苯线磷和甲胺磷对TF-1细胞乙酰胆碱酯酶影响的差异

有机磷农药(organophosphorus pesticides,OPs)具有较强的神经毒性,主要是通过抑制胆碱能神经传导中的关键酶,乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC 3.1.1.7)的活性来实现的。苯线磷和甲胺磷是广泛用于农业生产的OPs,但对它们抑制人AChE活性的机制研究十分有限。本研究应用2种不同的给药方式,包括对培养的细胞和细胞裂解液进行药物处理,明确苯线磷和甲胺磷对人血液白血病细胞系TF-1中AChE酶活性的直接作用和对AChE基因转录表达的影响,从而揭示苯线磷和甲胺磷抑制AChE酶活性的机制与两者的差别。结果表明,高浓度苯线磷(10^(-3) mol·L^(-1))处理后,TF-1细胞活力降低,同时诱导细胞凋亡和坏死;而所有被试浓度的甲胺磷对细胞活力均没有明显影响。此外,对于TF-1细胞裂解液中的AChE,苯线磷和甲胺磷短期处理(1 h和5 h)均可产生直接抑制作用,其中苯线磷的抑制作用略强于甲胺磷(孵育1 h,IC_(50)值分别为1.181×10^(-6) mol·L^(-1)和2.837×10^(-6) mol·L^(-1))。对培养细胞的药物处理实验结果显示,苯线磷和甲胺磷(10^(-6) mol·L^(-1)和10-5 mol·L^(-1))处理24 h后,均显著降低了TF-1细胞的AChE酶活性,苯线磷的抑制率略高于甲胺磷。而与对酶活性的抑制作用相反,苯线磷和甲胺磷对TF-1中AChE H转录本表达有轻微的上调作用,以甲胺磷更为明显,提示存在反馈调节机制。总结上述结果,我们发现苯线磷对TF-1细胞中AChE的抑制作用总体略强于甲胺磷,而甲胺磷对AChE基因表达的反馈上调作用更明显。从而首次从对AChE酶的直接抑制作用和生物合成影响的不同角度阐述了2个OPs对AChE影响的差异,为进一步的分子机制研究提供了实验数据。

凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位

目的 :探讨凋亡相关分子TFAR19在TF 1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法 :以TFAR19的单克隆抗体为工具 ,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段 ,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位 ,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine,PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果 :TFAR19蛋白在撤除GM CSF的TF 1细胞中表达水平显著增高 ,伴有明显的核转位现象 ,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论 :TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一 ,这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应 。

TF-1细胞凋亡相关基因的研究

利用近年来发展起来的代表差异分析（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ）技术研究了在人红白血病细胞株ＴＦ１细胞撤除细胞因子后进入凋亡时诱导表达的基因．发现了６个新基因片段．其中有三个经与ＧｅｎＢａｎｋｎｒ和ｄｂＥＳＴ查询均没有发现同源性，已经向ＧｅｎＢａｎｋ进行登记，登记号分别为Ｕ８３２０８，Ｕ８３２７９，Ｕ８３３９７．此外还发现一批已知基因的表达与凋亡相关，其中包括Ｈｏｕ和人硫氧还原蛋白等，提示它们在凋亡中可能起作用．这项工作为进一步研究凋亡相关基因打下了良好基础．通过ＲＤＡ的研究结果，有可能发现人白血病细胞凋亡的特异标记蛋白或发挥作用的重要蛋白，以期为白血病治疗提供理论基础．

