着乳腺癌分化程度的降低、TNM分期的增加、淋巴结转移及瘤块增大而逐渐增高。结论KiSS-1蛋白在乳腺癌分化程度低、淋巴结转移组中的表达下降，并分别与NF—κBp50、MMP-9蛋白表达呈负相关；NF-κBp50与MMP-9蛋白在乳腺癌中表达呈正相关，KiSS-1蛋白可能参与了乳腺癌的转移扩散。