重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性测定TF-1细胞/MTT比色法的优化及其验证

目的对检测重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF）生物学活性的TF-1细胞/MTT比色法进行优化及验证。方法以rh GM-CSF依赖细胞株TF-1为靶细胞,采用MTT比色法测定rh GM-CSF生物学活性,对比色法中裂解液种类、裂解时间、细胞浓度、MTT作用时间等进行优化,并对优化后的方法进行准确度和精密度验证。结果优化后的TF-1细胞/MTT比色法：将供试品及标准品稀释至18 IU/ml,做2倍系列稀释,共8个稀释度,50μl/孔;加入6×10^5个/ml TF-1细胞悬液,50μl/孔,37℃培养48-52 h;加入MTT溶液,20μl/孔,37℃培养5 h;加入15%SDS裂解液,150μl/孔,裂解过夜,检测A570值。3种不同浓度的rh GM-CSF标准品活性测定结果回收率为104%;rh GM-CSF标准品6次检测活性平均值为18.6 IU/ml,变异系数为5.37%;rh GM-CSF标准品3 d活性检测结果的平均变异系数为5.18%。结论采用优化后MTT比色法检测rh GM-CSF生物学活性,准确度和精密度均较高,可应用于rh GM-CSF活性的检测。

MTT比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、MALAT1、HOTAIR及UCA1的影响

目的探讨噻唑蓝(MTT)比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)基因及尿路上皮癌相关1(UCA1)的影响。方法按MTT法的相关操作原则与相关流程提取膀胱癌患者的苦瓜MAP30蛋白后进行克隆、表达及纯化处理,接着提取其处理膀胱癌5637细胞并进行MTT检测。探析苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖和对MALAT1、HOTAIR及UCA1表达的相关性。结果抑制率:膀胱癌5637细胞增殖时所产生的抑制率越高时,MAP30蛋白浓度也越高,且时间越长,即MAP30蛋白浓度与膀胱癌5637细胞增殖呈正比(P<0.05)。凋亡率:膀胱癌5637细胞凋亡随MAP30浓度递增而逐渐上升,且MAP30浓度(培养48 h)为400μg/mL时,膀胱癌5637细胞凋亡率达到最高,MAP30浓度与膀胱癌5637细胞凋亡呈正比(P<0.05)。膀胱癌5637细胞lncRNA MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平随苦瓜MAP30蛋白浓度的递增而逐渐降低,检测时间为48 h且苦瓜MAP30蛋白浓度为400μg/mL时上述三项指标的表达水平均显著低于48、24 h的其他苦瓜MAP30蛋白浓度(P<0.05)。结论苦瓜MAP30蛋白对膀胱癌5637细胞增殖的抑制和凋亡诱导方面有较好的效果,且可下调MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平。

MTT比色法测定Vero毒素-1的CD_(50)

〔目的〕测定Vero毒素 - 1对Vero细胞的毒性。〔方法〕用MTT法测定Vero毒素 - 1Vero细胞的毒性。〔结果〕Vero毒素 - 1的CD50 为 1pg。〔结论〕MTT法方法简便 ,灵敏度高 ,且没有同位素的污染 ,是测定Vero毒素 - 1细胞毒性的一个简便方法。

改进的MTT比色分析法在检测白细胞介素—1活性中的应用

本文应用改进 MTT 的比色分析法检测白细胞介素—_1(IL—_1)活性,并与传统的~3H—TdR 掺入法相比较,证实两者有较好的一致性。而改进的 MTT 比色分析法具有简便,快速,无需使用放射性同位素的优点,便于推广使用。

人参皂苷Rg_1及其肠内菌代谢产物Rh_1对小鼠免疫细胞功能的影响

目的 初探人参皂苷Rg1 及其肠内菌代谢产物Rh1 对正常小鼠免疫功能的影响。方法 用Rh1 与Rg1 分别处理脾T细胞 ,B细胞及腹腔巨噬细胞 (Mφ) ;MTT比色法测T和B细胞增殖能力 ;中性红比色法测Mφ的吞噬功能 ;Griess法测Mφ释放NO的水平。 结果 Rh1 能促进脾细胞增殖、下调ConA诱导的T细胞增殖 ;Rh1 与Rg1 对LPS诱导的B细胞增殖均无明显作用 ;Rg1 和Rh1 能提高Mφ的吞噬能力和促进NO的释放。 结论 Rg1 及其代谢产物Rh1 可共同作用于T细胞和Mφ而产生免疫调节作用。