TF-1细胞凋亡相关基因19在系统性红斑狼疮发病中的作用

目的 :探讨TF - 1细胞凋亡相关基因 1 9(TFAR1 9)在系统性红斑狼疮 (SLE)发病诱因中的作用及其与SLE病情的关系。方法 :应用倒置相差显微镜、Ladder方法、Westernblotting方法、荧光免疫显微镜、ELISA方法检测中波紫外线 (UVB)诱导HaCaT细胞凋亡时TFAR1 9的表达及其与SLE患者病情的关系。结果 :在剂量为 30mJ/cm2的UVB照射 2 4h后 ,HaCaT细胞开始凋亡 ,TFAR1 9在此过程中有表达 ,发现活动期SLE患者血清中TFAR1 9的抗体值高于稳定期和正常对照组的值 (P≤ 0 .0 5)。结论 :在UVB诱导角质形成细胞HaCaT凋亡的过程中 ,有TFAR1 9的参与并发挥了作用 ,提示TFAR1

撤除粒-巨噬细胞集落刺激因子对TF-1细胞生长的影响

采用MTT实验测定撤除细胞因子后TF 1细胞的增殖活性 ,经流式细胞仪、透射电镜观察撤除细胞因子对TF 1细胞凋亡的作用及其形态学变化。采用荧光微孔板读数仪测定凋亡过程中Caspase 3活性的改变。结果发现 ,撤除细胞因子后 4 8h ,细胞存活率为正常培养时的 4 8 8% ;电镜显示TF 1细胞出现了凋亡典型的变化。细胞凋亡率在撤除因子后 2 4h、4 8h时分别为 2 1 2 3%和 71 36 % ,TF 1细胞被阻滞在G0 G1 期。细胞内Caspase 3活性在撤除因子后 12h、36h时明显升高 ,荧光度分别为 6 32 1和 1782 3。结果表明 ,撤除因子后可导致TF 1细胞凋亡 ,Caspase 3活化参与了此凋亡过程。另外通过MTT实验观察到一种新型造血刺激因子粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF) 白细胞介素 3(IL 3)融合蛋白可维持TF

TF-1细胞增殖法测定神经生长因子生物学活性的建立与应用

目的:建立并优化用于检测神经生长因子(NGF)生物学活性的TF-1细胞增殖法,并应用于重组人NGF和鼠NGF制品的活性检测。方法:将梯度稀释的人NGF国际参考品与TF-1细胞相作用,通过MTT法测定细胞增殖情况,建立测定NGF活性的TF-1细胞增殖法;从粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)残留、NGF加样稀释率、TF-1细胞接种浓度、培养时间等多个环节对实验条件进行优化;将建立的TF-1细胞增殖法应用于重组人NGF和鼠NGF的活性检测。结果:建立了用于NGF活性检测的TF-1细胞增殖法;实验条件优化结果表明,在无GM-CSF残留的情况下,将稀释至1/4的NGF样品与4×105/mL的细胞相互作用,培养48 h,可以得到更为典型的的四参数曲线;利用条件优化后建立的检测方法对重组人NGF和鼠NGF各2批样品分别进行4次测定,结果平均值分别为10.01×105、10.81×105和3.55×105、3.30×105U/mg,变异系数分别为7.5%、7.2%和7.2%、9.1%,检测结果稳定均一,表明检测方法具有很好的重复性。结论:建立并优化了用于NGF活性检测的TF-1细胞增殖法,该方法操作简便、定量准确、重复性好、稳定可靠,可有效应用于人NGF和鼠NGF制品的活性检测。

人红系分化相关基因高表达提高TF-1细胞系存活能力

目的:检测人红系分化相关基因(EDAG)对TF-1细胞株存活能力的影响。方法:采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTS法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:用表达GFP的质粒电转染TF-1细胞株,通过综合评价转染效率和细胞状态,确定最佳转染条件为1350 V电压电击30 ms,电击次数为1次;对得到的细胞稳定株进行检测,其内源EDAG的mRNA和蛋白水平均上调;将细胞稳定株在撤除细胞因子状态下培养,过表达EDAG后细胞存活能力增强、凋亡减少。结论:用电转染方式高效转染TF-1细胞,通过筛选得到过表达EDAG的稳定细胞株,并证实撤除细胞因子后过表达EDAG能提高TF-1细胞系的存活及抗凋亡能力。

