过表达TFB1M抑制肝癌细胞迁移和侵袭

目的分析线粒体转录因子B1(transcription factor B1,mitochondrial,TFB1M)在肝癌细胞中的生物学作用,初步探讨其调控HCC恶性转移的分子机制。方法基于TCGA-LIHC(liver hepatocellular carcinoma)和GEO肝癌相关数据库分析TFB1M在肝癌中的表达水平及其与肝癌患者临床特征的关系;基于TFB1M表达水平中位值,将TCGA-LIHC样本分为TFB1M低表达组(n=170)和TFB1M高表达组(n=170),以高表达组为对照组,利用GSEA进行基因集富集分析;构建过表达TFB1M质粒,转染肝癌HepG2和Huh7细胞。采用划痕愈合、Transwell小室等检测过表达TFB1M对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。结果与正常肝组织相比,TFB1M在肝癌组织中表达水平明显降低;且TFB1M表达水平与肝癌患者性别有关。GSEA富集分析结果显示,TFB1M低表达组主要与肝癌增殖增强基因集、肝细胞癌干性增强基因集和细胞外基质组装基因集有关。细胞生物学实验结果显示,与空载组相比,过表达TFB1M后,肝癌细胞迁移和侵袭能力均下降。结论TFB1M在肝细胞癌中呈显著低表达,过表达TFB1M能够显著抑制肝癌细胞迁移和侵袭。

TFB1M在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨线粒体转录因子B1(mitochondrial transcription factor B1,TFB1M)在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法收集112例结直肠癌患者手术切除样本及临床信息,采用免疫组化法检测结直肠癌组织及相应癌旁正常组织中TFB1M的表达,并下载癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库中结直肠癌患者转录组数据及临床信息,分析TFB1M表达与患者临床病理特征及预后的关系。在结直肠癌SW620和HCT116细胞株中干涉及过表达TFB1M后,采用MTS检测细胞增殖能力。结果TFB1M在结直肠癌组织中阳性表达评分显著低于癌旁正常组织[(3.79±1.66)分vs(8.14±1.82)分,P<0.01]。TCGA数据和临床样本信息分析结果显示,TFB1M在Ⅲ+Ⅳ期患者中的表达量均较Ⅰ+Ⅱ期患者显著降低(P<0.01),TFB1M高表达的结直肠癌患者总生存期均优于低表达患者(P<0.05),且TFB1M是影响结直肠癌患者总生存期的独立因素。干涉TFB1M表达后,结直肠癌SW620和HCT116细胞增殖能力均较对照组显著增强(P<0.001);而过表达TFB1M细胞增殖能力均下降P<0.001。结论TFB1M低表达患者预后较差,干涉TFB1M可促进结直肠癌细胞增殖,TFB1M可能作为结直肠癌患者预后预测的生物标志物。

TFB1M影响线粒体质量和肝癌细胞生长与转移

目的:前期研究发现线粒体转录因子B1(mitochondrial transcription factor B1,TFB1M)异常表达可能与肝细胞癌的恶性生长有关,但是其作用机制尚不完全清楚。方法:公共数据分析TFB1M表达水平和预后分析,R包筛选TFB1M高低表达组差异表达基因,并进行功能富集分析。小干扰片段靶向沉默TFB1M基因,qRT-PCR检测肝癌细胞中TFB1MmRNA水平,CCK-8检测细胞活力,EdU检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,Mitotracker染色线粒体,结合共聚焦显微镜逐层扫描构建细胞3D模型,计算单细胞内线粒体质量。结果:TFB1M在肝细胞癌组织中表达水平显著升高,TFB1M高表达肝细胞癌患者预后不良。功能富集结果显示,TFB1M与过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路等有关。细胞学实验表明,沉默TFB1M后,肝癌细胞活力、增殖活性、迁移和侵袭活性均显著降低(P<0.05)。此外,沉默TFB1M后肝癌细胞周期阻滞于G1期。机制研究结果显示,沉默TFB1M后肝癌细胞线粒体质量显著增加。结论:TFB1M可能通过影响线粒体质量在肝癌细胞生长和转移过程中发挥关键作用。