RNA干扰阻断cyclin D1表达抑制结肠癌细胞增殖

目的：使用RNA干扰技术阻断人结肠癌细胞cyclin D1的表达，检测其对细胞生长增殖的影响和机制。方法：将人结肠癌细胞株HT-29分成3组，antisense组（转染反义链组）、sense组（转染正义链组）和对照组，免疫沉淀和蛋白质印迹法观察cyclin D1 siRNA对细胞cyclin D1蛋白质表达的影响，并对蛋白质电泳图像进行分析，MTT比色法绘制细胞生长曲线，^3H-TdR技术和流式细胞技术观测细胞周期变化。结果：反义siRNA有效抑制了cyclin Dl蛋白质表达，MTT实验显示，转染反义siRNA的细胞，生长代谢减慢，与对照组细胞差异显著（P〈0．01），而antisense组细胞24h的^3H-TdR渗入量，G0／G1期和S期细胞较对照组和sense组明显减少（^3H-TdR：1181.8±117.97 VS 1798.4±55.36，1851.4±83.46；P〈0.01;G0／G1期：79.31％ VS 60.87％，59.14％；S期：13.67％ VS 26.42％．27.93％：P〈0.01）。结论：RNA干扰技术能有效减弱cyclin D1蛋白质表达，使细胞周期受阻，并抑制结肠癌细胞的生长增殖。

蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株增殖的影响

目的:观察蒙药童格勒格-1(TGLG-1)四种粗提物对大鼠正常肝细胞BRL株增殖的影响。方法:制备出蒙药童格勒格-1的乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚的提取物;体外培养大鼠正常肝细胞BRL株,通过MTT比色法观察蒙药童格勒格-1提取物对大鼠肝细胞体外毒性的量效关系。结果:蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠肝细胞增殖的影响都表现为具有一个最小抑制浓度,乙醇提取物为0.3 mg/mL,正丁醇提取物为0.1 mg/mL,乙酸乙酯和石油醚提取物都为1×10-2mg/mL。在最小抑制浓度时,四种粗提物对细胞的抑制率与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05)。在最小用药浓度1×10-3mg/mL和每个最小抑制浓度之间,每种药都呈现出随着用药浓度增加,细胞抑制率降低的趋势。而在每个最小抑制浓度和最大用药浓度0.5 mg/mL之间,每种药都呈现出随着用药浓度增加,细胞抑制率升高的趋势。结论:蒙药童格勒格-1四种粗提物对大鼠肝细胞BRL株增殖的影响呈现出低剂量促进增殖,高剂量抑制为特征的双相剂量-效应关系。

白细胞介素1α对鼠甲状腺细胞增殖的影响

目的 :观察 TSH存在和缺乏时白细胞介素 - 1α( IL- 1α)对鼠甲状腺细胞增殖的影响。 方法 :FRTL - 5细胞培养 ,经不同浓度 IL - 1α(含 TSH或不含 TSH)孵育 ,用四氮唑蓝 ( MTT)比色法检测细胞增殖。 结果 :在无 TSH条件下 IL- 1α2 0～ 2 0 0 0 k U/ L,对 FRTL- 5细胞无明显促增殖作用 ;在 TSH存在时 IL- 1α2 0和 2 0 0 k U/ L 对 FRTL- 5细胞增殖亦无明显抑制作用 ,IL- 1α2 0 0 0 k U/ / L则可显著抑制 TSH介导的 FRTL- 5细胞增殖。 结论 :本研究提示较高浓度的 IL-1α能抑制