TF-1细胞增殖特性与信号蛋白JAK2/STAT3表达研究

目的 探索JAK/STAT途径活化与细胞增殖和凋亡之间的关系。方法 通过表达内源性GM CSF受体的TF 1细胞 ,观察细胞增殖与凋亡 ;建立免疫沉淀和Westernblot印迹方法 ,检测经GM CSF 10 0ng/ml瞬时诱导的TF 1细胞信号蛋白JAK2和STAT3酪氨酸磷酸化情况。结果 经过GM CSF刺激 ,细胞不但免于凋亡 ,TF 1细胞还呈现剂量与时间信赖性的增殖反应。当耗竭细胞因子 6～ 12h后 ,倒置显微镜下TF 1细胞呈现折光性改变 ,细胞开始凋亡 ,呈现凋亡特征性形态改变和出现DNA梯形条带 ,而加入 0 .1ng/ml的GM CSF ,TF 1细胞即开始进入增殖状态 ,提示GM CSF对细胞具有凋亡保护作用。经过 10 0ng/mlGM CSF的瞬时诱导 ,在分子量 130kd区域见到JAK2蛋白条带 ,显示GM CSF可诱导TF 1细胞磷酸化JAK2表达 ;而在分子量 90kd区域未见到STAT3蛋白条带 ,显示无磷酸化STAT3表达 ;而未经GM CSF诱导的TF 1细胞 ,既无磷酸化JAK2也无磷酸化STAT3表达。结论 GM CSF为TF 1细胞增殖诱导和凋亡保护所必需 ;GM CSF诱导的TF

硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SALL4基因表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导人红系白血病细胞株TF-1凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞仪检测Annexin V-FITC细胞凋亡率。(5)流式细胞仪分析细胞周期。(6)RT-PCR检测Sall4 mRNA的表达水平。结果:(1)硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制TF-1细胞生长,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h和48 h的药物半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration of a substance,IC50)分别为52 nmol/L和27 nmol/L。(2)显微镜下观察细胞皱缩变小,细胞密度明显下降。(3)电镜下观察可见凋亡小体。(4)Annexin V-FITC检测显示随着硼替佐米作用浓度的增加,凋亡率增加,呈剂量依赖关系(P<0.05)。(5)流式细胞仪分析细胞周期,随着硼替佐米作用时间的增加,G2/M期细胞比例逐渐增高,而G0/G1和S期细胞比例则逐渐减少,呈时间依赖关系(P<0.05)。(6)RT-PCR结果示Sall4基因在TF-1细胞上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加,Sall4 mRNA与β-actin mRNA表达量的积分光密度比值(Integral optical density ratio,V/B)水平下降(P<0.05)。结论:硼替佐米能抑制TF-1细胞增殖,诱导其凋亡,呈时间-剂量依赖关系。Sall4基因在TF-1细胞株上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加表达水平下降,呈时间-剂量依赖关系。

TF-1细胞饥饿在IL-4生物学活性测定中的应用

目的研究细胞先饥饿后再用来测定生物学活性对实验灵敏度的影响。方法用TF-1细胞/M TT比色法〔2〕测定重组人白细胞介素4(IL-4)的生物学活性,观察最大吸光度与最小吸光度之差,利用此差值就可以判断实验的灵敏度。结果在测定结果中,适当的饥饿比没有饥饿的吸光度差值大。结论用适当饥饿的细胞测定生物学活性灵敏度更高。

依赖IL-5增殖的细胞株TF-1-9E3的驯化及验证

在IL-5靶点药物的发现阶段,为评价候选药物的阻断活性,需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞,其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体,因此,研究以GM-CSF依赖的TF-1细胞株为来源,用IL-5替换TF-1细胞生长必需的生长因子GM-CSF,降低血清含量进行细胞驯化培养传代。通过35 d的细胞驯化及3~5次降血清传代培养,采用有限稀释法分离单克隆,一共得到14个单克隆细胞株。对14株细胞进行FACS检测,其中,有9个细胞株IL-5Rα表达量升高。对IL-5Rα过表达的细胞株进行IL-5增殖检测,结果表明,相比8%FBS得到的单克隆,6%FBS得到的单克隆对IL-5刺激更敏感。通过单因素优化实验,细胞增殖检测最优的细胞接种量为2×10^(4)个/孔,FBS含量为3%,血清品牌为Gibco。驯化后的细胞TF-1-9E3对IL-5的剂量-效应曲线的信噪比为3.19,Emax区间为2.15,可用于IL-5的生物学活性检测及IL-5与IL-5Rα的抗体阻断活性检测。