贵州黑山羊、贵州白山羊TFB1M基因第7外显子SNP研究

目的:研究TFB1M基因编码区多态性,筛选出对山羊肉质有显著影响的SNPs位点,以期为山羊品种选种选育提供科学依据。方法:采用DNA池结合PCR直接测序技术分析TFB1M基因在贵州本地山羊的多态性,估算等位基因频率,利用在线软件分析TFB1M基因RNA二级结构及其蛋白二级、三级结构。结果:在TFB1M基因中筛选到2个SNPs:A76G和T221G,其中A76G为同义突变;T221G错义突变,导致编码的半胱氨酸(Cys)变为甘氨酸(Gly)。RNA二级结构最小自由能改变,贵州黑山羊RNA二级结构稳定性增强。贵州黑山羊β折叠链增加1%,α螺旋增加4%,混乱度也上升1%。β转角减少4,α螺旋增加6,自由卷曲减少3,延伸链增加1。结论:SNPs位点对TFB1M基因RNA二级结构及其蛋白结构均有影响。

贵州本地山羊TFB1M基因启动子区多态性生物信息学分析

目的:采用DNA池结合PCR技术,筛选TFB1M基因启动子区SNP位点,并分析其对启动子区的影响。方法:利用多种生物信息学软件预测TFB1M基因核心启动子范围、转录因子结合位点、CpG岛。结果:TFB1M基因启动子区发现1个SNP位点G-234A。TFSEARCH软件预测结果显示TFB1M基因启动子区转录因子ADR1与Sp1位置调换,且ADR1位置的提前导致TFB1M基因转录效率增高。结论:G-234A位点可能影响TFB1M基因转录,试验结果为进一步分析TFB1M基因启动子区功能奠定基础。

新霉素致损小鼠听觉上皮后线粒体转录因子B1与毛细胞凋亡的关系

目的研究新霉素致损小鼠听觉上皮后线粒体转录因子B1（mitochodnrial transcription factor B1,TFB1M）与听觉上皮毛细胞凋亡的关系。方法每次解剖出20只出生1~2 d的新生ICR小鼠40个耳蜗,使用体外无血清培养法培养听觉上皮,培养后分为正常对照组和新霉素致损组（n=20）,然后在新霉素致损4、12、24 h及24 h洗脱后2 d检测TFB1M在听觉上皮细胞核和线粒体中的表达,以及听觉上皮线粒体膜电位的变化和毛细胞的凋亡。结果新霉素致损4 h后,听觉上皮中圈毛细胞形态完整,其线粒体膜电位开始降低;致损12 h,耳蜗听觉上皮线粒体以及细胞核内的TFB1M表达上调,听觉上皮出现毛细胞底圈、中圈大量毛细胞缺失,未缺失处毛细胞出现线粒体膜电位明显降低;致损24 h中圈、底圈毛细胞基本消失,未检测到线粒体膜电位。洗脱后2 d,TFB1M表达较正常对照组降低,基底膜毛细胞未见进一步缺失。而正常对照组在新霉素致损组相对应的时间点上,离体培养的听觉上皮的毛细胞形态完整,排列整齐,线粒体膜电位无改变。新霉素致损12 h,TFB1M在线粒体和细胞核内的表达较4、24 h,洗脱后2 d都明显（P〈0.01）。结论 TFB1M蛋白质水平的表达上调可能导致线粒体功能异常和毛细胞凋亡。

线粒体DNA的转录机制

真核生物的基因由核基因和线粒体基因(mt DNA)共同组成,mt DNA的生物合成是一个非常复杂的过程,需要核基因和mt DNA共同协同调节完成,大多线粒体蛋白在由核基因编码好后经特殊通道输送到线粒体内参与线粒体的各项生物合成。线粒体DNA转录需要核基因编码的几种蛋白,包括一个线粒体RNA聚合酶(POLRMT),线粒体转录因子A(TFAM),线粒体转录因子B1(TFB1M)或者线粒体转录因子B2(TFB2M)两者之一。本文对哺乳动物线粒体转录各因子的功能、各因子间的相互作用以及线粒体转录的调节进行了综述。