不同来源甲硫氨酸维B_1注射剂体外细胞毒性的比较与分析

目的:比较不同来源甲硫氨酸维B_1注射剂体外细胞毒性的差别并寻找差别形成的主要原因。方法:将不同来源甲硫氨酸维B_1注射剂不同浓度的稀释液与小鼠成纤维细胞L-929接触培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性,计算相对增殖率,并进行细胞毒性评价。建立甲硫氨酸维B_1注射剂中枸橼酸含量的高效液相色谱检测方法,考察枸橼酸含量与制剂细胞毒性的相关性。结果:7个生产厂家的甲硫氨酸维B_1注射液细胞毒性无明显差别。12个生产厂家的注射用甲硫氨酸维B_1中有11个厂家的样品不同浓度组对L-929的细胞毒性级别为1级或2级。但J厂家的注射用甲硫氨酸维B_1样品(20 mg·mL^(-1)和10 mg·mL^(-1))对L-929的细胞毒性级别为4级,表现为重度毒性。枸橼酸质量浓度3,1.5,0.75 mg·mL^(-1)的相对增殖率分别为7%、45%、74%,而对应的含等量枸橼酸的制剂浓度(以甲硫氨酸计)20,10,5 mg·mL^(-1)的相对增殖率分别为6%、28%、53%,细胞毒性试验结果吻合。结论:不同厂家生产的甲硫氨酸维B_1注射剂由于处方工艺不同等,其细胞毒性存在差别。枸橼酸作为注射剂的常用辅料,在高于0.188 mg·mL^(-1)的浓度下存在细胞毒性,枸橼酸含量与细胞毒性呈正相关性,J厂家样品的重度细胞毒性可能主要源于过高浓度的辅料枸橼酸。建议生产厂家降低枸橼酸添加量,以减少制剂的细胞毒性,提高药品的安全性。

5，4＇-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮抗人卵巢癌作用机制

目的探讨金雀异黄素(gertistein)衍生物5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(DOdFMG)抗人卵巢癌(COC1)细胞系细胞作用及机制。方法用MTT比色法检测DOdFMG对COC1、顺铂耐药亚株COC1／DDP及中国仓鼠卵巢(CHO—K1)细胞系细胞的增殖抑制作用。流式细胞仪(FCM)分析经DOdFMG处理后的COC1细胞凋亡。FTTC间接免疫荧光标记FCM检测NF-kappab、Bd-2、Bax蛋白表达。结果(1)MTT比色法证实DOdFMG对COC1、COC1/DDP细胞生长具有抑制作用呈剂量-效应关系，IC50值分别为15μmol/l和20μmol/l，对CHO—K1的IC50值为75μmol/l。DOdFMG对人卵巢癌细胞毒选择指数为5，耐药指数为1．33。(2)FCM分析表明DOdFMG可诱导COC1细胞凋亡；(3)FTTC间接免疫荧光标记流式细胞仪测定经DOdFMG处理后的COC1细胞NF-kappab、Bcl-2蛋白表达降低，Bd-2／Bax降低。结论下调NF-kappab蛋白表达水平即而下调bcl-2蛋白表达这一信号通路可能为DOdFMG抑制人卵巢癌细胞COC1、COC1／DDP细胞增殖和诱导凋亡的分子机制。

白介素6生物活性简易测定法及其临床应用

报道了应用白介素６（ＩＬ－６）依赖细胞株７ＴＤ１，以及ＭＴＴ比色法测定ＩＬ－６生物活性的简便方法。本法测定结果和￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法一致；检测灵敏度为１ｐｇ或１Ｕ／ｍｌ以下；可用于正常人或病人血清中ＩＬ－６水平的测定。采用本法检测了我国正常成人５５例，血清ＩＬ－６活性为６．７５±２．９８Ｕ／ｍｌ；而１１例肺结核排菌者和１２例肺癌患者的血清ＩＬ－６活性分别为１４．２９±８．４６和１７．１４±９．１２Ｕ／ｍｌ，与正常人有显著差别（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．００１），为进一步临床应用奠定了基础。

抗肿瘤药物敏感性实验方法的比较

目的探讨流式细胞术检测抗肿瘤药物敏感性在临床应用的可行性,为新的抗肿瘤药物敏感性检测方法的建立,特异性抗肿瘤药物的筛查提供试验理论基础。方法应用流式细胞凋亡检测技术的SubG1法和AnnexinV法,检测10例Molt4细胞、32例临床胃肠肿瘤细胞在抗肿瘤药物作用下,不同时间点肿瘤细胞的凋亡率。并与噻唑蓝比色(MTT)法进行比较分析。结果AnnexinV法、SubG1法、MTT比色法均可检测到药物对Molt4细胞、临床胃肠肿瘤细胞杀伤率随药物作用时间延长而增加。AnnexinV法、SubG1法、MTT比色法检测药物致细胞最大杀伤率差异无统计学意义(P>0.05)。AnnexinV法检测到药物最大杀伤率的有效时间点明显早于SubG1法MTT比色法,SubG1法检测的有效时间点略早于MTT比色法。结论流式细胞术的AnnexinV法和SubG1法可作为肿瘤药物敏感性有效的检测方法。AnnexinV法比经典MTT比色法具有更敏感、快速、简洁、可靠等优点,有临床应用价值。