苦参碱诱导白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响

目的:探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导急性髓性白血病M6型人红白血病TF-1细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响。方法:将不同质量浓度(0.5,1.0,1.52,.0 g.L-1)的Mat分别作用于体外培养的TF-1细胞不同时间(24,48,72 h),MTT检测Mat对细胞增殖的影响;流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定细胞周期;Annexin V和PI双染色法检测细胞凋亡;逆转录RT-PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测SALL4 mRNA表达。结果:Mat(0.5～2.0 g.L-1)作用TF-1细胞24,48,72 h后均有增殖抑制作用(P<0.01),在该浓度范围内抑制率呈剂量和时间依赖4,8 h半数抑制浓度(IC50)为1.0 g.L-1;Mat作用TF-1细胞48 h后,与对照组相比G0/G1期细胞比例增加,S期细胞下降(P<0.01);流式细胞术检测细胞凋亡率分别为8.6%1,1.21%,15.26%,17.63%,与对照组(5.05%)相比较,差异具有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示SALL4mRNA表达量与β-actin(内参照)表达量的比值,随Mat剂量增加而显著减小(P<0.01)。结论:Mat在一定浓度和时间范围内对TF-1细胞具有增殖抑制作用,其机制是使细胞发生G0/G1期阻滞;抑制SALL4基因的表达,诱导细胞凋亡。

TF-1细胞凋亡相关基因19与甲状腺肿瘤之间关系的初步探讨

目的 探讨TF 1细胞凋亡相关基因 19(TFAR19)在甲状腺腺瘤 (TA)和甲状腺乳头状癌 (PTC)中是否有表达及其细胞定位。方法 6例TA和 6例PTC患者 ,经手术得到甲状腺肿瘤组织标本并获病理诊断 ,以 6例TA患者的瘤周正常甲状腺组织作为对照。TFAR19表达的检测采用免疫组化染色。结果 TFAR19在正常甲状腺组织中几乎未见表达 ;在TA组的甲状腺肿瘤组织中呈强阳性表达 ,而在PTC组中呈阴性表达。结论 TFAR19凋亡通路在TA中被激活 ,而在PTC中则受到抑制 ,提示细胞凋亡与增殖之间的平衡失调可能在PTC的发病机制中具有重要作用。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性测定TF-1细胞/MTT比色法的优化及其验证

目的对检测重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF）生物学活性的TF-1细胞/MTT比色法进行优化及验证。方法以rh GM-CSF依赖细胞株TF-1为靶细胞,采用MTT比色法测定rh GM-CSF生物学活性,对比色法中裂解液种类、裂解时间、细胞浓度、MTT作用时间等进行优化,并对优化后的方法进行准确度和精密度验证。结果优化后的TF-1细胞/MTT比色法：将供试品及标准品稀释至18 IU/ml,做2倍系列稀释,共8个稀释度,50μl/孔;加入6×10^5个/ml TF-1细胞悬液,50μl/孔,37℃培养48-52 h;加入MTT溶液,20μl/孔,37℃培养5 h;加入15%SDS裂解液,150μl/孔,裂解过夜,检测A570值。3种不同浓度的rh GM-CSF标准品活性测定结果回收率为104%;rh GM-CSF标准品6次检测活性平均值为18.6 IU/ml,变异系数为5.37%;rh GM-CSF标准品3 d活性检测结果的平均变异系数为5.18%。结论采用优化后MTT比色法检测rh GM-CSF生物学活性,准确度和精密度均较高,可应用于rh GM-CSF活性的检测。

人重组IL-3受体α链片段的表达及其对TF-1细胞的刺激活性

ＩＬ－３是一种造血生长因子，通过其受体α和β两条链向细胞内传递信号。为研究ＩＬ－３，ＩＬ－３Ｒα，β三者之间的相互作用模式，利用大肠杆菌系统表达了４种ＩＬ－３Ｒα胞外片段：ＩＬ－３Ｒ－Ｐ（氨基酸１～３０７），ＩＬ－３Ｒ－２（１～２６３），ｎＩＬ－３Ｒ－２（１～７５），ｃＩＬ－３Ｒ（１０５～２６３）。活性研究发现，除ｎＩＬ－３Ｒ－２外，其余３个片段对ＩＬ－３依赖性细胞株ＴＦ－１有不同程度的刺激活性，并且ＦＩＴＣ标记的ＩＬ－３Ｒ－Ｐ可与ＴＦ－１细胞结合，βｃ真核表达质粒转染ＣＴＬＬ细胞后，ＦＩＴＣ标记的ＩＬ－３Ｒ－Ｐ可与之结合。实验结果提示ＩＬ－３Ｒα链存在潜在的β链结合位点，一旦暴露可以激活β链传递信号。

补青颗粒联合石决明水提液对白内障大鼠眼组织细胞中TFAR19和JNK3蛋白表达的影响

目的探讨补青颗粒联合石决明水提液对白内障大鼠眼组织细胞中TF-1细胞凋亡相关基因19(TFAR19)和c-Jun氨基末端激酶(JNK3)蛋白表达的影响。方法选择无特定病原体(SPF)级SD大鼠48只,雌雄各半,根据随机数字表法分为4组:正常组、白内障模型组、阳性对照组和实验组,每组各12只。正常组采用生理盐水滴眼,其余3组均通过亚硒酸钠诱导白内障模型,模型建立后白内障模型组采用生理盐水滴眼,阳性对照组采用莎普爱思滴眼和实验组采用0.25%石决明水提液滴眼+2 g/mL补青颗粒水溶液灌胃,灌胃给药每日2次,滴眼每日1次,每次1滴,持续干预30 d。分别于干预3、10、20、30 d后,蛋白质印迹法检测各组大鼠晶状体组织中TFAR19、JNK3以及pJNK3的表达,检测各组大鼠血清氧化应激指标丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量。结果干预3、10、20、30 d后,阳性治疗组和实验组晶状体组织中TFAR19相对表达量和p-JNK3/JNK3比值均随治疗时间延长而显著降低(P<0.05)。干预20~30 d后,4组大鼠晶状体组织中TFAR19相对表达量为:正常组<实验组<阳性对照组<白内障模型组,且组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预30 d后,4组大鼠视网膜组织中p-JNK3/JNK3水平比较:正常组<实验组<阳性对照组<白内障模型组,且组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠血清中MDA水平比较:正常组<实验组<阳性对照组<白内障模型组,GSH-Px和T-SOD则为:白内障模型组<阳性对照组<实验组<正常组,且组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补青颗粒联合石决明水提液可通过抑制大鼠晶状体TFAR19蛋白表达和视网膜JNK3磷酸化,并进一步调节氧化应激反应水平,从而对白内障大鼠发挥治疗作用,且在本研究时间范围内其作用效果随时间增加而增强。

凋亡相关新基因 TFAR19 的 cDNA 克隆、表达和功能研究

利用ＲＤＡ技术从人白血病细胞ＴＦ－１中克隆成功一个与凋亡相关的新基因ＴＦＡＲ１９。序列分析表明，ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ全长５５９ｂｐ，其中２５—３９９ｂｐ编码１２５个氨基酸的蛋白质。ｍＲＮＡ斑点杂交分析表明ＴＦＡＲ１９在５０种组织中均有不同程度的表达。在大肠杆菌中表达并纯化了重组ＴＦＡＲ１９蛋白质，制备了多克隆抗体，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ发现ＴＦＡＲ１９蛋白在凋亡的ＴＦ－１细胞中高表达。瞬时转染ＴＦＡＲ１９正义基因后，ＴＦ－１细胞去细胞因子后凋亡速度增加。研究表明它能抑制胃癌细胞株８０３细胞和Ｈｅｌａ细胞的生长，促进它们的去血清所致的凋亡。

循经针刺联合非手术脊柱减压对腰椎间盘突出症腰椎功能及血清TFAR19、Apaf-1的影响

目的探讨循经针刺联合非手术脊柱减压对腰椎间盘突出症腰椎功能及血清TF-1细胞凋亡相关基因19(TFAR19)、凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)的影响。方法选取2018年6月—2020年7月该院收治的94例腰椎间盘突出症患者,随机分为对照组与观察组,各47例。对照组给予非手术脊柱减压治疗,观察组在对照组基础上另给予循经针刺治疗。对比治疗前、治疗3个月后腰椎功能[日本骨科协会腰椎功能(JOA)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分]及治疗前、治疗1个月、治疗3个月的腰腿疼痛评分[视觉模拟评分法(VAS)],并比较临床疗效及治疗前、治疗1个月、治疗3个月的椎旁肌肉肌电变化情况,另比较治疗前、治疗3个月后血清TFAR19、Apaf-1水平变化情况及治疗期间不良事件发生情况。结果两组治疗3个月后JOA评分均高于治疗前(P<0.05),观察组治疗3个月后高于对照组(P<0.05);两组治疗3个月后ODI评分均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗3个月后低于对照组(P<0.05);两组治疗1个月、3个月的VAS评分均低于治疗前(P<0.05),治疗3个月的VAS评分均低于治疗1个月(P<0.05);观察组治疗1个月、3个月的VAS评分均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率高于对照组(P<0.05);两组治疗1个月、3个月的竖脊肌及多裂肌积分肌电值(IEMG)、平均振幅、平均频率斜率均高于治疗前(P<0.05),治疗3个月均高于治疗1个月(P<0.05);观察组治疗1个月、3个月的竖脊肌及多裂肌IEMG、平均振幅、平均频率斜率均高于对照组(P<0.05);两组治疗3个月后血清TFAR19、Apaf-1水平均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗3个月后血清TFAR19、Apaf-1水平均低于对照组(P<0.05);两组治疗期间不良事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论循经针刺联合非手术脊柱减压治疗腰椎间盘突出症患者,可明显减轻患者腰腿疼痛感,改善腰椎功能及椎旁肌肉肌力,提升椎旁肌群稳定性,降低血清TFAR19、Apaf-1水平,提高临床疗效,且安全性良好。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子效价测定中最佳细胞密度的探讨

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rh GM—CSF)效价的测定是采用 TF—1 rh GM—CSF 依赖株细胞,该细胞的增殖与 rh GM—CSF 浓度成正比,用 MTT 法测定细胞增殖程度,反映 rh GM—CSF 的活性。在测定 rh GM—CSF 的效价过程中 TF—1细胞的密度对实验结果有直接影响。

苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响

目的探讨苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱(0.5、1.0、2.0 g/L)处理TF-1细胞,另设对照组(不加苦参碱)。苦参碱作用48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组TF-1细胞中SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的表达水平,并分析SALL4基因与β-catenin、C-myc及Cyclin DI表达的相关性;Western blot法检测各组TF-1细胞中SALL4蛋白的表达水平。结果经不同浓度苦参碱处理48 h后,TF-1细胞中SALL4、β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达水平及SALL4蛋白的表达水平与对照组相比,均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.05);SALL4基因与β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达明显相关(r s值分别为0.912、0.818和0.832,P均<0.01)。结论苦参碱对TF-1细胞中SALL4基因和蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的抑制可能在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中起重要作用。